環(huán)狀RNA在腫瘤中作用的研究進(jìn)展

張春雷，楊 琦，訾曉淵，孫穎浩

(1．海軍軍醫(yī)大學(xué)長海醫(yī)院泌尿外科，上海 200433；2．海軍軍醫(yī)大學(xué)細(xì)胞生物教研室，上海 200433；3．聯(lián)勤保障部隊(duì)第九四〇醫(yī)院泌尿外科，甘肅 蘭州 730050)

環(huán)狀RNAs(circular RNAs，circRNAs)是一種通過反向剪接機(jī)制由線性RNA 前體的5′端和3′端共價相接形成具有特殊環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA(non-coding RNAs，ncRNAs)，成為繼長鏈非編碼RNA(long non-coding RNAs，lncRNAs)和microRNAs(miRNAs)之后，另一大類ncRNAs 家族成員，在許多生物過程中發(fā)揮調(diào)控作用，如細(xì)胞增殖、細(xì)胞衰老和細(xì)胞凋亡等。早在20世紀(jì)70年代，circRNAs首先在RNA病毒中發(fā)現(xiàn)，但由于其表達(dá)豐度較低，被認(rèn)為是錯誤翻譯造成的垃圾序列。近年來，隨著高通量RNA 測序技術(shù)和生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)展，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了數(shù)以萬計(jì)的circRNAs，其功能被逐漸識別，實(shí)驗(yàn)證明一些circRNAs的表達(dá)水平顯著高于同源基因的線性轉(zhuǎn)錄本的表達(dá)水平[1]。CircRNAs在哺乳動物細(xì)胞中具有豐富的表達(dá)量和進(jìn)化上具有較高的保守性，在各種生理和病理過程中對基因表達(dá)的調(diào)控起著重要作用。CircRNAS 在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中可能扮演重要角色，多項(xiàng)報(bào)道已經(jīng)先后證明了circRNAs-miRNAsmRNA信號通路參與了各種惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。為此，本文就circRNAs 的生物學(xué)特性、形成機(jī)制、功能以及在腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用的最新進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 circRNAs的生物學(xué)特性及形成機(jī)制

CircRNAs具有多種生物學(xué)特性[2]。首先，circRNAs普遍存在于生物界，通過對轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果中的反向剪接序列分析得知，circRNAs 廣泛表達(dá)于原核生物和真核生物中，包括病毒、細(xì)菌、真菌、動物等。其次，circRNAs具有高度穩(wěn)定性，由于它們對RNA 核酸外切酶或RNA 酶R 的抗性，circRNAs 比線性RNA 分子更穩(wěn)定，這可能導(dǎo)致circRNAs 在較為穩(wěn)定的細(xì)胞中富集，具有較高的表達(dá)豐度，如在神經(jīng)元細(xì)胞中高表達(dá)。CircRNAs 在物種進(jìn)化上還具有高度保守性，尤其在哺乳動物的腦組織中的表達(dá)。不同物種之間的同源性研究表明，人類和小鼠的circRNAs 中高達(dá)20%是直系同源的[3]。另外，circRNAs具有較好的組織特異性且較多的富集于外泌體中。

