柴胡不同煎煮時間五柴胡飲對大鼠解熱、免疫作用的影響

王亞杰，周啟昕，周 佳，劉玥欣，王晉冀，徐 巖，黃曉巍

（長春中醫(yī)藥大學藥學院·吉林長春·130117）

中藥柴胡具有解表退熱、升舉陽氣、疏肝解郁的功效。臨床廣泛應用于感冒發(fā)燒，寒戰(zhàn)發(fā)熱、胸痛等?，F(xiàn)代藥理學研究證明，柴胡具有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、增強免疫力、抗抑郁及抗腫瘤等作用[1]。五柴胡飲始載于《景岳全書》：“柴胡1-3錢，當歸2-3錢，熟地3錢，白術2錢，白芍半錢，炙甘草1錢，用于中氣不足，外邪不散；傷寒，瘧疾，痘瘡”?！秱鶗贰ⅰ断刃妖S廣筆記》、《古今醫(yī)統(tǒng)大全》等古籍中記載：“和解藥先煎柴胡”[2-5]。通過前期化學研究，得到結論，柴胡煎煮35 min時，煎煮液中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量最高，依據(jù)國家中醫(yī)藥管理局2009年頒發(fā)的《醫(yī)療機構中藥煎藥室管理規(guī)范》中解表類復方湯劑對煎煮時間的相關規(guī)定，柴胡煎煮35 min即柴胡先煎15 min[6]，通過觀察柴胡不同煎煮時間對五柴胡飲解熱、免疫作用影響，探討柴胡的特殊煎煮時間，并深入探討五柴胡飲的免疫作用與抑制TLRs/NF-κB信號通路表達的相關性。

1 材料與方法

1.1 動物

Wistar大鼠 140 只，雌雄各半，體質量（220±20）g，由長春市億斯實驗動物技術有限責任公司提供，實驗動物生產許可證號：SCXK(吉)-2016-0003。

1.2 藥品與試劑

北柴胡飲片、熟地黃飲片、當歸飲片、白術飲片：河北祁一堂藥業(yè)有限公司，批號1702107、1708074、1709066、1704046；白芍飲片、炙甘草飲片：安國市輝發(fā)中藥飲片加工有限公司，批號160101、160809；布洛芬片，山東方明藥業(yè)集團股份有限公司，批準文號：國藥準字 H37022628， 批號：1807163；IL-4 ELISA kit、IL-10 ELISA kit、TNF-α ELISA kit 和 TLR-4ELISA kit，武漢酶免生物科技有限公司，貨號：MM-0191R1、MM-0195R1、MM-0180R1、MM-0221R1；IL-4一抗、IL-10一抗、TNF-α 一抗、TLR-4一抗、GAPDH一抗、HRP二抗，武漢三鷹生物技術有限公司，貨號：66142-1-Ig、60269-1-Ig、17590-1-AP、19811-1-AP、10494-1-AP、15134-1-AP）； 全蛋白提取試劑盒、BCA蛋白濃度測定試劑盒、ECL化學發(fā)光法檢測試劑盒、彩虹245廣譜蛋白Marker、SDSPAGE凝膠制備試劑盒：北京索萊寶科技有限公司，貨號：BC3711、PC0020、SW2010、PR1920、P1200-2。

1.3 儀器設備

煎藥壺 （廣東小熊電器有限公司，型號：YSHA15W6）；萬分之一分析天平（瑞士METTLER TOLEDO公司，型號：ME204）；足趾容積測量儀（成都泰盟科技有限公司，型號：PV-200）；電子溫度計（深圳美韻聲科技有限公司，型號：MS-8805）；高速冷凍離心機（德國 Eppendorf公司，型號：5424R）；酶標儀（美國Thermo公司，型號：Multiskan FC）；電動玻璃勻漿機（寧波新芝生物科技股份有限公司，型號：DY89-Ⅱ）；電泳儀、電轉儀、電泳槽 （伯樂bio-rad，型號：BE6085）；凝膠成像儀（英國 UVItec 公司，型號：Alliance Q9）。

