大巖桐試管花芽分化與開花影響因素

董璐 李青

(北京林業(yè)大學(xué)，北京，100083)

責(zé)任編輯:任 俐。

大巖桐為苦苣苔科大巖桐屬多年生草本花卉，具有花期長、花型大、花色嬌艷等特點(diǎn)，觀賞價(jià)值及商品價(jià)值高，是人們喜愛的室內(nèi)觀賞花卉。但由于花期集中在夏季，一年中的觀賞時(shí)間僅限于其盛花期;且大巖桐存在花前營養(yǎng)生長時(shí)間較長，具有自花不親和及自交不結(jié)實(shí)現(xiàn)象［1］。而研發(fā)具有新穎視覺效果的大巖桐試管花卉產(chǎn)品，一方面，可開拓大巖桐新的觀賞形式，豐富花卉商品種類;另一方面，探索出較為穩(wěn)定的離體成花體系，為解決大巖桐自花不親和、自交不結(jié)實(shí)問題的試管育種等研究工作奠定基礎(chǔ)，對大巖桐生產(chǎn)及科研具有實(shí)際意義。但目前有關(guān)大巖桐試管開花研究僅報(bào)道過愈傷組織直接誘導(dǎo)再生花芽［2］，鮮有將再生出的植株誘導(dǎo)花芽分化的系統(tǒng)研究;大部分研究集中在快繁體系和再生體系的建立［3-8］。本試驗(yàn)通過對大巖桐(Sinningia speciosa)進(jìn)行成花誘導(dǎo)，研究不同因素對其試管內(nèi)花芽分化的影響，探索出較為穩(wěn)定高頻的離體成花體系，以縮短大巖桐成花時(shí)間，擺脫季節(jié)對其花期的限制，為開發(fā)大巖桐試管花卉產(chǎn)品提供組織培養(yǎng)技術(shù)理論。

1 材料與方法

以組織培養(yǎng)獲得的、經(jīng)4 次繼代，苗徑約為3.5 cm 的重瓣深粉色大巖桐(Sinningia speciosa)無菌試管苗為試驗(yàn)材料。

不同基本培養(yǎng)基對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:分別以MS、WPM、B5、N6、Miller、White 為基本培養(yǎng)基，將生長健壯、長勢一致的試管苗接種于其中，研究不同基本培養(yǎng)基對誘導(dǎo)花芽分化的影響。培養(yǎng)60 d 統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:以WPM 為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度細(xì)胞分裂素6-BA(0.1、0.3、0.5 mg·L-1)、KT(0.1、0.5、1.0 mg·L-1)與不同質(zhì)量濃度生長素IBA(0、0.1、0.2 mg·L-1)、NAA(0、0.1、0.2 mg·L-1)兩兩配比，進(jìn)行完全隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)。培養(yǎng)60 d 后，統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同質(zhì)量濃度6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂配比對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:采用L16(45)正交試驗(yàn)，研究在無機(jī)鹽、6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂5 個(gè)因子共同存在的條件下，不同水平配比對誘導(dǎo)大巖桐花芽分化的影響。培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。正交設(shè)計(jì)因子 水平見表1。

表1 正交設(shè)計(jì)因子水平

不同質(zhì)量濃度赤霉素對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:設(shè)置添加不同質(zhì)量濃度赤霉素(0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mg·L-1)，以不添加赤霉素作對照，培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同苗徑對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:將苗徑分別為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 cm 的試管苗，轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)花芽分化的培養(yǎng)基上，以研究不同苗徑對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響。培養(yǎng)60 d，統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

培養(yǎng)條件:每個(gè)處理pH 值調(diào)至6.0。培養(yǎng)溫度為(24±2)℃，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx，光照時(shí)間14 h·d-1。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):花芽分化率=花芽數(shù)/總試管苗數(shù)×100%。每個(gè)處理6 瓶，每瓶3 株試管苗，重復(fù)3 次。用SPSS 軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，用LSD 法進(jìn)行多重比較，檢驗(yàn)各影響因素的差異顯著性(P≤0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同基本培養(yǎng)基對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

培養(yǎng)基的種類及成分直接影響所培養(yǎng)的植物的生長，其中的基本營養(yǎng)元素對誘導(dǎo)植物花芽分化作用不同，所以選擇適宜的培養(yǎng)基極其重要。將生長健壯、長勢一致，苗徑約3.5 cm 的試管苗接種于不同基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