CircRNAs 可由外顯子、內(nèi)含子、基因間序列、反義鏈序列、ncRNAs 等形成，分為全外顯子型circRNAs、內(nèi)含子型環(huán)狀RNA(circular intronic RNAs，ciRNAs)、外顯子-內(nèi)含子型環(huán)狀 RNA(exon-intron-circRNAs， EIciRNAs) 和 其 他 類 型circRNAs。目前，全外顯子型circRNAs 形成機(jī)制的研究較多，經(jīng)典的形成機(jī)制是由RNA 的5′端及3′端通過共價結(jié)合反向剪接形成，另一個比較常見的機(jī)制是RNA 序列通過外顯子跳讀形式產(chǎn)生一個包含外顯子的套索結(jié)構(gòu)，套索內(nèi)的剪接機(jī)制通過移除內(nèi)含子形成circRNAs。CiRNAs 主要是由于在正常剪接過程中形成的內(nèi)含子套索未能脫分支化造成的，據(jù)報(bào)道，在內(nèi)含子序列內(nèi)，5′剪接位點(diǎn)附近7 nt GU富集片段和分支點(diǎn)附近11 nt 富含C 的基序片段可以促進(jìn)ciRNAs 的形成[4]。在circRNAs 環(huán)化過程中，多種因素參與該過程的調(diào)節(jié)[5]。例如，circRNAs形成時內(nèi)含子長度可能起到關(guān)鍵作用，反向剪接位點(diǎn)側(cè)翼序列往往比那些非環(huán)化的剪接位點(diǎn)側(cè)翼序列長，這可能是因?yàn)樾蛄休^長的內(nèi)含子間可以形成更多的RNA-RNA 相互作用，促進(jìn)內(nèi)嵌外顯子的環(huán)化。外顯子長度也可能是一個因素，單環(huán)外顯子的長度往往是那些非環(huán)化外顯子長度的3 倍左右，序列較長的外顯子可能在空間上優(yōu)先選擇在剪接位點(diǎn)進(jìn)行3′-5′方式剪接。此外，基因序列的分布也很重要，易形成環(huán)化的RNA側(cè)翼通常包含反向互補(bǔ)堿基序列，比如Alu序列，這樣的序列可以形成雙鏈RNA 使得進(jìn)行剪接的序列相互靠近，促進(jìn)反向剪接的形成，即使僅有30～40 nt 的反向重復(fù)序列也能夠起到類似的作用。除了以上因素，RNA 結(jié)合蛋白(RNA binding protein，RBP)也可以調(diào)節(jié)circRNAs 的形成，RBP 如Quaking(QKI)和Muscleblind(MBL/MBNL1)可與反式剪接位點(diǎn)側(cè)翼內(nèi)含子結(jié)合并可能驅(qū)動環(huán)化的發(fā)生。另外，具有較高轉(zhuǎn)錄效率的親本基因生成的circRNAs 也相對較多，說明轉(zhuǎn)錄效率也是調(diào)節(jié)circRNAs形成的因素之一。

2 circRNAs的功能

2.1 miRNAs海綿吸附功能

研究結(jié)果表明circRNAs上具有miRNAs的結(jié)合位點(diǎn)，通過吸附miRNAs起到miRNAs海綿的作用[6]，目前研究的circRNAs作用機(jī)制主要集中在這一功能。CircRNAs 可以結(jié)合特定的miRNAs，吸附它們并抑制其功能，這種現(xiàn)象稱為競爭性內(nèi)源RNA 假說。早期發(fā)現(xiàn)影響斑馬魚中腦發(fā)育的circRNA CiRS-7(也稱CDR1as)具有70 多個miR-7 的結(jié)合位點(diǎn)，同時還可以結(jié)合RNA 誘導(dǎo)沉默復(fù)合物Argonaute(AGO)蛋白來調(diào)節(jié)miRNAs 的功能。CDR1as 也可以結(jié)合miR-671，后者可以誘導(dǎo)AGO 引起CDR1as自身裂解，起到釋放miR-7的作用。然而，像CDR1as這種包含某一特定miRNA 多個結(jié)合位點(diǎn)的circRNAs 并不多，比如circHIPK3 只含有兩個miR-124 結(jié)合位點(diǎn)，但仍保留了調(diào)節(jié)這種miRNA 的能力，說明對于circRNAs 來說，具有某一特定miRNA多個結(jié)合位點(diǎn)的特性可能不是高效調(diào)節(jié)miRNAs的先決條件，circRNAs 可能通過同時調(diào)節(jié)多個具有協(xié)同作用的miRNAs而發(fā)揮作用，比如circHIPK3含有9個具有生長抑制作用的不同miRNAs的結(jié)合位點(diǎn)。

2.2 影響基因的轉(zhuǎn)錄及剪接功能

CircRNAs可以調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄[7]，這些circRNAs主要分布在細(xì)胞核中。研究者發(fā)現(xiàn)EIciRNAs 能夠與RNA 聚合酶II 結(jié)合，影響其轉(zhuǎn)錄活性。比如EIciEIF3J 能夠與核內(nèi)小核糖體核蛋白U1 及EIF3J 的啟動子相互作用，進(jìn)而強(qiáng)化EIF3J 的轉(zhuǎn)錄。CircRNAs也能夠影響核酸的剪接，circMBL是由MBL的第2個外顯子前體mRNA 環(huán)化形成，它的側(cè)翼內(nèi)含子序列能夠與MBL 結(jié)合，既可以直接影響MBL 的活性，又可以與經(jīng)典剪接方式競爭，調(diào)節(jié)MBL前體mRNA的剪接。