1.4 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠解熱作用的影響

1.4.1 動物分組

Wistar大鼠 70 只，體重 180～220 g，雌雄各半，隨機分為7組，依次為：空白對照組、模型組、陽性對照組（洛芬布溶液 0.25 g·mL-1）、柴胡先煎 20、30、35、40 min組。

1.4.2 藥物制備

五柴胡飲的制備：稱取30g柴胡，加500mL水浸泡 30min，分別將柴胡先煎 0、10、15、20min 后加入已用500mL水浸泡30min的 20g當歸、30g熟地、20g白術、5g白芍、10g炙甘草繼續(xù)煎煮20min，過濾藥渣后濃縮至含柴胡濃度為1 g·mL-1，放涼，備用。陽性藥的制備：布洛芬溶液的制備，取藥品粉末40.00 g，用水160 mL制成濃度為0.25 g·mL-1溶液備用。

1.4.3 給藥劑量與方法

實驗動物進行2天的適應性飼養(yǎng)后，開始給予受試藥物。按10 mL·Kg-1劑量對各組大鼠灌胃給藥，模型對照組給予等體積的純凈水，連續(xù)給藥7d。

1.4.4 模型復制和指標檢測

在大鼠給藥前，測量體溫作為基礎體溫，末次給藥1h后，根據(jù)各組大鼠體質量10 mL·kg-1分別于皮下注射15%酵母混懸液，致發(fā)熱模型，分別于致熱后1、2.5、3、4、5、6、7、8 h 測量并記錄各組大鼠體溫。

1.5 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠免疫作用的影響

1.5.1 動物分組

同“1.4.1”。

1.5.2 藥物制備

同“1.4.2”。

1.5.3 給藥劑量與方法

同“1.4.3”。

1.5.4 模型復制和指標檢測

給藥前測量各組大鼠足趾體積，作為基礎數(shù)值，末次給藥1 h后，分別于各組大鼠足趾底部皮下注射蛋清液0.1 mL，致各組大鼠足趾急性發(fā)炎，分別于致炎后 0.5、1、2、3、4 h 時測量并記錄各組大鼠足趾體積，計算足趾腫脹率（足趾腫脹率=(體積-體積基礎)/體積基礎*100%）。

1.6 臟器指數(shù)測定

將“1.5”項下各組大鼠進行腹主動脈取血、處死，取血清、脾臟及胸腺，用濾紙吸干殘血后稱重。臟器指數(shù)=臟器濕重（g）/體重（g）*100%。

1.7 ELISA 檢測大鼠血清中 IL-4、IL-10、TNF 和TLR-4的水平

從-80℃超低溫冰箱取出血清，按武漢酶免生物科技有限公司提供的ELISA試劑盒說明書檢測各組大鼠血清中IL-4、IL-10、TNF和TLR-4的含量。

1.8 Westen blot檢測大鼠脾臟組織中IL-4、IL-10、TNF和TLR-4表達水平

取“1.5”項下各組大鼠脾臟0.1g，按北京索萊寶提供的全蛋白提取試劑盒說明書提取各組大鼠脾臟組織總蛋白，采用BCA蛋白定量試劑盒對樣品進行蛋白定量，調節(jié)蛋白濃度為2 g·L-1；將蛋白樣品與等體積2×樣品緩沖液混合后，100℃水浴5 min后即刻放入冰浴中冷卻；將樣品加入到放置好SDS-PAGE膠的加樣孔內，每孔加樣20μL，100V恒定電流轉膜60 min。轉膜結束后，取出PVDF膜，采用TBST洗滌3次，每次5 min，之后將膜放入5%脫脂奶粉中，水平搖床，室溫下封閉1 h。封閉結束后，將膜取出，TBST浸洗3次，每次5 min，向洗膜盒中加入相應的一抗（1∶1 000）稀釋液，4℃儲存，過夜。加 HRP 標記二抗（1:2 000），水平搖床，室溫封閉2 h。加入ECL發(fā)光液，室溫孵育膜1 min。將膜正面朝上放到凝膠成像儀內，照相、記錄結果。對電泳條帶進行灰度值掃描，對各目的蛋白進行半定量分析。以目的條帶與GAPDH灰度值的比值表示目標蛋白的相對表達量[7]。

1.9 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料均采用表示，多組均數(shù)組間比較采用t檢驗分析，P＜0.05表示具有顯著性差異。

