廣東主要海洋經(jīng)濟(jì)物種增殖放流初期存活率探討

周艷波　陳丕茂　馮雪　袁華榮

摘要 通過模擬廣東主要海洋經(jīng)濟(jì)物種種苗在增殖放流的運(yùn)輸過程和放流初期機(jī)械損傷、環(huán)境突變和敵害生物捕食等因素的影響，掌握其放流初期存活率，并結(jié)合放流初期其生理生化指標(biāo)分析，探討放流運(yùn)輸對其生理狀況的影響。結(jié)果表明，在降溫桶裝運(yùn)輸、抄網(wǎng)撈取投放、模擬敵害生物捕食條件下，紫紅笛鯛（Lutianu sargentimaculatus）、紅笛鯛（Lutjanus sanguineus）、黑鯛（Sparus macrocephlus）和斑節(jié)對蝦（Penaeus monodonsudden）的初期存活率分別為85.4%、83.1%、75.5%和91.1%。在蝦苗袋充氧密封運(yùn)輸、模擬敵害生物捕食條件下，斑節(jié)對蝦的放流初期存活率為91.9%;紫紅笛鯛種苗降溫桶運(yùn)輸放流3 h后，種苗體內(nèi)肝、鰓組織的SOD活性、MDA含量均升至最高，肝組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的2.6和2.9倍;鰓組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的1.77和2.36倍;AChE活性則無顯著性差異，說明降溫桶運(yùn)輸放流3 h前后對紫紅笛鯛種苗產(chǎn)生的脅迫作用最強(qiáng)。

關(guān)鍵詞 海洋經(jīng)濟(jì)物種;增殖放流;運(yùn)輸;存活率

中圖分類號 S931.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2020）22-0103-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.22.027

Study on the Survival Rate of Main Marine Economic Species during Initial Enhancement and Releasing Stages in Guangdong Province

ZHOU Yan-bo，CHEN Pi-mao，F(xiàn)ENG Xue et al （South China Sea Fisheries Research Institute， Chinese Academy of Fishery Sciences， Key Laboratory of Marine Ranch Technology of CAFS， Scientific Observing and Experimental Station of South China Sea Fishery Resources and Environment of? Ministry of Agriculture and Rural Affairs，Key Laboratory of Fishery Ecology Environment in Guangdong Province，Guangzhou， Guangdong? 510300）

Abstract This experiment simulated the transportation of main marine economic species during the proliferation-releasing process and the influences of the mechanical damage， environmental mutation and predator predators during the initial releasing period， in order to study the survival rate during the initial releasing period. Based on the physiological and biochemical indices analysis of marine economic species， the influences of releasing and transportation on the physiological condition of marine economic species were discussed. The results showed that the initial survival rate of Lutianu sargentimaculatus， Lutjanus sanguineus， Sparus macrocephlus and Penaeus monodons were 85.4%，83.1%，75.5% and 91.1% respectively under the conditions of cooling barrel transport， dip net for delivery，? predating by simulating hostile organisms. Under the conditions of oxygenation and sealed transport in shrimp bags and predating by simulating hostile organisms， the initial releasing survival rate of Penaeus monodonsudden was 91.9%. After? the cooling barrel transport and releasing 3 h， SOD activity and MDA content in the? liver and gill tissues reached the highest values. SOD activity and MDA content in liver tissues were 2.6 and 2.9 times as that of control group， SOD activity and MDA content in gill tissues were 1.77 and 2.36 times as that of control group. But AChE activity had no significant difference with control group. The results indicated that the stress on L.sargentimaculatus seedlings was the strongest after the cooling barrel transport and releasing 3 hours.

Key words Marine economic species;Enhancement and releasing;Transport;Survival rate

基金項(xiàng)目 國家科技支撐計(jì)劃課題（2012BAD18B02）;國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目（201003068）;中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（2015TS05，2012TS09）。

作者簡介 周艷波（1983—），男，河南周口人，助理研究員，碩士，從事海洋牧場與資源增殖研究。*通信作者，研究員，從事漁業(yè)資源保護(hù)與利用等方面研究。