2.3 調(diào)節(jié)翻譯及與蛋白質(zhì)結(jié)合

如果circRNAs 環(huán)化序列包含其親本基因的翻譯起始密碼子，可能會影響同源基因線性轉(zhuǎn)錄本的翻譯，比如circHIPK3和circDMD 等可以調(diào)節(jié)親本基因?qū)?yīng)蛋白質(zhì)的表達(dá)[7]。此外，circRNAs 能夠與蛋白質(zhì)結(jié)合，通過抑制蛋白質(zhì)功能而發(fā)揮作用[8]。RNA結(jié)合蛋白能夠與circRNAs特異序列發(fā)生結(jié)合，導(dǎo)致與之相互作用的mRNA的相關(guān)功能如剪接、核輸出和亞細(xì)胞定位均會受到影響。例如circ-Foxo3在腫瘤細(xì)胞中特異表達(dá)并影響細(xì)胞周期，它能夠結(jié)合CDK2 和p21 形成RNA-蛋白復(fù)合物，破壞CDK2與細(xì)胞周期素A和細(xì)胞周期素E之間的相互作用，進(jìn)而影響細(xì)胞周期。Circ-Foxo3 還可以和ID1，E2F1，F(xiàn)AK 以及HIF-1α等蛋白相互作用，抑制這些蛋白發(fā)揮功能，促進(jìn)心肌的衰老。PABPN1 翻譯與HuR 相關(guān)，其對應(yīng)的環(huán)狀RNA circPABPN1與HuR 的相互作用降低了PABPN1轉(zhuǎn)錄本的翻譯效率，為circRNAs 既可以與蛋白質(zhì)結(jié)合，又可以影響翻譯提供有力證據(jù)。

2.4 翻譯蛋白

隨著研究的不斷深入，circRNAs 的編碼功能逐漸被發(fā)現(xiàn)[9]。circRNAs存在m6A修飾，METTL3/METTL14-WTAP蛋白復(fù)合物能夠?qū)ircRNAs 進(jìn)行m6A 修飾，經(jīng)過修飾的circRNAs先后募集YTHDF3 和eIF4G2，從而啟動蛋白翻譯過程。在膠質(zhì)瘤中，circ-FBXW7可翻譯蛋白FBXW7-185aa，這種蛋白與親本基因編碼蛋白發(fā)揮協(xié)同作用，共同調(diào)控c-Myc 的穩(wěn)定性，抑制惡性膠質(zhì)瘤的進(jìn)展。Circ-ZNF609可直接翻譯蛋白，這種蛋白與肌肉形成有關(guān)。Pan 等[10]一項(xiàng)最新報(bào)道證明，結(jié)腸癌中circFNDC3B 編碼蛋白可以抑制Snail1 表達(dá)并抑制EMT 和腫瘤進(jìn)展。