2 結果

2.1 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠解熱作用的影響

各組大鼠皮下注射15%酵母混懸液后，均產生發(fā)熱現(xiàn)象。與空白對照組比較，模型組在注射15%酵母混懸液后 2.5、3、4、5、6、7、8 h 時，體溫明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）；與模型組比較，陽性對照組、柴胡先煎 15min 組在注射 15%酵母混懸液后 2.5、3、4、5、6、7、8 h 時，體溫明顯降低（P＜0.05 或 P＜0.01）；柴胡先煎10min、20min組在造模后2.5、3、4 h時，體溫明顯降低（P＜0.05或 P＜0.01）；柴胡先煎 0min組在造模后2.5、3、4 h 時，體溫明顯降低（P＜0.05），結果表明，柴胡先煎15 min，解熱效果最為顯著，持續(xù)時間最長，詳見表1。

表1 柴胡不同煎煮時間對五柴胡飲解熱作用的影響結果（n=10，±s）Table 1 Effect of Different Boiled Time of Bupleurum on Antipyretic Effect of Wuchaihu Drink（n=10，±s）

組別 1h體溫（℃） 2.5h體溫（℃） 3h體溫（℃） 4h體溫（℃）空白對照組 36.47±0.15 36.52±0.16 36.56±0.16 36.59±0.17模型組 36.23±0.19 36.82±0.30# 37.87±0.45# 38.73±0.59#陽性對照組 36.11±0.28 36.37±0.24△ 36.75±0.27△ 37.29±0.32△柴胡先煎0min組 36.19±0.27 36.50±0.12△△ 37.44±0.51△△ 38.11±0.52△△柴胡先煎10min組 36.14±0.26 36.44±0.17△ 37.28±0.69△△ 37.87±0.43△柴胡先煎15min組 36.12±0.35 36.41±0.17△ 36.96±0.41△ 37.54±0.36△柴胡先煎20min組 36.15±0.18 36.49±0.14△△ 37.32±0.59△△ 37.92±0.49△

續(xù)表1 柴胡不同煎煮時間對五柴胡飲解熱作用的影響結果（n=10，±s）Table 1 Effect of Different Boiled Time of Bupleurum on Antipyretic Effect of Wuchaihu Drink （n=10，±s）

續(xù)表1 柴胡不同煎煮時間對五柴胡飲解熱作用的影響結果（n=10，±s）Table 1 Effect of Different Boiled Time of Bupleurum on Antipyretic Effect of Wuchaihu Drink （n=10，±s）

注：與空白對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.01，△△ P＜0.05。

組別 5h體溫（℃） 6h體溫（℃） 7h體溫（℃） 8h體溫（℃）空白對照組 36.65±0.17 36.69±0.23 36.64±0.18 36.61±0.14模型組 38.41±0.32# 38.09±0.40# 37.73±0.37# 37.28±0.43#陽性對照組 37.39±0.36△ 37.25±0.40△ 37.17±0.19△ 36.76±0.30△柴胡先煎 0min 組 38.27±0.18 37.85±0.34 37.63±0.32 37.23±0.29柴胡先煎 10min 組 38.02±0.39 37.69±0.27 37.45±0.25 37.01±0.34柴胡先煎15min組 37.70±0.38△ 37.46±0.39△△ 37.29±0.32△△ 36.93±0.35△△柴胡先煎 20min 組 38.07±0.32 37.72±0.33 37.51±0.28 37.06±0.44

2.2 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠免疫作用的影響

蛋清致大鼠足趾腫脹屬于異種蛋白的刺激引起的炎性反應，一般持續(xù)4～6 h。本研究各組大鼠于足趾部皮下注射蛋清后，均產生足趾腫脹現(xiàn)象。與空白對照組比較，模型組在注射蛋清液后1、2、3、4 h時，足趾腫脹率明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性對照組（布洛芬溶液）、柴胡先煎0、10、20 min組在注射蛋清液后 1、2、3、4 h 時，足趾腫脹率明顯降低（P＜0.05或P＜0.01），柴胡先煎15 min組時對大鼠足趾腫脹的抑制作用最強（P＜0.01），詳見表2。