收稿日期 2020-04-12

增殖放流是指用人工方法向天然水域投放魚、蝦、貝和藻等水生生物的幼體（或成體或卵等）以增加種群數(shù)量、改善和優(yōu)化水域的漁業(yè)資源群落結(jié)構(gòu)，從而達(dá)到增殖漁業(yè)資源、改善水域環(huán)境、保持生態(tài)平衡的目的[1]。海洋物種增殖放流已成為恢復(fù)和增殖海洋漁業(yè)資源、促進(jìn)沿海漁民增產(chǎn)增收的重要措施。漁業(yè)資源種類在生活史過程中的死亡高峰期，是處在產(chǎn)卵以后的幼體及仔稚魚期，增殖放流的種苗經(jīng)過人工培育，避過了在自然環(huán)境中的死亡高峰階段，如果在增殖放流初期能有效保障種苗的存活率，就能非常高效地補(bǔ)充漁業(yè)資源的補(bǔ)充群體。同時，增殖放流初期放流種類的存活率是評估增殖放流效果的重要參數(shù)，若能摸清增殖放流初期存活率，對于提高增殖放流評估結(jié)果的準(zhǔn)確性有重要意義。摸清增殖放流初期存活率包括種苗放養(yǎng)時易池放養(yǎng)時生態(tài)環(huán)境的變化引起的“突然死亡”、稱重計(jì)數(shù)引起的“機(jī)械損傷死亡”和種苗放養(yǎng)期間敵害魚類的“捕食死亡”[2]。對自然死亡率的估算方法主要有漁獲量曲線分析方法[3]、標(biāo)記-回捕法[4-6]等，國內(nèi)外也有一些學(xué)者做過增殖放流前期魚類行為的研究[7]。筆者通過模擬廣東主要海洋經(jīng)濟(jì)物種紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦等種苗在增殖放流過程和增殖放流初期在機(jī)械損傷、環(huán)境突變和敵害生物捕食等因素影響下的存活率和生理生化變化試驗(yàn)，研究放流過程突然死亡率和放流初期存活率，探討增殖放流對放流物種生理狀況的影響，以期為廣東沿海乃至全國增殖放流的實(shí)施及效果評價提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

研究目標(biāo)種類為廣東海域主要增殖放流種類紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛、斑節(jié)對蝦種苗。魚苗規(guī)格為3～5 cm，蝦苗規(guī)格為1～3 cm。受試生物購自廣東省深圳市南澳海域附近的育苗場。

試驗(yàn)在中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所深圳試驗(yàn)基地的室內(nèi)受控流水式水泥池進(jìn)行，試驗(yàn)池和對照池面積均為20 m2，水深均為1.5 m，試驗(yàn)時海水鹽度為31.70，pH 8.08，溶解氧含量控制在5.6～6.3 mg/L。

1.2 增殖放流初期存活率試驗(yàn)

魚類降溫桶裝運(yùn)輸試驗(yàn)時，試驗(yàn)池和對照池中均各投放紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛苗種約2 000尾。試驗(yàn)水池內(nèi)溫度均為各個種苗育苗場水池溫度（如紫紅笛鯛育苗時溫度為30 ℃），此后用抄網(wǎng)將試驗(yàn)魚從池中撈至魚苗運(yùn)輸車的降溫桶中，其時降溫桶中海水溫度為20 ℃，運(yùn)輸2～3 h后，用抄網(wǎng)將受試生物從降溫桶中轉(zhuǎn)移至試驗(yàn)池內(nèi)，其時試驗(yàn)池內(nèi)海水水溫為廣東省6月份天然海水水溫27.8 ℃。對照池中水溫一直保持在27.8 ℃。進(jìn)行蝦類試驗(yàn)時，試驗(yàn)池和對照池中相應(yīng)各投放斑節(jié)對蝦約3 000尾。降溫桶裝運(yùn)輸試驗(yàn)過程同魚類，進(jìn)行蝦苗袋運(yùn)輸試驗(yàn)時，充氧量為水體量的1.5倍。在海水加入10%的海水冰。此外，在試驗(yàn)池內(nèi)中放置作為放流種苗敵害生物的體重15.6 g 的黑鯛3尾（根據(jù)拖網(wǎng)調(diào)查所得的海域敵害生物資源密度計(jì)算確定），對照組中不放置敵害生物。試驗(yàn)組和對照組每天均投放不影響水質(zhì)的少量餌料。

試驗(yàn)開始后，每2 h觀測1次受試魚的狀況，測定池水pH、溶解氧和溫度，記錄試驗(yàn)魚的異常行為如魚體側(cè)翻、失去平衡、游泳能力減弱、呼吸功能減弱、色素沉積等。如受試魚沒有任何肉眼可見運(yùn)動，如不游動、鰓不扇動、碰觸尾柄后無反應(yīng)等，即判斷該魚已死亡，取出并記錄死魚數(shù)目。試驗(yàn)期30 d。