不同基本培養(yǎng)基中，大量元素、微量元素、有機(jī)化合物、鐵鹽等成分及質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同，設(shè)置的6 種基本培養(yǎng)基各自特點(diǎn)不同:MS 為高鹽成分培養(yǎng)基，即其鉀鹽、銨鹽及硝酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)均較高，微量元素種類齊全;B5、N6 為硝酸鉀質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的培養(yǎng)基，其中B5 含有較低質(zhì)量分?jǐn)?shù)的銨態(tài)氮;Miller 與WPM 為中等無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)的培養(yǎng)基，其中Mn 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高;White 為低質(zhì)量分?jǐn)?shù)無機(jī)鹽培養(yǎng)基。對花芽分化率進(jìn)行方差分析和多重比較，對營養(yǎng)狀態(tài)相同的大巖桐花芽分化的促進(jìn)效果由大到小的順序?yàn)閃PM、N6、B5、MS、Miller、White。大巖桐在WPM 與N6 基本培養(yǎng)基中，花芽分化率顯著高于其他基本培養(yǎng)基中的花芽分化率;兩者相比較雖差異不顯著，但WPM 基本培養(yǎng)基中平均花芽分化率最高，達(dá)29.63%，且長勢健壯良好，葉片舒展;而N6基本培養(yǎng)基中平均花芽分化率為24.07%，葉片略皺縮，長勢不及WPM(表2)。綜上所述，WPM 是適宜大巖桐誘導(dǎo)花芽分化，且保證長勢健壯的基本培養(yǎng)基。

表2 不同基本培養(yǎng)基對大巖桐花芽誘導(dǎo)的影響

2.2 不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

植物的離體培養(yǎng)中，外源激素的調(diào)控對器官的形成、生長極為重要，尤其細(xì)胞分裂素在離體花的形成過程中起十分重要的作用。將生長健壯、苗高一致的無菌苗接種到附加有不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比組合的培養(yǎng)基上，結(jié)果見表3。

由表3可知，所有試驗(yàn)組植株花芽分化率、苗高與生長情況不同。對6-BA、KT、IBA、NAA 作單因子多重比較，發(fā)現(xiàn)6-BA 與NAA 對大巖桐花芽分化率與苗高的影響均差異顯著，而KT 與IBA 的質(zhì)量濃度變化對誘導(dǎo)大巖桐花芽分化與苗高基本無影響，結(jié)果見表4。

表3 不同種類及質(zhì)量濃度細(xì)胞分裂素、生長素配比對大巖桐花芽誘導(dǎo)的影響

圖1 大巖桐試管結(jié)球現(xiàn)象

表4 6-BA、KT、IBA、NAA 對花芽分化率影響的單因子多重比較

6-BA 各質(zhì)量濃度水平的多重比較結(jié)果表明，隨著6-BA 質(zhì)量濃度的升高，大巖桐花芽分化率與苗高均呈下降趨勢，說明過高的6-BA 質(zhì)量濃度不利于大巖桐試管苗花芽分化與長高。當(dāng)6-BA 質(zhì)量濃度為0.1 mg·L-1時(shí)，大巖桐的平均花芽分化率最高，達(dá)17.28%，此時(shí)平均苗高為4.14 cm。而大巖桐在KT 作用下，花芽分化率較低，試管苗出現(xiàn)徒長現(xiàn)象，其質(zhì)量濃度變化對誘導(dǎo)花芽分化與苗高影響差異不顯著。所以6-BA 與KT 相比較，6-BA 是誘導(dǎo)大巖桐分化與生長適宜的細(xì)胞分裂素。

生長素IBA 的質(zhì)量濃度變化對大巖桐的苗高與花芽誘導(dǎo)率影響差異均不顯著，且在其作用下，植株有徒長趨勢。而NAA 各質(zhì)量濃度水平的多重比較結(jié)果表明，隨著NAA 質(zhì)量濃度的升高，大巖桐試管苗苗高呈上升趨勢，而花芽誘導(dǎo)率呈下降趨勢，說明在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)(0.1～0.2 mg·L-1)，較高質(zhì)量濃度的NAA 能促進(jìn)大巖桐長高，但不利于誘導(dǎo)大巖桐試管苗花芽分化。當(dāng)NAA 質(zhì)量濃度為0.1 mg·L-1時(shí)，大巖桐平均花芽誘導(dǎo)率較高，為13.89%，此時(shí)平均苗高較高，為3.87 cm。