表2 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠足趾腫脹的影響結果（n=10，±s）Table 2 Effect of different decoction time Bupleurum on Wuchaihu drink on toe swelling of rats（n=10，±s）

表2 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠足趾腫脹的影響結果（n=10，±s）Table 2 Effect of different decoction time Bupleurum on Wuchaihu drink on toe swelling of rats（n=10，±s）

注：與空白對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.01，△△ P＜0.05。

組別 1h（%） 2h（%） 3h（%） 4h（%）空白對照組 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00 0.00±0.00模型組 72.36±8.78# 59.18±5.35# 50.97±5.14# 40.77±6.85#陽性對照組 41.63±4.01△ 37.29±4.20△ 31.99±3.64△ 24.68±3.63△柴胡先煎0min組 61.21±4.43△△ 52.32±6.40△△ 48.05±4.53 38.81±2.74柴胡先煎10min組 54.94±6.51△ 48.56±6.54△△ 44.17±4.82△△ 32.76±2.12△△柴胡先煎15min組 44.16±4.02△ 38.82±4.64△ 33.69±2.80△ 27.51±2.34△柴胡先煎20min組 55.34±6.11△ 49.51±7.45△△ 44.74±5.35△△ 32.97±2.34△△

2.3 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠臟器指數(shù)的影響

胸腺和脾臟反映人體免疫功能的淋巴器官，當收到炎性介質刺激時，胸腺和脾臟會發(fā)生明顯的變化，產生相應的免疫反應，以代償性增大為主要表現(xiàn)。本研究觀察了各組動物的臟器指數(shù)變化，結果表明，與空白對照組比較，模型組動物脾臟指數(shù)明顯增加（P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照組、柴胡先煎10 min、15 min組大鼠脾臟指數(shù)顯著降低 （P＜0.05或 P＜0.01），說明柴胡先煎15 min時對大鼠的胸腺、脾臟腫大治療效果最顯著，詳見表3。

表3 各組動物脾臟指數(shù)的比較（n=10，±s）Table 3 Comparison of animal spleen index in each group（n=10，±s）

表3 各組動物脾臟指數(shù)的比較（n=10，±s）Table 3 Comparison of animal spleen index in each group（n=10，±s）

注：與空白對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.01，△△ P＜0.05。

組別 胸腺指數(shù) 脾臟指數(shù)空白對照組 0.10±0.013 0.28±0.031模型組 0.18±0.025# 0.48±0.094#陽性對照組 0.12±0.017△ 0.33±0.045△柴胡先煎0min組 0.15±0.022△△ 0.43±0.055柴胡先煎10min組 0.15±0.024△△ 0.42±0.053△△柴胡先煎15min組 0.12±0.020△ 0.37±0.044△△柴胡先煎20min組 0.15±0.023△△ 0.42±0.062

2.4 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠血清中IL-4、IL-10、TNF-α 和 TLR-4水平的影響

ELISA法檢測表明，與空白對照組比較，模型組大鼠血清IL-4、IL-10、TNF-α和TLR-4水平明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性對照組、柴胡先煎10、15、20 min 組大鼠血清 IL-4、IL-10、TNF-α 和 TLR-4水平明顯降低（P＜0.01），柴胡先煎15 min大鼠的免疫作用最強，詳見表4。

2.5 不同煎煮時間柴胡對五柴胡飲對大鼠脾臟中免疫因子IL-4、IL-10、TNF-α和TLR-4水平的影響

Western Blot檢測結果表明，與空白對照組比較，模型組大鼠脾臟中IL-4、IL-10、TNF-α和TLR-4表達水平明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，陽性對照組大鼠脾臟組織中IL-4、IL-10、TNF-α和TLR-4含量均有明顯降低（P＜0.01）；柴胡先煎 10 min、15min 時大鼠脾臟組織中IL-4、IL-10水平明顯降低 （P＜0.01），柴胡先煎 0、10、15、20 min 大鼠脾臟組織中TNF-α和TLR-4含量均有明顯降低 （P＜0.05或P＜0.01），詳見表5，圖1。

表4 各組大鼠血清中 IL-4、IL-10、TNF 和 TLR-4 水平（n=10，±s）Table 4 Expression levels of IL-4,IL-10,TNF-αand TLR-4 in of rats in each group