1.3 增殖放流初期生理生化指標(biāo)的變化

選取廣東省典型增殖放流苗種——紫紅笛鯛作為研究對象，探討降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼魚生理生化指標(biāo)的影響。試驗(yàn)開始后分別在30 ℃育苗池中、20 ℃降溫桶運(yùn)輸途中、27.8 ℃試驗(yàn)水池中1、3、6、24、48和96 h后從每組每次隨機(jī)抽取10尾受試放流生物，根據(jù)取樣品的順序分別將樣品編號為Y30、T20、S1、S3、S6、S24、S48、S96。用潔凈海水沖洗后置于冰盤內(nèi)，快速解剖并分別對紫紅笛鯛幼魚肝、鰓、腦、肌肉等部位各取樣0.5～1.0 g，用0.86%預(yù)冷生理鹽水淋洗，濾紙吸附后用預(yù)冷的Tris-HCl緩沖液（0.01 mol/L Tris，0.25 mol/L蔗糖，0.1 mol/L EDTA，pH 7.5）勻漿，6 000 r/min離心10 min后，立刻取上清液進(jìn)行蛋白質(zhì)含量和酶活力測定，肝的勻漿比例為1∶ 4、鰓和腦的勻漿比例為1∶9[組織質(zhì)量（g）/緩沖液體積（mL）]分別進(jìn)行生理生化應(yīng)激指標(biāo)（丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD、乙酰膽堿酯酶AchE等）測定。

酶活性測定按照南京建成生物工程研究所蛋白質(zhì)試劑盒，SOD試劑盒、MDA試劑盒和AchE試劑盒的使用說明操作，反應(yīng)液吸光值使用UV-5100紫外可見光分光光度計(jì)測定。

綜合運(yùn)輸過程和放流過程中的水溫變化、機(jī)械損傷、敵害生物捕食等以及受試放流生物產(chǎn)生的應(yīng)激性分析，估算增殖放流過程中的放流種類突然死亡率和存活率。

1.4 數(shù)據(jù)處理 利用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對生理生化指標(biāo)進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，P<0.05 表示顯著相關(guān)。

2 結(jié)果與分析

2.1 放流過程中試驗(yàn)生物存活率的測定結(jié)果

該研究通過模擬增殖放流種苗在機(jī)械損傷、環(huán)境、突變、敵害生物捕食等因素影響下的存活率試驗(yàn)，研究紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛3種放流魚類和斑節(jié)對蝦1種放流蝦類的放流過程的存活率。

在降溫桶裝運(yùn)輸、抄網(wǎng)撈取投放、敵害生物投放條件下，紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的放流過程存活率分別為85.4%、83.1%、75.5%和91.1%（表1），即增殖放流前期突然死亡率分別為14.6%、16.9%、24.5%和8.9%。在蝦苗袋充氧密封運(yùn)輸、敵害生物投放條件下，斑節(jié)對蝦的放流過程存活率為91.9%，即增殖放流前期突然死亡率為8.1%。對照組紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的暫養(yǎng)存活率分別為94.5%、97.9%、94.1%和95.9%。

2.2 降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼魚肝、鰓組織SOD活性的影響 從圖1可以看出，降溫桶運(yùn)輸方式對紫紅笛鯛幼魚肝組織中的SOD活性有顯著的促進(jìn)作用，在運(yùn)輸過程中及放入試驗(yàn)水池后1 h內(nèi)，試驗(yàn)組與對照組SOD酶活性無顯著差異（P<0.05）;放入試驗(yàn)水池1～3 h內(nèi)，紫紅笛鯛幼苗肝組織的SOD活性明顯達(dá)到最高值，此后隨之降低，12 h后趨于穩(wěn)定。從圖2可以看出，降溫桶運(yùn)輸方式對紫紅笛鯛幼魚鰓組織中的SOD活性也有顯著的促進(jìn)作用，但與肝組織中SOD活性的差異在于放入試驗(yàn)水池3 h后SOD活性達(dá)到最大值，此后隨著時間的增加而遞減，96 h后趨于穩(wěn)定。