大巖桐試管苗在6-BA 與IBA 配比作用下，整體長勢較弱，偶有徒長現(xiàn)象，植株基部除有愈傷組織產(chǎn)生，或出現(xiàn)叢生芽增殖較多的情況外，基部均有結(jié)球(圖1);在6-BA 與NAA 作用下，試管苗整體長勢較好，部分試驗(yàn)組植株基部產(chǎn)生愈傷組織，其余試驗(yàn)組植株基部結(jié)球。KT 無論與何種生長素(IBA 或NAA)配比作用，所有試管苗基部均結(jié)球，但不同培養(yǎng)基上結(jié)球情況不同，出現(xiàn)一株結(jié)多球、球莖大小不一、球莖上長根等現(xiàn)象。其中KT 與NAA 組合，植株整體長勢較好;而與IBA 組合時(shí)，植株整體徒長，且長勢較弱。

綜上所述，細(xì)胞分裂素6-BA 與生長素NAA 配比適宜誘導(dǎo)大巖桐試管苗花芽分化。添加0.1 mg·L-16-BA，與0.1 mg·L-1NAA，平均花芽分化率最高，為33.33%。

2.3 不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂質(zhì)量濃度配比對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

將生長健壯、長勢一致的試管苗轉(zhuǎn)接到不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂質(zhì)量濃度的正交設(shè)計(jì)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)60 d，試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5 不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂質(zhì)量濃度配比對花芽誘導(dǎo)的影響

由表5可知，各處理中試管苗花芽分化率及長勢不同，試驗(yàn)組雖有較高的花芽分化率，但有較多花芽敗育。大巖桐在4 號培養(yǎng)基WPM+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.20 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+9 g·L-1瓊脂中，平均花芽分化率最高，為48.15%，此時(shí)植株長勢健壯良好，花芽飽滿(圖2)，后期花芽開放正常(圖3)。對花芽分化率進(jìn)行極差分析，結(jié)果見表6。

由表6極差分析結(jié)果可知，D 因素(蔗糖)的極差最大，為35.65;其次是C 因素(NAA)，極差為15.74;A 因素(無機(jī)鹽)與E 因素(瓊脂)的極差相同，均為14.81;B 因素(6-BA)的極差最小，僅為5.09。說明不同因素水平變化對大巖桐花芽分化率的影響由大到小依次為蔗糖，NAA，無機(jī)鹽、瓊脂，6-BA。

表6 極差分析

圖2 適宜培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出飽滿花芽

圖3 飽滿花芽正常開放

D 因素的極差值最大，表明在所試驗(yàn)的5 個(gè)因素中，蔗糖的質(zhì)量濃度變化對大巖桐花芽分化率影響最大，隨蔗糖質(zhì)量濃度的升高，花芽分化率整體呈現(xiàn)先上升的變化趨勢，當(dāng)蔗糖質(zhì)量濃度為40 g·L-1時(shí)，平均花芽分化率最高，為44.91%，顯著高于其他質(zhì)量濃度作用下的花芽分化率。

C 因素極差次之，表明NAA 質(zhì)量濃度變化對大巖桐花芽分化率影響較大。隨NAA 質(zhì)量濃度升高，大巖桐花芽分化率整體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，添加NAA0.1 mg·L-1時(shí)，平均花芽分化率最高，為31.02%。

A 因素與E 因素極差值相同，說明無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化對大巖桐花芽分化率的影響，與瓊脂的質(zhì)量濃度變化對花芽分化的影響差異不顯著。從平均值看，無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)以第二水平最好，即WPM+N(WPM 大量元素中NH4NO3與Ca(NO3)2·4H2O 質(zhì)量分?jǐn)?shù)加倍)，此時(shí)平均花芽分化率最高，為28.24%;而瓊脂質(zhì)量濃度以第一水平最好，即添加6 g·L-1質(zhì)量濃度的瓊脂，平均花芽分化率最高，為28.70%。

