朝鮮淫羊藿的繁殖技術(shù)研究進展※

●容路生 王英哲 肖井雷 孫云龍 姜大成

（長春中醫(yī)藥大學(xué) 吉林 長春 130000）

淫羊藿為《中國藥典》（2015年版）收錄品種，其基原植物之一為小檗科淫羊藿屬植物朝鮮淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai），又名仙靈脾、三枝九葉草、羊藿葉等[1]。朝鮮淫羊藿具有補腎陽、強筋骨、祛風(fēng)濕等功效[2]。朝鮮淫羊藿為吉林省道地藥材，目前的藥用資源主要依靠野生，但由于人們肆意采挖，缺乏保護意識，使其生態(tài)資源被破壞，蘊藏量逐年減少。因此，開展朝鮮淫羊藿的有性繁殖和植物組織培養(yǎng)迫在眉睫，在取得經(jīng)濟效益的同時，亦能夠促進其生態(tài)環(huán)境的恢復(fù)，保護野生資源及環(huán)境。

1 朝鮮淫羊藿有性繁殖的研究

楊利民[3]等研究朝鮮淫羊藿不同生境種群生物量與更新潛力時，發(fā)現(xiàn)朝鮮淫羊藿平均開花率不超過8%，平均結(jié)果率不超過6%，最低開花率和結(jié)果率均在次生雜木林之下，僅有2%和0.8%。另外，朝鮮淫羊藿開花率和結(jié)果率的變異系數(shù)隨生境條件的不適宜性增強，并隨根莖齡級增加而明顯增大，說明生境條件變差和生理功能衰退導(dǎo)致其種群增殖的不確定性增加。

研究發(fā)現(xiàn)，在人工用種子種植朝鮮淫羊藿時，要通過層積處理來促進其種子的萌芽，完成其種胚的分化[4]。朝鮮淫羊藿種子在休眠過程中，外部形態(tài)無異常，種胚結(jié)構(gòu)未分化，在后熟過程中，其種胚結(jié)構(gòu)逐步發(fā)育、進一步生長形成子葉胚，完成其種胚的形態(tài)后熟，并繼續(xù)低溫解除生理休眠，種子才可萌發(fā)出芽。

才燕[5]等研究朝鮮淫羊藿種子繁育時，發(fā)現(xiàn)其種子干燥后播種，出苗率大大降低，所以種子采摘后，應(yīng)馬上播種。郭杰[6]等研究淫羊藿種子生活力檢測及條件時，發(fā)現(xiàn)淫羊藿種子在儲藏180d后生活力迅速下降，儲藏1年后基本失去生活力，淫羊藿種子生活力測定最佳條件是將種子在清水中浸泡3h，用 1.0%的TTC溶液染色 50min。生產(chǎn)上可以采用此法播種，增加其田間出苗率。王晶[7]等研究朝鮮淫羊藿種子時，發(fā)現(xiàn)其種子透水性好，無機械障礙，種胚形態(tài)后熟。故應(yīng)對朝鮮淫羊藿種子暖溫（15～20℃）沙藏3個月，再低溫（1～4℃）沙藏1～2個月，可加速種胚的發(fā)育。

朝鮮淫羊藿種子繁殖較為困難，原因是朝鮮淫羊藿植物開花率和結(jié)果率極低，種子產(chǎn)量很低，極少看見種子繁殖的實生苗。朝鮮淫羊藿種子在自然條件下萌芽出苗需1年左右，這是由于種子休眠現(xiàn)象明顯、種胚的形態(tài)后熟且種子內(nèi)含有萌發(fā)抑制物質(zhì)所引起的，即使經(jīng)過休眠處理，其種子出苗也得6～8個月。

2 朝鮮淫羊藿無性繁殖的研究

朝鮮淫羊藿的無性繁殖方式包括根莖繁殖和植物組織培養(yǎng)[7]。

2.1 朝鮮淫羊藿的根莖繁殖

關(guān)于朝鮮淫羊藿根莖繁殖的研究較多，在實際生產(chǎn)中應(yīng)用較為廣泛。主要是在每年的4～5月萌芽前或9～10月地上莖葉枯萎后，挖取其1～3年生的地下根莖，選取帶芽的粗壯根莖，切成長8～10cm、帶有1～2個芽的小段，留取須根，用赤霉素800倍體積或生根粉浸根5s后移栽。楊利民[3]等研究朝鮮淫羊藿無性繁殖維持種群更新和增長時發(fā)現(xiàn)，2齡根莖無性繁殖活力最高，3齡、4齡根莖產(chǎn)生的潛伏芽較1齡根莖數(shù)量顯著減少，而4齡根莖的潛伏芽100%不能發(fā)育成1齡根莖，2齡根莖產(chǎn)生的潛伏芽和1齡根莖數(shù)量平均占80%以上，5齡以后的根莖不再有無性繁殖活力[8]。

朝鮮淫羊藿在根莖繁殖時，一定要注意保護其潛伏芽，盡可能不要碰撞，保證其完整性，以保證出苗率及翌年的產(chǎn)量，避免減產(chǎn)，造成損失。

2.2 朝鮮淫羊藿的組織培養(yǎng)

吳勁松[9]等以朝鮮淫羊藿為材料，研究其種群的無性系構(gòu)型，發(fā)現(xiàn)朝鮮淫羊藿種群更新以營養(yǎng)繁殖方式為主，無性系種群則是以稀疏游擊型模式為主，其根莖合軸分枝，分枝數(shù)少，分枝角度不規(guī)則。朝鮮淫羊藿的根莖間生次序分級明顯，分株地上部分只能存活1年，其根莖至少可存活9年[10]。1齡根莖的數(shù)量和物質(zhì)貯量對翌年地上分株的數(shù)量和質(zhì)量以及無性系種群的更新與擴張具有重要的生物生態(tài)學(xué)意義[9]。