2.3 降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼苗肝、鰓組織MDA含量的影響 由圖3～4可知，降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼苗肝組織和鰓組織中的MDA含量均有明顯影響，在試驗(yàn)開始時，由于試驗(yàn)水池水溫高于對照池，試驗(yàn)組內(nèi)幼苗肝組織中的MDA含量高于對照組，但無顯著差異，之后用降溫桶運(yùn)輸，進(jìn)行2次機(jī)械損傷，試驗(yàn)組MDA 含量逐漸降低，在運(yùn)輸后放入試驗(yàn)水池1 h后達(dá)到最低點(diǎn)，但在放入試驗(yàn)水池3 h后MDA含量達(dá)到最高值，此后隨之降低，48 h后趨于穩(wěn)定。鰓組織中MDA含量與肝組織較為類似，放入試驗(yàn)水池3 h后，MDA含量明顯達(dá)到最高，但恢復(fù)穩(wěn)定時間較短，6 h后趨于穩(wěn)定。

2.4 降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼苗腦組織AChE活性的影響

乙酰膽堿酯酶（AChE）是生物神經(jīng)傳導(dǎo)中的關(guān)鍵性酶。由圖5可知，降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼魚腦組織中的AChE活性影響不甚明顯。與對照組相比，放入試驗(yàn)水池3 h后AChE活性降低至最低值，但無顯著性差異;96 h后趨于穩(wěn)定。

3 討論

3.1 放流過程對紫紅笛鯛幼魚死亡率的影響

增殖放流的魚類肯定會在自然環(huán)境中出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象，正確分析出自然死亡的數(shù)量可以減少對增殖放流評價的誤差，是不容忽視的數(shù)據(jù)。因?yàn)橛绊懸蛩靥?，不能?zhǔn)確得到這個數(shù)值。因此，需要用試驗(yàn)的方法，通過分析試驗(yàn)結(jié)果來估算。盡管實(shí)際上自然死亡率隨著時間、年齡和世代的不同而變化，由于在估計(jì)方法上的困難，它通常都是被當(dāng)作常量來處理的[8]。漁獲量曲線分析法往往適用于開發(fā)初期的漁業(yè)種群， 因?yàn)檫@一時期的捕撈死亡率（F）是可以被忽略的， 而當(dāng)種群開發(fā)程度較大時這種方法便不甚適用。經(jīng)驗(yàn)公式對自然死亡率的估算也只是一個粗略的估計(jì)[9]。增殖標(biāo)志放流的魚苗需要從魚池里運(yùn)輸?shù)椒帕鞯攸c(diǎn)，在運(yùn)輸過程中也會對魚苗造成損傷，影響到放流苗種的存活率。對長江刀鱭進(jìn)行裝載和運(yùn)輸脅迫后，4 h運(yùn)輸后死亡率達(dá)到23.33%，而加鹽應(yīng)激后死亡率則大大降低[10]。降低運(yùn)輸密度，也可使運(yùn)輸死亡率下降[11]。在放流苗種運(yùn)輸時添加氨酪酸能有效緩解魚體的一些應(yīng)激敏感指標(biāo)，減少對魚類機(jī)體的損傷[12]，因此，放流運(yùn)輸時要加入少量的緩解劑。該研究中在降溫桶裝運(yùn)輸、抄網(wǎng)撈取投放、敵害生物投放條件下，紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的增殖放流前期突然死亡率分別為14.6%、16.9%、24.5%和8.9%。

3.2 降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼魚生理生化指標(biāo)的影響

魚類的應(yīng)激反應(yīng)是魚體對體內(nèi)外各種環(huán)境因子的超長刺激所產(chǎn)生的一種非特異性生理反應(yīng)，以使機(jī)體適應(yīng)超出正常生理調(diào)節(jié)范圍的環(huán)境變化要求[13]。

增殖放流的種苗的放流過程包括從育苗池或中間培育池裝載到低溫、高密度運(yùn)輸再到低密度、高溫放流環(huán)境的變化過程，增殖放流期間種苗主要受溫度變化及密度變化的脅迫影響。研究顯示，運(yùn)輸脅迫銀鯧時會導(dǎo)致其血清皮質(zhì)醇含量顯著升高，血糖、血清與肌肉中乳酸含量在運(yùn)輸脅迫后均顯著升高;肝臟與肌肉中糖元含量在運(yùn)輸脅迫后均顯著降低，但在整個運(yùn)輸脅迫過程中，肝臟組織中糖元含量的降低程度明顯高于肌肉組織[14]。