3 circRNAs與腫瘤的發(fā)生發(fā)展

3.1 circRNAs與消化系統(tǒng)惡性腫瘤

多項(xiàng)研究結(jié)果表明circRNAs 與消化系統(tǒng)的腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)，包括肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)、胃癌(gastric cancer，GC)、口腔鱗狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)、食道鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)、結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)、胰腺導(dǎo)管腺癌等。CiRS-7 在HCC 組織中含量較高，通過靶向作用于miR-7來促進(jìn)CCNE1和PIK3CD表達(dá)，增強(qiáng)HCC細(xì)胞增殖和侵襲能力[11]。曹雪濤院士團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)circMTO1(hsa_circRNA_0007874/hsa_circRNA_104135)在HCC 組織中顯著下調(diào)，通過吸附miR-9 促進(jìn)p21 表達(dá)進(jìn)而抑制HCC 進(jìn)展[12]。CircPVT1 在GC 組織中表達(dá)量高于癌旁組織，進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)表明其可通過吸附miR-125 家族成員以促進(jìn)細(xì)胞增殖[13]。Li 等[14]發(fā)現(xiàn)hsa_circ_0000096 在GC 組織中顯著下調(diào)，其可通過抑制CCND1、CDK6、MM9-2 和MMP-9 表達(dá)來抑制GC 細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。Zhang 等[15]實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明circLARP4在GC組織中下調(diào)并通過降低miR-424 靶基因LATS1表達(dá)來促進(jìn)細(xì)胞生長和腫瘤轉(zhuǎn)移。CircRNAs在結(jié)直腸癌中的研究較多，Huang等[16]發(fā)現(xiàn)在CRC組織中cir-ITCH 表達(dá)下調(diào)后抑制ITCH表達(dá)，激活Wnt/β-catenin途徑的促腫瘤作用，cir-ITCH 表達(dá)上調(diào)后細(xì)胞增殖能力降低，在CRC 中通過調(diào)節(jié)ITCH 表達(dá)發(fā)揮抗腫瘤作用。另有研究報(bào)道，hsa_circ_001569 作為CRC 的細(xì)胞增殖和侵襲的正調(diào)控因子，通 過miR-145 靶 向 作 用 于E2F5、BAG4和FMNL2[17]，hsa_circ_0020397 通過吸附miR-138 促進(jìn)TERT 和PD-L1 表達(dá)從而調(diào)節(jié)CRC 細(xì)胞生物學(xué)功能[18]。一項(xiàng)最新研究表明，circLONP2 通過調(diào)節(jié)miR-17，在CRC 的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[19]。在OSCC 的研究中，Chen 等[20]發(fā)現(xiàn)與對照癌旁組織相比，circRNA_100290在癌組織中顯著上調(diào)，通過吸附miR-29b家族成員而增加CDK6 表達(dá)，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，表明circRNA_100290 可能是OSCC 治療中的潛在靶標(biāo)。在ESCC 的研究中，Li等[21]發(fā)現(xiàn)cir-ITCH在腫瘤組織中表達(dá)量相對較低，與結(jié)直腸癌中的作用機(jī)制類似，下調(diào)的cir-ITCH 可能通過miR-7、miR-17和miR-214等途徑降低ITCH的表達(dá)水平，激活Wnt/βcatenin 信號通路，因而cir-ITCH 在ESCC 中起到腫瘤抑制作用。另有研究報(bào)道表明，circFOXK2通過作為miR-942海綿和與RBP結(jié)合共同促進(jìn)胰腺導(dǎo)管腺癌的生長和轉(zhuǎn)移[22]。

3.2 circRNAs與肺癌

隨著對circRNAs 研究的關(guān)注，逐漸發(fā)現(xiàn)circRNAs 在肺癌的發(fā)展中可能也存在重要作用[23]。Cir-ITCH在肺癌中作為一個抑癌因素，充當(dāng)miR-7和miR-214的海綿，調(diào)節(jié)其線性轉(zhuǎn)錄本ITCH 表達(dá)，cir-ITCH 的下調(diào)使Wnt/β-catenin 通路激活，啟動腫瘤進(jìn)展機(jī)制。研究結(jié)果表明hsa_circ_0000064在肺癌組織中上調(diào)并促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移。在非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的研究中，circ_0013958在癌組織中表達(dá)上調(diào)，通過吸附miR-134 上調(diào)致癌基因CCND1，促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，circ_0013958具有作為早期生物標(biāo)志物用來檢測以及篩查肺癌的潛能。Circ_100876 在NSCLC 組織中顯著高表達(dá)，其表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和NSCLC腫瘤分期存在相關(guān)性。