B 因素6-BA 質(zhì)量濃度變化對大巖桐花芽分化率影響最小。除在質(zhì)量濃度為1 mg·L-1時(shí)，大巖桐平均花芽分化率下降，為18.52%外，在其他質(zhì)量濃度作用下，花芽分化率無明顯變化趨勢，且兩兩比較，差異不顯著。從平均值看，以第4 水平，即添加0.3 mg·L-1質(zhì)量濃度6-BA，平均花芽分化率最高，為23.61%。

因此，當(dāng)無機(jī)鹽、6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂5 個(gè)因素同時(shí)存在時(shí)，提高大巖桐花芽分化率的理論培養(yǎng)基為WPM+N+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.10 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+6 g·L-1瓊脂。但植株長勢及花芽狀態(tài)可能受到培養(yǎng)基中各因素在不同水平的交互作用影響，此培養(yǎng)基是否適宜大巖桐花芽分化還需進(jìn)一步驗(yàn)證試驗(yàn)。

綜上所述，由試驗(yàn)篩選出，WPM+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.20 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+9 g·L-1瓊脂為適宜大巖桐花芽分化的培養(yǎng)基，此時(shí)試管苗花芽分化率較高，且保證植株長勢健壯良好，花芽飽滿。

2.4 不同質(zhì)量濃度赤霉素對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

赤霉素可替代低溫和長日照作用，以誘導(dǎo)有些長日照植物在短日照條件下開花。以不添加赤霉素作對照，設(shè)置不同質(zhì)量濃度(0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mg·L-1)，培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率，試驗(yàn)結(jié)果見表7。

表7 不同質(zhì)量濃度赤霉素對花芽誘導(dǎo)的影響

對結(jié)果進(jìn)行方差分析可知，當(dāng)添加有赤霉素時(shí)，隨赤霉素質(zhì)量濃度升高，大巖桐花芽分化率呈上升趨勢，但植株長勢變?nèi)酰亿呌谕介L。在低質(zhì)量濃度(0.5～1.0 mg·L-1)作用下，大巖桐花芽在植株基部分化，無花梗，花芽較小，但花色紅艷，后期開放時(shí)花瓣呈單瓣(圖4)。而當(dāng)赤霉素質(zhì)量濃度上升至5.0 mg·L-1時(shí)，平均花芽分化率較高，為15.28%，此時(shí)花芽較大，具花梗，但植株與花梗明顯徒長。而對照組不添加赤霉素時(shí)的平均花芽分化率為33.19%，顯著高于所有添加赤霉素的試驗(yàn)組，且植株長勢健壯良好，葉片舒展。因此，以不添加赤霉素對誘導(dǎo)大巖桐花芽分化較為有利。

圖4 赤霉素作用下植株徒長，花開基部，花瓣單瓣

2.5 不同苗徑對大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

苗莖大小作為植物生長的指標(biāo)，可一定程度上代表植株體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)存貯狀況。將不同苗徑的試管苗接種到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60 d，試驗(yàn)結(jié)果見表8。

表8 不同苗徑對花芽誘導(dǎo)的影響

對結(jié)果進(jìn)行方差分析，大巖桐試管苗的苗徑大小對其試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)影響顯著。試管苗苗徑小于3.0 cm 時(shí)，植株無花芽分化現(xiàn)象;當(dāng)試管苗苗徑為3.0 cm 時(shí)，漸有花芽分化，但此時(shí)平均花芽分化率較低，僅為1.75%;苗徑大于3.0 cm 時(shí)，花芽分化率隨苗徑增大而增多，苗徑為4.5 cm 的試管苗，平均花芽分化率最高，為31.94%，與苗徑為4.0 cm 的試管苗平均花芽分化率29.74%相比，差異不顯著;而苗徑為3.5 cm 的平均花芽分化率為28.94%，又與4.0 cm 的花芽分化率差異不顯著。由此得出結(jié)論，大巖桐植株的苗徑大小影響花芽分化，3.0 cm 的苗徑大小是其營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件;達(dá)到臨界條件后，花芽分化率隨苗徑增加而逐漸增多。

3 結(jié)論與討論

誘導(dǎo)不同種類植物試管開花時(shí)所需要的培養(yǎng)基各異，植株只有在適宜的營養(yǎng)狀態(tài)、適宜的激素調(diào)控以及適宜的培養(yǎng)條件下才能誘導(dǎo)花芽分化、花器官的形成。所以探究培養(yǎng)基種類及其組成成分極其必要及重要。