表4 各組大鼠血清中 IL-4、IL-10、TNF 和 TLR-4 水平（n=10，±s）Table 4 Expression levels of IL-4,IL-10,TNF-αand TLR-4 in of rats in each group

注：與空白對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.01，△△ P＜0.05。

組別 IL-4（ng/L） IL-10（ng/L） TNF-α（ng/L） TLR-4（ng/mL）空白對照組 186.08±14.73 78.64±5.30 101.13±4.26 1.26±0.14模型組 243.34±18.81# 101.92±4.68# 129.56±5.90# 30.23±3.24#陽性對照組 199.20±13.82△ 82.63±4.24△ 105.87±7.30△ 12.81±1.83△柴胡先煎 0min 組 226.14±22.62 97.31±4.69 125.77±6.74 24.19±2.08 △柴胡先煎10min組 214.57±18.61△ 92.63±4.03△ 114.28±5.75△ 21.33±2.62△柴胡先煎15min組 207.53±17.21△ 87.69±3.89△ 111.15±4.39△ 16.01±1.75△柴胡先煎20min組 218.97±11.97△ 94.93±2.64△ 119.33±4.68△ 22.53±2.45△

表5 各組大鼠脾臟中 IL-4、IL-10、TNF-α 和 TLR-4水平（n=3,±s）Table 5 Expression levels of IL-4,IL-10,TNF-αand TLR-4 in spleen of rats in each group

表5 各組大鼠脾臟中 IL-4、IL-10、TNF-α 和 TLR-4水平（n=3,±s）Table 5 Expression levels of IL-4,IL-10,TNF-αand TLR-4 in spleen of rats in each group

注：與空白對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.01，△△ P＜0.05。

組別 IL-4 IL-10 TNF-α TLR-4空白對照組 0.50±0.054 0.21±0.015 0.68±0.022 0.041±0.0052模型組 0.72±0.047# 0.47±0.040# 1.11±0.15# 0.54±0.039#陽性對照組 0.044±0.0084△ 0.32±0.022△ 0.07±0.003△ 0.30±0.027△柴胡先煎0min組 0.79±0.060 0.52±0.015 0.65±0.042△ 0.50±0.028△△柴胡先煎10min組 0.30±0.030△ 0.41±0.035△ 0.41±0.055△ 0.35±0.033△柴胡先煎15min組 0.21±0.030△ 0.38±0.039△ 0.32±0.026△ 0.33±0.034△柴胡先煎20min組 0.55±0.033△ 0.43±0.031△△ 0.66±0.074△ 0.39±0.056△

圖1 各組大鼠脾臟組織中IL-4、IL-10、TNF-α和TLR-4表達電泳圖Figure 1 Electrophoresis of IL-4,IL-10,TNF-αand TLR-4 expression in spleen of rats in each group

3 討論

柴胡是傳統(tǒng)醫(yī)學中解表藥的代表藥物，具有疏散退熱、疏肝解郁、升陽舉氣等功效[6]。前期研究結果表明，柴胡在煎煮35 min時有效成分溶出率最高，而解表類中藥的煎煮時間一般規(guī)定為20 min，故柴胡應以先煎15 min為宜。本次研究依據(jù)前期研究結果，制定實驗內容，致痛動物模型主要包括熱刺激和化學刺激兩種。本研究采用熱板法復制大鼠疼痛模型，具有造模時間短，結果明顯，可多次檢測等優(yōu)點[8-10]。結果表明，與空白對照組相比，感冒疏風片組、陽性對照組、柴胡先煎15min組大鼠的痛閾時間存在顯著性差異，柴胡先煎15min的五柴胡飲溶液可將大鼠的痛閾時間自22 s延長至37 s，鎮(zhèn)痛效果顯著。