2.2.1 以芽、葉、莖為外植體 龔娜[11]等以朝鮮淫羊藿分蘗芽為外植體，探討其消毒和誘導(dǎo)的影響因子，按不同消毒時間、不同基本培養(yǎng)基、不同濃度的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，對其芽的誘導(dǎo)與增殖條件進行系統(tǒng)研究，結(jié)果顯示，最好的消毒方法為75%的乙醇消毒30s，再用0.1%的氯化汞（HgCl2）消毒2min，外植體存活率高達87.5%。芽誘導(dǎo)適宜的培養(yǎng)基為WPM+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L IBA+0.5mg/L GA，誘導(dǎo)率為81.67%。芽增殖的適宜培養(yǎng)基為WPM+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/LIBA。李春鵬[12]等以朝鮮淫羊藿幼葉葉尖和嫩葉柄分枝點為外植體，研究外植體滅菌時間，結(jié)果顯示，葉尖和分枝點滅菌時間均為6min，存活率分別為71.67%和73.33%。誘導(dǎo)葉尖愈傷組織最佳培養(yǎng)基為1/2MS+2.0mg/L2，4-D+0.4mg/L 6-BA+0.5rng/LNAA，誘導(dǎo)率為48.33%。分枝點最佳培養(yǎng)基為MS+3.0mg/L 2，4-D+0.2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA，誘導(dǎo)率為31.67%，葉尖愈傷組織在(4±0.5)℃低溫處理180d后能夠分化，分化率為54.4%。KT質(zhì)量濃度為 1mg/L時，增殖效果最好，增殖系數(shù)為2.35。詹立平[13]等以淫羊藿的土芽和嫩葉為繁殖材料，研究淫羊藿愈傷組織誘導(dǎo)的適宜條件，結(jié)果顯示，土芽的誘導(dǎo)率高于嫩葉的誘導(dǎo)率，土芽可作為最佳的繁殖材料，其最佳誘導(dǎo)條件的培養(yǎng)基為1.0mg/L 6-BA+1.0mg/LNAA+MS+蔗糖20g/L+瓊脂6g/L，誘導(dǎo)率達到90.0%。王晶[14]等以朝鮮淫羊藿幼葉、葉柄和莖尖等作為材料，研究外植體愈傷組織誘導(dǎo)條件，發(fā)現(xiàn)成熟離體胚和莖尖誘導(dǎo)效果較好。以成熟離體胚為外植體時，培養(yǎng)基條件為1/2MS+0.4mg/L NAA+1.0mg/L6-BA。以莖尖為外植體時，培養(yǎng)基條件MS+2.0mg/L 2，4-D+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA，且需在25℃黑暗條件下培養(yǎng)1周，再轉(zhuǎn)入2 000lx光照下培養(yǎng)，效果最佳

2.2.2 以種胚為外植體 李春鵬[15]等以朝鮮淫羊藿的種胚為外植體，研究其最佳的消毒方式，發(fā)現(xiàn)用體積分數(shù)為 0.1%的氯化汞溶液對種子表面消毒8min，再對種胚消毒5s，種子存活率為71.11%，其誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基條件為1/2MS+1.0mg/L6-BA+0.5mg/L NAA+0.5mg/LIBA+3mg/L蔗糖，誘導(dǎo)率為47.78%。愈傷組織增殖的最適宜培養(yǎng)基為 1/2MS+0.5mg/L KT+0.3mg/L NAA，增長率為172.67%。叢生芽增殖的最適宜培養(yǎng)基為1/2MS+2.0mg/L6-BA+0.4mg/L NAA，增殖系數(shù)為2.78。0.5mg/L NAA的生根效果最好，生根率為43.33%。

朝鮮淫羊藿的人工栽培還未取得實質(zhì)上的成功，僅能作實驗室研究，尚無法大面積栽培，朝鮮淫羊藿的植物組織培養(yǎng)研究較少，成果不明顯，還無法應(yīng)用到實際生產(chǎn)中。

3 討論和展望

朝鮮淫羊藿的種子繁殖較為困難，但種子作為繁殖體，能夠選育出優(yōu)勢種質(zhì)，遺傳性狀十分穩(wěn)定，有利于種源保護，應(yīng)進一步加強研究，使其能滿足朝鮮淫羊藿的實際生產(chǎn)需求和品種保護。

目前朝鮮淫羊藿的栽培主要是根莖移栽和野生植株移栽，但優(yōu)勢植株選擇困難，缺乏研究，擴大繁殖不易實現(xiàn)，且容易出現(xiàn)病蟲害，給田間管理帶來難度。朝鮮淫羊藿的組織培養(yǎng)研究進展遲緩，成果不佳，目前研究集中于怎樣選擇較好的外植體和調(diào)配誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基，以芽為外植體誘導(dǎo)率高，且誘導(dǎo)效果最佳；以葉尖、莖尖為外植體，需外加條件，誘導(dǎo)才能達到預(yù)期效果。因此，朝鮮淫羊藿優(yōu)良無性系的研究應(yīng)當(dāng)列為當(dāng)前的重點，進一步加強研究，為朝鮮淫羊藿的繁育和栽培工作奠定基礎(chǔ)。