lncRNAAK093987 表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性

田 偉，高愛紅

近年來，隨著胃癌診治水平逐步提高，早期胃癌篩查率日益增高。 外科手術(shù)是早期胃癌患者有效選擇，但術(shù)前較難判斷患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)，影響患者預(yù)后預(yù)測(cè)［1］。 研究表明早期胃癌預(yù)后良好，5 年生存率高于90%，而存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者生存率常低于70%［2］，因此早期準(zhǔn)確判斷胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況對(duì)改善患者預(yù)后至為重要。 近期國內(nèi)外學(xué)者一致認(rèn)為長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和凋亡中發(fā)揮重要作用［3?4］，其中l(wèi)n?cRNAAK093987 目前廣泛應(yīng)用于各類腫瘤研究中。研究證實(shí)lncRNAAK093987 在小細(xì)胞肺癌組織中呈高表達(dá)，且lncRNAAK093987 參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展，有望成為肺癌患者預(yù)后評(píng)估的有效分子標(biāo)志物［5］。 另有研究表明lncRNAAK093987 在結(jié)腸癌發(fā)病、病情進(jìn)展中起重要作用［6］。 國內(nèi)關(guān)于ln?cRNAAK093987 表達(dá)與胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究尚處于初探階段，為此本研究收集78 例胃癌患者臨床資料，旨在探討lncRNAAK093987 與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2017 年1 月—2018 年1 月本院收治的78 例胃癌行手術(shù)治療患者臨床資料。 納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)術(shù)后病理結(jié)果證實(shí)為胃癌；臨床資料完整；存在外科手術(shù)治療適應(yīng)證；術(shù)前未接受放化療等輔助治療。 排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他類型惡性腫瘤；嚴(yán)重并發(fā)癥；合并高血壓病及重要臟器功能損傷；有器官移植史。 78 例均收集癌組織及癌旁（距癌灶邊緣≥5 cm）組織標(biāo)本。 78 例中男46 例，女32 例；年齡49～75（60．09±6．11）歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12 例；病程12～37（25．03±3．01）個(gè)月；病理類型：鱗癌53 例，腺癌25 例；分化程度：高分化13 例，中分化38 例，低分化27 例；TNM 分期：I 期12 例，Ⅱ期39 例，Ⅲ期15例，Ⅳ期12 例。1.2研究方法

1.2.1胃癌組織及癌旁組織中l(wèi)ncRNAAK093987表達(dá)量：采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)ln?cRNAAK093987 表達(dá)，具體步驟：RNA 提取→逆轉(zhuǎn)錄合成cRNA→引物設(shè)計(jì)→三步法擴(kuò)增→結(jié)果分析，以β?Actin 為內(nèi)參基因，每個(gè)樣本測(cè)3 次取平均Ct 值（相差0．5 個(gè)Ct 值舍棄）。 lncRNAAK093987正向引物序列為5＇?ACG?GAGGAGAGAGAGAATGT?3＇，反 向 引 物 序 列 為5＇?TACATGGGGAGACAAG?GATT?3＇。 讀取目的基因和內(nèi)參基因的Ct 值，采用2?△△CT 法 計(jì) 算 lncRNAAK093987mRNA 表 達(dá)水平。

1.2.2胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移影響因素：收集78 例性別、年齡、病理分期、分化程度、lncRNAAK093987 表達(dá)量等臨床資料，以手術(shù)病理結(jié)果將患者分為轉(zhuǎn)移組、無轉(zhuǎn)移組，應(yīng)用二元Logistic 回歸分析尋找胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素。

1.2.3lncRNAAK093987 表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性：78 例依據(jù)lncRNAAK093987 表達(dá)量中位數(shù)（7．35）為截點(diǎn)分為高表達(dá)組、低表達(dá)組，比較兩組術(shù)后2 年總生存率、無進(jìn)展生存率，分析患者ln?cRNAAK093987 表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性。 術(shù)后2 年以電話或復(fù)診形式進(jìn)行隨訪，末次隨訪時(shí)間為2020 年1 月。 無進(jìn)展生存率指患者從接受治療開始到觀察到疾病進(jìn)展或因任何原因發(fā)生死亡的這段時(shí)間內(nèi)的生存率。

1.3主要試劑 免疫印跡有關(guān)試劑、 ln?cRNAAK093987 序列購自上海百信生物科技公司，實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)試劑盒購自廣州銳博生物科技有限公司。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 20．0 軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。 采用Spearman 分析進(jìn)行相關(guān)性分析。 以α ＝0．05 為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1胃癌組織及癌旁組織中l(wèi)ncRNAAK093987 表達(dá)量比較 胃癌組織中l(wèi)ncRNAAK093987 表達(dá)量為（7．35±0．79）明顯高于癌旁組織中的（1．09±0.11），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝69．315，P＜0.001）。

