一例雜交鲇腐皮病的細(xì)菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)

雜交鲇養(yǎng)殖始于20世紀(jì)80年代，多為種間雜交，目前主養(yǎng)種類有大口鲇與鲇正反交、懷頭鲇♀×鲇♂、胡子鲇♀×革胡子鲇♂。因其生長速度快、適應(yīng)能力強(qiáng)、肉質(zhì)優(yōu)良等特點(diǎn)，受到廣大民眾的喜愛，在全國各地均有養(yǎng)殖。2019年11月，市場購回的雜交鲇養(yǎng)殖期間發(fā)生了腐皮病，死亡率高達(dá)100%。本文就該病例進(jìn)行了病原的分離鑒定和菌株的藥敏試驗(yàn)。

一、臨床檢查

1.體表觀察 病魚體表有褪色斑，并有大小不等、形狀各異、邊緣粗糙的潰瘍灶。潰瘍灶邊緣組織紅潤，伴有充出血癥狀，腹部膨大，蛀鰭且鰭條基部有出血點(diǎn)，肛門紅腫。

2.鏡檢 剪取鰓絲，刮取黏液制備水壓片進(jìn)行顯微鏡檢查，未發(fā)現(xiàn)寄生蟲。

3.剖檢 打開腹腔，腹腔內(nèi)有大量淡黃色腹水，肝臟、脾臟、腎臟邊緣鈍圓腫大，并伴有出血，腸道充出血，少數(shù)病魚胃腸道異常膨大，內(nèi)有大量液體和氣體。

二、實(shí)驗(yàn)室檢查

1.菌株培養(yǎng) 無菌條件下，使用接種環(huán)從病魚肝臟、脾臟、腎臟等組織中接菌于TSA培養(yǎng)基，置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。24小時后取出TSA培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，均可見兩種不同的菌落。一種菌落呈圓形蠟狀隆起，邊緣完整，直徑1毫米左右，表面光滑，乳白色且不透明，有光澤，數(shù)量較多；另一種菌落呈圓形微隆起，邊緣整齊，直徑為0.2～0.5毫米，表面光滑濕潤，乳白色且半透明狀，數(shù)量較少。分別挑選兩種細(xì)菌單菌落接種于TSB培養(yǎng)基中，置于30℃振蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時用于菌株鑒定和藥敏試驗(yàn)。使用試劑盒分別提取兩種細(xì)菌基因組DNA，采用細(xì)菌16S rRNA通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得與陽性對照預(yù)期片段大小一致的單一條帶，并送樣生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測序。獲得序列與NCBI數(shù)據(jù)庫blast比對，兩種細(xì)菌分別與維氏氣單胞菌和擬態(tài)弧菌高度相似。

2.敏感藥物篩選 通過實(shí)驗(yàn)室藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示混合細(xì)菌對復(fù)方新諾明、新霉素、恩諾沙星、卡那霉素和丁胺卡那霉素敏感；對奧格門汀和氨芐西林耐受。

三、病因分析

本次患病雜交鲇臨床癥狀主要為體表多處潰瘍灶并伴有出血，腹部腫大，柱鰭且鰭條基部有出血點(diǎn)，肛門紅腫，腹腔內(nèi)有大量淡黃色腹水，肝臟、腎臟鈍圓腫大并伴有出血。關(guān)于維氏氣單胞菌感染水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的報道，秦國民等(2008)從養(yǎng)殖的患病錦鯉中分離出維氏氣單胞菌，其臨床癥狀主要有鱗片大面積脫落，體表多部位出血，肛門出血，血樣腹水，腸道脹氣，肝臟腫大，質(zhì)脆并有出血。黃小麗等(2009)在斑點(diǎn)叉尾感染維氏氣單胞菌的報道中，病魚主要表現(xiàn)為皮膚潰爛，腹部極度膨大，肛門紅腫，胸鰭、腹鰭和臀鰭及其基部充血、出血，腹腔有大量淡黃色或帶血的腹水，肝、腎腫大伴有出血點(diǎn)，胃腸道嚴(yán)重出血。董靖等(2017)報道，雜交鲇感染維氏氣單胞菌后皮膚多處大面積潰瘍，臟器出血。本次患病雜交鲇癥狀與上述報道癥狀相似，提示雜交鲇的死亡，維氏氣單胞菌存在不可忽視的作用。

從患病雜交鲇肝臟、脾臟、腎臟等組織分離出擬態(tài)弧菌。目前不乏關(guān)于擬態(tài)弧菌感染鲇魚的報道。Y.Gen等(2014)從鲇魚、南方鲇以及中國的正川鲇發(fā)生的一種死亡率極高(80%～100%)的流行病診斷中分離出擬態(tài)弧菌，其病理特征主要有全身皮膚褪色，體表出現(xiàn)大面積潰瘍并伴有出血，肝臟出血、腫脹、壞死。同樣，韓帥等(2015)報道擬態(tài)弧菌感染的南方鲇臨床特征為體表出現(xiàn)褪色斑，背部、腹部肌肉出現(xiàn)明顯的長方形潰瘍灶，臀鰭與尾鰭基部出血，肝腫大斑點(diǎn)狀出血，脾、腎腫大，呈暗紅色，部分病魚腹腔內(nèi)可見少量淡黃色腹水。在陳成等(2017)研究中，黃顙魚感染擬態(tài)弧菌后也出現(xiàn)相似癥狀，主要表現(xiàn)為皮膚褪色，體表潰爛呈方形或橢圓形潰瘍灶，伴有出血，肝、脾、腎腫大出血，腹腔有一定量的淡紅色腹水。本次患病雜交鲇體表有明顯的褪色斑，少數(shù)個體潰瘍灶為矩形，提示擬態(tài)弧菌在本次雜交鲇的疾病發(fā)生過程中可能發(fā)揮一定作用。

綜上分析可見，維氏氣單胞菌和擬態(tài)弧菌是鲇魚養(yǎng)殖中重要的致病菌，而本病例中存在維氏氣單胞菌和擬態(tài)弧菌混合感染的情況，其臨床癥狀以急性敗血癥為主。單一感染和混合感染在癥狀上難以區(qū)分，這給臨床疾病診治帶來難度。根據(jù)體外藥物混合藥敏篩選結(jié)果，可考慮選擇敏感藥物鹽酸恩諾沙星拌料連續(xù)投喂5～7天，鑒于病魚全身多器官廣泛性出血，可考慮拌料投喂維生素K，同時外用聚維酮碘溶液或溴氯海因粉等消毒劑對水體進(jìn)行消毒，加強(qiáng)池塘日常管理工作。