植物必需的礦質(zhì)元素對植物生長發(fā)育各個(gè)階段影響差異顯著。大巖桐常規(guī)栽培養(yǎng)護(hù)，常在生殖生長時(shí)，在原營養(yǎng)液配方的基礎(chǔ)上適量加大磷、鉀肥比例，再添加硼、鎂、錳等微量元素，以利開花。研究發(fā)現(xiàn)，Mn 質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的中等無機(jī)鹽培養(yǎng)基WPM，對誘導(dǎo)大巖桐試管內(nèi)花芽分化效果最佳，其次為硝酸鉀質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的N6 和B5 培養(yǎng)基，低無機(jī)鹽培養(yǎng)基White 效果最差。結(jié)果與常規(guī)養(yǎng)護(hù)方法基本一致，同時(shí)得出，適量增加微量元素，較增加大量元素更利于成花。

研究發(fā)現(xiàn)，在無機(jī)鹽、細(xì)胞分裂素6-BA、生長素NAA、蔗糖和瓊脂的共同作用下，對誘導(dǎo)大巖桐花芽誘導(dǎo)影響由大到小的順序?yàn)檎崽牵琋AA，無機(jī)鹽、瓊脂，6-BA。蔗糖質(zhì)量濃度對大巖桐花芽誘導(dǎo)率影響最為顯著。糖在培養(yǎng)基中，為植物提供碳源，影響植物體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸和積累，進(jìn)而影響營養(yǎng)生長和生殖生長。研究發(fā)現(xiàn)，不同蔗糖質(zhì)量濃度，對誘導(dǎo)植物試管內(nèi)花芽分化效果不同，以添加40 g·L-1質(zhì)量濃度，誘導(dǎo)大巖桐花芽分化效果最佳。

外源激素在組織培養(yǎng)中調(diào)控著植物器官的發(fā)生與發(fā)育，開花基因的表達(dá)同樣也會(huì)受到激素的影響。本試驗(yàn)中，細(xì)胞分裂素6-BA 與KT 相比較，6-BA是誘導(dǎo)大巖桐分化與生長適宜的細(xì)胞分裂素，且添加低質(zhì)量濃度較為適宜，與大部分試管開花研究報(bào)道一致［2-5］。生長素NAA 較IBA，添加低質(zhì)量濃度有利于大巖桐花芽分化，較高質(zhì)量濃度NAA 抑制花芽的形成。分析可能原因，一方面低質(zhì)量濃度的NAA 提高了某些能促進(jìn)成花的內(nèi)源激素的質(zhì)量濃度［4］，另一方面，較高質(zhì)量濃度的外源激素刺激植物細(xì)胞處于高速分裂的狀態(tài)，促使植物細(xì)胞不斷生長，難以誘導(dǎo)細(xì)胞分化，即花芽分化。

試管開花研究中，常降低培養(yǎng)基中N 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)［9-18］，或提高P 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)［9，11，19］，以提高花芽誘導(dǎo)率;而栽培中常在大巖桐花前增施P、K 肥，以提高開花質(zhì)量，增加開花數(shù)量［20］。試驗(yàn)中通過改變基本培養(yǎng)基中大量元素N、P、K 質(zhì)量分?jǐn)?shù)(即無機(jī)鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù))，間接起到對植株增施肥的效果。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上單獨(dú)加倍P、K質(zhì)量分?jǐn)?shù)，植株長勢健壯，但基部增殖多，花芽分化受到抑制;而同時(shí)加倍N、P、K 質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或單獨(dú)加倍N 質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或不改變基本培養(yǎng)基無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對誘導(dǎo)大巖桐花芽分化較為有利，與前人試驗(yàn)結(jié)果及盆栽的養(yǎng)護(hù)方法有差異，分析原因，可能是由于N 質(zhì)量分?jǐn)?shù)的相對降低，致使植物對大量元素吸收不平衡，影響了植物體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的貯存，不能及時(shí)充分供給花芽分化時(shí)所需養(yǎng)分，從而抑制了花芽分化。