肝臟是試驗(yàn)生物最大的解讀器官，當(dāng)受到脅迫效應(yīng)時，其內(nèi)部的SOD及MDA含量將直接反映其應(yīng)激程度;鰓是脅迫物的直接作用器官， 脅迫直接誘導(dǎo)其酶活性。SOD是一種誘導(dǎo)酶，當(dāng)生物體受到脅迫時，細(xì)胞的氧化損傷時SOD的活性會受到誘導(dǎo)而含量增加，所以SOD活性的改變可反映魚體受脅迫的程度。丙二醛（MDA）的含量也可指示魚體的受脅迫程度。研究結(jié)果表明，紫紅笛鯛幼魚鰓和肝組織中的SOD活性和敏感性明顯不同，經(jīng)過低溫-高密度脅迫效應(yīng)后，脅迫效應(yīng)達(dá)到最高值時為運(yùn)輸后3 h，種苗體內(nèi)肝、鰓組織的SOD活性、MDA含量均升至最高值，與對照組相比肝組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的2.6和2.9倍，鰓組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的1.77和2.36倍，SOD活性測定結(jié)果與有關(guān)學(xué)者對魚類的脅迫試驗(yàn)結(jié)果相似。魚體中肝和鰓的生理功能不同，肝中的SOD活性高且敏感性高。因此，脅迫作用對肝SOD活性表現(xiàn)出促進(jìn)作用，脅迫條件下肝SOD活性比鰓高，且肝組織SOD活性也較鰓中的先被激活[15-18]。但有些學(xué)者的研究表明在脅迫作用下，SOD的肝臟內(nèi)是先抑制后升高，但該次試驗(yàn)數(shù)據(jù)沒有顯示到該過程[19]。該研究結(jié)果顯示雖然紫紅笛鯛幼魚鰓和肝中SOD活性與MAD含量的變化規(guī)律差異不大，但低溫-高密度脅迫下紫紅笛鯛抗氧化酶體系內(nèi)各種酶對其脅迫的敏感性差異也較小。

乙酰膽堿脂酶（AChE）是生物神經(jīng)傳導(dǎo)中的關(guān)鍵性酶，能降解乙酰膽堿，終止神經(jīng)遞質(zhì)對后膜的刺激作用，保證神經(jīng)沖動在突觸間正常傳導(dǎo)。一般認(rèn)為， 魚體20%以上的AChE被抑制可認(rèn)為脅迫作用存在;50%AChE被抑制可認(rèn)為危害魚體生存，70%～80%的AChE被抑制則可能導(dǎo)致死亡。該試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)降溫桶運(yùn)輸對紫紅笛鯛幼魚有抑制作用，這與有關(guān)學(xué)者做脅迫物質(zhì)的結(jié)果較為類似[20-23]。但AChE的抑制率均在20%以下，說明降溫桶運(yùn)輸對試驗(yàn)魚腦組織中AChE活性的脅迫不甚明顯。

4 結(jié)論

該研究表明在降溫桶裝運(yùn)輸、抄網(wǎng)撈取投放、模擬敵害生物捕食條件下，紫紅笛鯛、紅笛鯛、黑鯛和斑節(jié)對蝦的初期存活率分別為85.4%、83.1%、75.5%和91.1%。在蝦苗袋充氧密封運(yùn)輸、模擬敵害生物捕食條件下，斑節(jié)對蝦的放流初期存活率為91.9%;紫紅笛鯛種苗降溫桶運(yùn)輸放流3 h后，紫紅笛鯛種苗體內(nèi)的生理生化指標(biāo)均出現(xiàn)較大的變化，與對照組相比，肝組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的2.6和2.9倍，鰓組織的SOD活性和MDA含量分別為對照組的1.77和2.36倍，說明降溫桶運(yùn)輸放流3 h前后對紫紅笛鯛種苗產(chǎn)生的脅迫作用最強(qiáng)。另根據(jù)一些學(xué)者的研究[11-12，24-25]，建議放流前清除放流水域敵害生物，增殖放流運(yùn)輸時盡量使運(yùn)輸水溫與自然海域水溫一致、添加氨酪酸、盡量降低運(yùn)輸密度，放流時使用有效器具輕取輕放降低放流機(jī)械損傷，以提高增殖放流初期存活率、保障增殖放流效果。

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