復制非特異性炎癥動物模型主要依據(jù)炎癥的發(fā)生、發(fā)展過程，采用冰醋酸、組胺、二甲苯等化學物質進行模型復制[11]。本研究采用蛋清進行大鼠足腫脹的動物模型復制，操作難度低，使用排水法進行數(shù)據(jù)監(jiān)測可反復多次測量，減小誤差[12]。本研究結果表明，MG造模1h后產生明顯的足趾部腫脹，與空白組差異明顯，模型可持續(xù)4～6h，各給藥組動物足趾腫脹率均有不同程度下降，柴胡先煎15min組差異最顯著。脾臟和胸腺是人體免疫系統(tǒng)的重要器官，臟器系數(shù)常被用來評價機體免疫功能。本研究實驗結果表明，免疫缺陷模型大鼠脾臟和胸腺系數(shù)明顯升高，代表機體發(fā)生炎癥反應時，免疫器官會發(fā)生代償性增大或水腫。五柴胡飲可明顯降低模型大鼠的脾臟和胸腺系數(shù)，提高機體的免疫功能。結果表明，柴胡先煎15 min時的五柴胡飲煎煮液對大鼠的胸腺、脾臟腫大治療效果最顯著。

TLRS/NF-κB信號通路的相關表達與機體的免疫調節(jié)息息相關，TLRS/NF-κB信號通路上的蛋白因子不僅參與機體炎癥反應，調節(jié)細胞內外的正、負反饋調節(jié)，還參與淋巴細胞的合成，調節(jié)細胞因子與生長因子[13]。白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）、TNF-α、TOLL樣受體-4（TLR-4）均是該通路上重要的信號分子，這些信號因子的蛋白表達對機體免疫反應存在一定影響。IL-4是T細胞產生的一種細胞因子，通過與B細胞相應受體結合，活化抗原表達，促進B細胞增殖[14]。IL-4大量產生后對其生成的前體物質具有一定的決定作用，外源性IL-4可以誘導Th2細胞分化為Th2效應細胞，繼而大量分泌IL-4、IL-13等細胞因子，引起機體發(fā)生變態(tài)反應、哮喘等[15]。研究表明，IL-4可以抑制 IκB激酶 （IKK）、髓樣分化因子（MyD88）的活性，進而抑制TLRS/NF-κB信號通路的活化活化[16]。IL-10是一種由CD4+T、CD8+T細胞、B細胞、Thl、Th2細胞等細胞產生，具有抑制炎性介質釋放，產生免疫抑制的作用[17]。IL-10抑制單核巨噬細胞的生成，降低其抗原呈遞作用，通過抑制NF-κB對DNA的結合活性及抑制IκB激酶的活性來抑制NF-κB的激活[18]。TNF-α是一種由活化的巨噬細胞產生，參與細胞的損傷、拮抗病毒活性、促進成纖維細胞增殖、誘導細胞凋亡、激活核轉錄因子生物活性的蛋白質，通過促進 IL-1、IL-2、IL-6、IL-8 等免疫因子的產生，參與全身免疫反應[19]。TNF-α刺激內皮細胞和巨噬細胞分泌IL-1和GM-CSF等炎性因子，導致炎癥的發(fā)生和發(fā)展，通過激活一氧化氮合酶(iNOS)，促進NO合成，進而刺激單核細胞釋放IL-8，使炎癥反應加重[20]。TLR-4是一種廣泛分布于免疫細胞、心肌細胞和呼吸道上皮細胞以及絕大多數(shù)惡性腫瘤細胞的跨膜蛋白，具有促進T細胞和肝濾泡輔助性細胞的繁殖和分化，促進炎癥因子干細胞轉錄因子、半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）合成和分泌的功能[21]。研究表明TLR-4通過活化NF-κB信號通路，介導IL-1、IL-6、TNF-α炎性因子大量釋放，而加重組織損傷，通過來上調炎性因子COX-2和提高前列腺素E2、金屬蛋白酶的表達[22]。研究結果表明，柴胡先煎15min的五柴胡飲溶液，可以顯著降低模型大鼠的血清、脾臟TNF-α水平，抑制模型大鼠的炎癥反應。TLR-4是TLRS家族表達最廣泛的免疫因子，其表達水平的提高可以激活TLRS/NF-κB信號通路，減弱機體免疫系統(tǒng)對炎性細胞的監(jiān)視和殺滅作用。研究結果表明，柴胡先煎15min的五柴胡飲溶液，可以顯著降低模型大鼠的血清、脾臟TLR-4水平，抑制模型大鼠的炎癥反應。