赤霉素有促進(jìn)發(fā)芽、枝葉生長、提早開花結(jié)果等作用，對植物的影響貫穿整個(gè)生命周期中的各個(gè)發(fā)育進(jìn)程［21］，有研究表明，赤霉素對雄蕊和花瓣發(fā)育很重要［22］。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，添加赤霉素，不能提高大巖桐花芽誘導(dǎo)率;高質(zhì)量濃度赤霉素較低質(zhì)量濃度的有利于提高花芽誘導(dǎo)率，增加成花數(shù)量，但植株徒長，長勢弱。但添加赤霉素的試驗(yàn)組，花芽后期能正常開放，且花色紅艷。杭州師范大學(xué)通過赤霉素和細(xì)胞分裂素協(xié)同作用，建立起離體大巖桐花被切塊直接再生花芽的體系，同時(shí)用酶聯(lián)免疫方法測定出花器官中的赤霉素質(zhì)量濃度水平持續(xù)增加，高于營養(yǎng)器官中的赤霉素質(zhì)量濃度［23］。結(jié)合前人研究，得出施加外源赤霉素確實(shí)能夠促進(jìn)誘導(dǎo)大巖桐花芽分化。而添加赤霉素的花芽誘導(dǎo)率低于不添加的誘導(dǎo)率，可能原因是具一定苗徑大小的試管苗，已完成營養(yǎng)生長，可以自主成花誘導(dǎo)途徑向生殖生長轉(zhuǎn)變，此時(shí)添加不適宜質(zhì)量濃度的赤霉素，會(huì)影響相關(guān)成花基因的表達(dá)，同時(shí)起到促進(jìn)莖葉生長的作用，從而表現(xiàn)出無花芽分化，植株徒長的現(xiàn)象。所以，赤霉素在植株不同生理狀態(tài)時(shí)作用，可能存在不同機(jī)制，還有待進(jìn)一步研究。但在完成花芽誘導(dǎo)后，可考慮添加赤霉素，以提高成花品質(zhì)。

常規(guī)栽培中，大巖桐以自主途徑完成花芽誘導(dǎo)，即其植株要達(dá)到一定的年齡才能開花，否則將促進(jìn)開花阻抑物基因的表達(dá)而不能開花。在花芽誘導(dǎo)試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中各成分的種類或質(zhì)量濃度變化僅對花芽誘導(dǎo)率有影響，并無培養(yǎng)基中不可或缺的絕對成分，適宜的培養(yǎng)基成分能使大巖桐試管苗有較高的花芽誘導(dǎo)率;而大巖桐試管苗的大小(即自身營養(yǎng)狀態(tài))直接影響其是否能夠分化花芽，是誘導(dǎo)其花芽分化的必要條件。植株的營養(yǎng)狀態(tài)對試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)有影響，其基本原理是植物體內(nèi)的一些化合物種類，如脯氨酸等能與激素類共同作用以誘導(dǎo)開花［24］，而處在不同生理階段的植物體內(nèi)所含化合物種類及質(zhì)量濃度不同。近年的研究中發(fā)現(xiàn)，在相同增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到的不同高度的試管苗，可能由于所處的生理狀態(tài)或生理階段不同，花芽誘導(dǎo)率有差異［10］。本試驗(yàn)中，以苗徑作為衡量植株?duì)I養(yǎng)狀態(tài)的指標(biāo)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)3.0 cm 的苗徑大小是大巖桐由營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件，之后隨苗徑的增加，花芽誘導(dǎo)率增多。分析原因，可能不同苗徑的植株，所處營養(yǎng)狀態(tài)的不同，苗徑＞3.0 cm 的大巖桐試管苗，植株體內(nèi)的化合物種類與內(nèi)源激素水平與外源激素共同作用，有利于促進(jìn)成花基因的表達(dá)。

總之，WPM 是適宜大巖桐誘導(dǎo)花芽分化，且保證長勢健壯的基本培養(yǎng)基;細(xì)胞分裂素6-BA 與生長素NAA 配比適宜誘導(dǎo)大巖桐試管苗花芽分化;在WPM 的基礎(chǔ)上，增加N、P、K 質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或增加N質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或不改變基本培養(yǎng)基無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對提高大巖桐花芽分化率較為有利;誘導(dǎo)大巖桐試管內(nèi)花芽分化的適宜培養(yǎng)基為WPM+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.20 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+9 g·L-1瓊脂;赤霉素不利于健壯生長。3.0 cm 的苗徑大小是大巖桐營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件，達(dá)到臨界條件后，花芽分化率隨苗徑增加而逐漸增多。

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