IL-17基因多態(tài)性水平與慢性HBV感染患者轉(zhuǎn)歸的關(guān)系

張曉芳 劉先進(jìn)

慢性乙型肝炎為臨床常見肝病類型，隨著疾病進(jìn)展，慢性HBV感染可進(jìn)展至肝硬化、肝衰竭階段，并顯著增加癌變風(fēng)險(xiǎn)[1-2]。目前有關(guān)HBV感染發(fā)病機(jī)制多涉及宿主免疫因素，白介素-17(IL-17)具有一定免疫致病性，有學(xué)者還提出IL-17與機(jī)體免疫密切相關(guān)，但目前有關(guān)IL-17的報(bào)道不盡一致[3-4]，這可能與其基因多態(tài)性分布有關(guān)。本研究納入54例慢性乙型肝炎和54例無(wú)癥狀慢性HBV感染者作為研究對(duì)象，探討IL-17基因多態(tài)性對(duì)患者預(yù)后的影響。

資料與方法

一、臨床資料

選取南通市第三人民醫(yī)院2017年6月至2018年6月收治的54例慢性乙型肝炎患者作為觀察組，另納入同期54例無(wú)癥狀慢性HBV感染者作為對(duì)照組。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。無(wú)癥狀慢性HBV感染和慢性乙型肝炎診斷均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》標(biāo)準(zhǔn)[5]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝衰竭、肝癌患者；②合并其他肝炎病毒感染者；③合并有酒精性肝病者。兩組患者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

二、檢測(cè)方法

以ELISA法檢測(cè)血清IL-17水平，操作方法參照試劑盒(上海瑞番生物科技有限公司生產(chǎn))。HBV DNA含量采用PCR法結(jié)合熒光探針法進(jìn)行定量檢測(cè)，試劑盒購(gòu)自北京華大吉比愛生物技術(shù)有限公司，操作按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，HBV DNA含量>1.0×103拷貝/mL為HBV DNA含量異常[6]。

IL-17相關(guān)基因檢測(cè)：提取總DNA，然后以PCR擴(kuò)增儀檢測(cè)IL-17 rs763780位點(diǎn)基因及基因型頻率分布，設(shè)計(jì)引物見表2。試劑盒購(gòu)自上海之江生物科技股份有限公司。PCR法反應(yīng)總體系25 μL，包括Taq Man探針1.25 μL、DNA原液和雙蒸水11.25 μL及power Taq master min 12.5 μL。在95 ℃下對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)變性和變性處理5 min和30 s，再以60 ℃退火30 s，45個(gè)循環(huán)。記錄rs763780位點(diǎn)CC、CT及TT基因型分布。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

結(jié) 果

一、血清IL-17、HBV-DNA結(jié)果

兩組血清IL-17水平和HBV DNA含量>1×103者比例差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

二、 IL-17相關(guān)基因結(jié)果

兩組IL-17 rs763780位點(diǎn)等位基因分布頻率和基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表1 兩組基本資料比較

表2 引物序列設(shè)計(jì)

表3 兩組IL-17及HBV DNA水平比較

表4 兩組IL-17基因與等位基因比較

三、不同IL-17 rs763780位點(diǎn)基因型患者預(yù)后比較

108例患者中IL-17 rs763780位點(diǎn)TT基因型57例，出院后1年進(jìn)展至肝硬化者17例，肝硬化發(fā)生率為29.82%，CC基因型11例，1年內(nèi)無(wú)進(jìn)展至肝硬化病例，CT基因型40例，1年進(jìn)展至肝硬化者5例，肝硬化發(fā)生率12.50%，在IL-17 rs763780位點(diǎn)中，TT與CC、CT基因型患者肝硬化發(fā)生率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.374，4.023；P=0.036，0.045)。

討 論

IL-17具有強(qiáng)大的激活和促炎作用，不僅可通過(guò)加快黏附因子的釋放，激活炎癥細(xì)胞，還可與IL-6、TNF-α發(fā)揮協(xié)同作用，擴(kuò)大炎癥，加快HBV感染病理進(jìn)程[7-8]。本研究結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎患者血清IL-17顯著高于無(wú)癥狀慢性HBV感染者，提示血清IL-17有助于評(píng)估HBV感染患者病理狀態(tài)。HBV感染進(jìn)展至肝硬化與HBV病毒侵襲能力和肝功能有關(guān)[9-10]。本研究發(fā)現(xiàn)在慢性乙型肝炎患者中，HBV DNA含量異常升高者顯著多于無(wú)癥狀慢性HBV感染者者，推測(cè)慢性乙型肝炎較無(wú)癥狀慢性HBV感染者感染者進(jìn)展至肝硬化風(fēng)險(xiǎn)更高。

有研究顯示，慢性HBV感染患者與健康人群IL-17 mRNA水平差異顯著，而血清IL-17水平與慢性乙型肝炎肝功能損傷嚴(yán)重程度密切相關(guān)[11]。姚思敏等[12]還認(rèn)為，IL-17基因突變可能增加患者的易感性，促進(jìn)肝炎進(jìn)展，造成不同的病理預(yù)后。IL-17 rs763780位點(diǎn)位于IL-17編碼基因第3個(gè)外顯子區(qū)，已有報(bào)道顯示其與胃癌、多發(fā)性硬化癥相關(guān)[13-14]。本研究中TT基因型占慢性乙型肝炎患者IL-17 rs763780位點(diǎn)基因型的64.81%，且與無(wú)癥狀慢性HBV感染者表達(dá)水平差異顯著，說(shuō)明TT基因型、T等位基因是HBV感染病理進(jìn)展的重要因素，HBV感染患者不良預(yù)后多發(fā)生于TT基因和T等位基因患者，本研究結(jié)果也顯示，IL-17 rs763780位點(diǎn)TT基因型患者肝硬化發(fā)生率更高。但患者預(yù)后與肝功能狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)水平及遺傳等多種因素相關(guān)[15]，使報(bào)道結(jié)果存在差異，還有待今后擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行區(qū)域間比較研究。

綜上，IL-17是影響HBV感染的重要細(xì)胞因子，IL-17 rs763780 位點(diǎn)T等位基因、TT基因型是慢性HBV感染的易感宿主基因。