3.3 circRNAs與泌尿系惡性腫瘤

越來越多的研究驗(yàn)證了circRNAs 在泌尿系腫瘤的診斷和治療中的價值。在膀胱癌研究中，Huang 等[24]發(fā)現(xiàn)circRNA MYLK/miRNA-29a-3p/DNMT3B/VEGFA/ITGB1 信號通路可能與膀胱癌有關(guān)，另一項(xiàng)研究結(jié)果表明circHIPK3通過靶向作用于miR-558并調(diào)節(jié)乙酰肝素酶表達(dá)量進(jìn)而抑制膀胱癌的生長和轉(zhuǎn)移[25]。在腎癌的研究中，Wang 等[26]檢測了circRNAs 和腎透明細(xì)胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)在雄激素受體表達(dá)增加的ccRCC 中，circHIAT1 通過雄激素受體介導(dǎo)的circHIAT1/miR-195-5p/29a-3p/29c-3p/CDC42 信號通路，抑制癌細(xì)胞遷移和侵襲。最新研究表明circTLK1 作為miR-136-5p 海綿促進(jìn)腎細(xì)胞癌的增殖及轉(zhuǎn)移[27]。在前列腺癌的研究中，已有研究表明circ-SMARCA5 通過抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期等方式促進(jìn)疾病進(jìn)展[28]。另有研究通過對CRISPR 全基因組篩選，證實(shí)HNRNPL 作為一種RNA 結(jié)合蛋白調(diào)控RNA 的可變剪接，包括PCa 特異性的癌基因，也可以通過調(diào)控反向剪接方式促進(jìn)circRNAs 形成，參與PCa發(fā)展[29]。

3.4 circRNAs與女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤

乳腺癌和卵巢癌一直是威脅女性健康的重要因素，circRNAs相關(guān)研究為指導(dǎo)治療這兩種癌癥帶來了新的希望。在乳腺癌研究中，研究人員發(fā)現(xiàn)circ-ABCB10在癌組織中顯著高表達(dá)，通過吸附miR-1271 促進(jìn)腫瘤發(fā)生[30]。Liang 等[31]報(bào)道circCDYL 在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者腫瘤組織和血清中高表達(dá)，進(jìn)一步研究表明轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者血清中circCDYL 的含量與患者預(yù)后呈顯著負(fù)相關(guān)，這表明血清circCDYL 含量可以作為乳腺癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。Zheng 等[32]發(fā)現(xiàn)三陰性乳腺癌患者腫瘤組織中circSEPT9 高表達(dá)，通過競爭性結(jié)合miR-637 激活LIF/STAT3 通路，另外，該circRNA 與臨床分期及不良預(yù)后有關(guān)。卵巢癌方面，Bachmayr-Heyda等[33]證明卵巢癌細(xì)胞增殖與circRNAs 的總體表達(dá)豐度相關(guān)。Ahmed 等[34]通過對3 例IIIC期卵巢癌患者的原發(fā)部位、腹膜和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移病灶進(jìn)行了測序分析，結(jié)果表明，差異表達(dá)的circRNAs 的數(shù)量明顯多于mRNA。

3.5 circRNAs與血液系統(tǒng)惡性腫瘤

多種惡性血液病是由異常染色體易位編碼的融合基因?qū)е碌?，而許多ncRNAs的表達(dá)是通過復(fù)雜的染色體重排機(jī)制形成的，那么二者之間可能存在一定的聯(lián)系，染色體重排可直接生成融合circRNAs。許多癌癥相關(guān)的融合基因可能會產(chǎn)生多種circRNAs如circPR和circM9_1，這些circRNAs具有促進(jìn)增殖和作為原癌基因的特性。You等[35]通過對RNA-Seq數(shù)據(jù)分析鑒定了急性髓細(xì)胞性白血病(acute myeloid leukemia，AML)和急性早幼粒細(xì)胞白血病患者之間差異表達(dá)的circRNAs，這些數(shù)據(jù)支持融合基因表達(dá)的circRNAs 促進(jìn)血液系統(tǒng)惡性腫瘤進(jìn)展的觀點(diǎn)。除此之外，Li等[36]在115例AML樣本中發(fā)現(xiàn)了顯著下調(diào)的circRNA-has_circ_0004277，標(biāo)準(zhǔn)化療可以恢復(fù)該circRNA 及其相應(yīng)的線性轉(zhuǎn)錄本亞型WDR37 的表達(dá)，提示has_circ_0004277可能影響化療反應(yīng)或疾病進(jìn)展。