2.2胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析 78 例胃癌出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移12 例，無轉(zhuǎn)移66 例。 兩組性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；兩組在病理分期、 分 化 程 度、 瘤 灶 大 小、 深 層 浸 潤(rùn) 及 ln?cRNAAK093987 表達(dá)量方面比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。

表1 78 例胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的單因素分析

2.3胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的二元Logistic 回歸分析 以胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為應(yīng)變量（有轉(zhuǎn)移＝1、無轉(zhuǎn)移＝0），以上述有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的單因素［分化程度：低分化＝1、中，高分化＝0；深層浸潤(rùn)：有＝1、無＝0；lncRNAAK093987 表達(dá)量：＞7．99 ＝1、≤7.99 ＝0）］為自變量進(jìn)行賦值，代入二元Logistic 回歸模型中進(jìn)行分析，結(jié)果顯示低分化程度、有深層浸潤(rùn)、ln?cRNAAK093987 表達(dá)量＞7．99 是胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素（P＜0.05 或P＜0.01），見表2。2.4lncRNAAK093987 表達(dá)量與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系 低表達(dá)組術(shù)后2 年總生存率、無進(jìn)展生存率明顯高于高表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05 或P＜0.01），見表3。

表2 78 例胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的二元Logistic 回歸分析

表3 lncRNAAK093987 表達(dá)量與78 例胃癌預(yù)后的關(guān)系［例（%）］

2.5胃癌患者lncRNAAK093987 表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析顯示：ln?cRNAAK093987 表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)，而與患者預(yù)后呈明顯負(fù)相關(guān)，見表4。

表4 78 例胃癌lncRNAAK093987表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的相關(guān)性分析

3 討論

淋巴結(jié)是胃癌轉(zhuǎn)移的重要途徑，早期胃癌有10%～15%的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率［7］。 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后密切相關(guān)，盡管根治術(shù)是目前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者有效治療手段，但對(duì)無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的早期胃癌患者，貿(mào)然采取胃癌根治術(shù)會(huì)造成過度治療，因此早期預(yù)測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)至為重要。 早期主要采用超聲內(nèi)鏡、CT 等影像學(xué)技術(shù)對(duì)胃癌進(jìn)行輔助檢查，但這些檢查手段無法在早期準(zhǔn)確判斷患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。 研究表明lncRNAs 可通過轉(zhuǎn)錄調(diào)控、mRNA 加工等參與腫瘤的生理、病理過程，lncRNAs表達(dá)水平與多種腫瘤病理特征和預(yù)后密切相關(guān)［8?10］，在腫瘤診治方面具備良好的臨床應(yīng)用前景。相關(guān)研究表明lncRNAAK093987 在彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤患者中呈高表達(dá)，lncRNAAK093987 或可作為反映彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后的標(biāo)志物［11］。 另有研究指出lncRNAAK093987 在胃癌組織中呈高表達(dá)，其表達(dá)水平與胃癌惡性程度存在明顯正相關(guān)［12］，提示lncRNAAK093987 可能參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。

本結(jié)果顯示，胃癌組織中l(wèi)ncRNAAK093987 表達(dá)量較癌旁組織中顯著增高，與Liu 等［13］研究結(jié)果大體類似，提示lncRNAAK093987 在癌組織中呈高表達(dá)。 本結(jié)果還顯示，低分化程度、有深層浸潤(rùn)、ln?cRNAAK093987 表達(dá)量＞7．99 是胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響因素。 深層浸潤(rùn)、分化程度一定程度反映了腫瘤的惡性程度，腫瘤分化程度越低、存在深層浸潤(rùn)表示癌灶侵襲性越強(qiáng)，腫瘤惡性程度就越高，故而推測(cè)存在深層浸潤(rùn)且分化程度低的患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)也越高，與權(quán)蕊良等［14］結(jié)論基本相符。研究表明lncRNAAK093987 轉(zhuǎn)錄水平低于蛋白質(zhì)編碼基因，且其表達(dá)存在高度的組織特異性，可精密調(diào)控并參與機(jī)體組織及細(xì)胞功能，參與腫瘤細(xì)胞的存活、增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為［15］。

此外，本結(jié)果同時(shí)顯示lncRNAAK093987 低表達(dá)胃癌患者術(shù)后2 年總生存率、無進(jìn)展生存率較高表達(dá)患者顯著增高，lncRNAAK093987 表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈明顯正相關(guān)，而與患者預(yù)后呈明顯負(fù)相關(guān)，初步說明lncRNAAK093987 表達(dá)量與胃癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。 盡管具體機(jī)制尚未明確，但是提示在胃癌患者治療期間動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)ln?cRNAAK093987 表達(dá)，能夠?yàn)榛颊吡馨徒Y(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的早期預(yù)警和預(yù)后判斷提供一定參考。

綜 上， 本 文 初 步 證 實(shí) 胃 癌 患 者 ln?cRNAAK093987 表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，其有望成為胃癌新型分子標(biāo)志物。