3.6 circRNAs與其他腫瘤

CircRNA 在其他多種腫瘤的發(fā)病機(jī)制中也起著關(guān)鍵作用。例如，骨肉瘤研究中[37]，有報(bào)道表明hsa-circ-0016347 通過靶向作用miR-214 上調(diào)caspase-1 的表達(dá)促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移；circUBAP2 通過miR-143 增強(qiáng)靶基因Bcl-2的表達(dá)和功能來促進(jìn)骨肉瘤的發(fā)展；hsa_circ_0001564 的表達(dá)水平在骨肉瘤組織中增加并且通過作用于miR-29c-3p促進(jìn)腫瘤形成；hsa_circ_0009910 通過調(diào)控hsa_circ_0009910/miR-449a/IL6R 作用通路來促進(jìn)骨肉瘤的進(jìn)展。在其他腫瘤中，hsa_circRNA_100395/miR-141-3p/miR-200a-3p 通路可能參與乳頭狀甲狀腺腫瘤的發(fā)展[38]，cZNF292和circ-TTBK2分別通過Wnt/β-catenin 和miR-217/HNF1β/Derlin-1 途徑調(diào)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤進(jìn)展[39]；Yang 等[9]研究結(jié)果表明circ-FBXW7I 可編碼功能蛋白FBXW7-185aa，在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中具有潛在的預(yù)后意義。

4 問題與展望

隨著研究的不斷深入，circRNAs 的功能開始受到廣泛關(guān)注，因其具有miRNAs吸附和蛋白質(zhì)結(jié)合功能，能夠影響基因的轉(zhuǎn)錄、剪接及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等作用，說明其在細(xì)胞生物功能調(diào)控方面具有較深遠(yuǎn)的研究意義。目前circRNAs 的研究尚有幾個方面需要改進(jìn)，首先，隨著研究的不斷深入，越來越多的circRNAs 被鑒定出來，然而，與之前的ncRNAs 一樣，目前面臨的主要問題是命名標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一。因此，如何為circRNAs 命名設(shè)計(jì)一個簡單且具有唯一性的方式是亟待解決的問題。另一方面是缺乏對circRNAs 更為深入的了解，目前我們對circRNAs 的了解主要集中在檢測層面，事實(shí)上，circRNAs 是如何生成的，以及機(jī)體是如何去除circRNAs 來調(diào)節(jié)circRNAs的含量我們還不是很清楚。另外，目前我們關(guān)于circRNAs 對腫瘤發(fā)生發(fā)展的研究越來越多，雖然腫瘤的種類在不斷增加，但是機(jī)制并未出現(xiàn)創(chuàng)新，絕大多數(shù)都停留在miRNAs海綿吸附的功能，事實(shí)上，circRNAs的功能不僅于此，它們在腫瘤進(jìn)展中的機(jī)制也絕不會僅僅是這單獨(dú)的一兩方面，除了上述總結(jié)的circRNAs功能外，仍有許多作用機(jī)制值得我們進(jìn)一步探索，比如，circRNAs 具有不同的亞細(xì)胞定位，像CDR1as 這種circRNA 可以結(jié)合或者通過自身降解釋放miRNAs，那么它是否能夠充當(dāng)轉(zhuǎn)運(yùn)載體來調(diào)節(jié)不同條件下亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)內(nèi)的miRNAs 含量，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞生物學(xué)功能？還有，circRNAs 既可以結(jié)合mRNA，又可以結(jié)合蛋白質(zhì)，它是否可以作為中介橋梁，使mRNA或蛋白質(zhì)相互靠近促進(jìn)兩者之間發(fā)生作用，或者作為整體發(fā)揮生物學(xué)功能，這種復(fù)合物的主要成分又是什么？

另外，circRNAs本身表達(dá)量并不高，它是如何有效的競爭結(jié)合miRNAs或蛋白質(zhì)的，這些都是需要我們考慮的問題。盡管許多研究已經(jīng)證明了circRNAs 在疾病治療中的潛在作用，由于其作用效果不確定，尚無法應(yīng)用于臨床中，雖然許多circRNAs 已被證實(shí)和腫瘤存在相關(guān)性，但無臨床數(shù)據(jù)可供參考?？傊?，circRNAs具有其獨(dú)特的特點(diǎn)，對于研究疾病的發(fā)生機(jī)制，能否作為診斷的生物標(biāo)記物，抑或是作為治療的靶點(diǎn)都有重要的研究價值，我們需要對其加深了解，其重要的功能和機(jī)制有待我們?nèi)グl(fā)現(xiàn)。