青蛤活性物質(zhì)的研究現(xiàn)狀

牛紅鑫，李 偉， 佟長青

（大連海洋大學 食品科學與工程學院，遼寧大連 116023）

0 引言

青蛤（Cyclina sinensis） 是我國沿海地區(qū)常見的養(yǎng)殖貝類[1]。青蛤的營養(yǎng)價值較高，含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、糖分、無機元素等[2]。 《本草綱目》 中記載的蛤類相關(guān)的藥品有海蛤、文蛤、蛤蜊，其中海蛤是指所有的蛤類，主治咳逆上氣、喘息煩滿、胸痛寒熱、利膀胱大小腸、下小便、化痰飲等[3]。從青蛤中提取的活性物質(zhì)具有促進免疫應答、抗氧化、抗腫瘤、抗菌、刺激酵母細胞增殖等作用。就青蛤活性物質(zhì)的國內(nèi)外研究進展進行了系統(tǒng)綜述，對青蛤后續(xù)研究進行了展望，以期為青蛤的進一步開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 青蛤多糖

青蛤中含有大量多糖類活性物質(zhì)。多糖的提取方式有多種，不同提取方式提取的青蛤多糖結(jié)構(gòu)不同，因而其生物活性也不同。利用水提法、酸堿法和酶解法提取的青蛤多糖均有報道。水提法可以與超聲波、微波等方法結(jié)合。水提法操作簡單方便，被廣泛應用于多糖提取。水提法是以蒸餾水為提取液，在一定的提取溫度、提取時間、料液比和提取次數(shù)下進行提取[4]。蔣長興[5]利用水提法提取了青蛤多糖， 并利用DEAE- 纖維素柱層析、 Sephadex G-100 凝膠柱層析進行分離純化，獲得了由木糖、葡萄糖組成的青蛤多糖CSPS-1，由葡萄糖組成的CSPS-2 和鼠李糖、巖藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖組成的CSPS-3。郭雷等人[6]采用單因素試驗和正交試驗設(shè)計優(yōu)化提取工藝提取了青蛤多糖，經(jīng)脫蛋白后具有較好的清除自由基活性。胡聰聰?shù)热薣7]通過改變加水量及加酸量研究了對青蛤多糖提取率的影響，并對獲得的青蛤多糖進行了對前列腺癌細胞抑制作用的研究，發(fā)現(xiàn)青蛤多糖顯著抑制前列腺癌細胞，半數(shù)抑制率為4.58 mg/mL。Jiang C 等人[8]研究了青蛤多糖CSPS-3 的抗氧化活性和抑制人胃癌BGC-823 細胞的作用，發(fā)現(xiàn)青蛤多糖CSPS-3 具有較強的抗氧化活性和較強的抑制人胃癌BGC-823 細胞的作用。蛤類多糖提取工藝成熟，其生物活性清楚，適合于大規(guī)模生產(chǎn)制備，是保健食品及藥品的潛在來源。

2 青蛤多肽化合物

2.1 青蛤活性肽

閆海強等人[9]利用胰蛋白酶對青蛤肉進行酶解，通過超濾及G25 分離純化，獲得具有顯著抑制PC-3前列腺癌細胞活性的組分。趙莎莎等人[10]利用堿性蛋白酶進行青蛤內(nèi)臟酶解獲得了青蛤多肽，該肽的分子量分布在15～25 kDa，具有較好的清除DPPH 自由基、超氧自由基的能力，對羥自由基誘導損傷的pBR322DNA 具有保護作用。史文軍等人[11]利用木瓜蛋白酶酶解青蛤邊下腳料，以水解率和DPPH 自由基清除率為指標，通過單因素試驗和正交試驗獲得了酶解青蛤邊下腳料的最佳工藝，獲得的青蛤肽溶液1.5 mL 的DPPH 自由基清除率達74.62%。羅李王等人[12]利用胰蛋白酶酶解青蛤肉，通過正交試驗優(yōu)化酶解工藝，篩選出具有ACE 抑制作用的青蛤肽，抑制率為36.8%。葉盛旺等人[13]利用胃蛋白酶酶解青蛤肉，以小鼠巨噬細胞RAW264.7 相對增殖率為指標獲得了最佳酶解工藝，小鼠巨噬細胞RAW264.7 相對增殖率達76.15%。張亞茹等人[14]進一步通過超濾、凝膠層析和HPLC 等研究了青蛤多肽的制備工藝，通過MTT 法篩選出對前列腺癌DU-145 細胞的抑制活性的青蛤多肽（Ile-Leu-Tyr-Met-Pro），青蛤多肽能誘導DU-145 細胞凋亡。劉欣欣等人[15]利用構(gòu)建的SMART-cDNA 文庫及高通量測序的方法，獲得了Macin 家族的青蛤抗菌肽基因全長序列，并利用熒光定量PCR 分析了其在青蛤各組織中的表達情況，發(fā)現(xiàn)在青蛤外套膜中抗菌肽表達水平最高。趙震等人[16]在重組畢赤酵母中表達了青蛤Mytimacin 抗菌肽，該重組蛋白對金黃色葡萄球菌（Staphylocaccus aureus）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、大腸桿菌（Escherichia coli） 和副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus） 有明顯的抑制作用。由此可見，青蛤中肽類活性物質(zhì)的來源及其豐富。

2.2 青蛤蛋白質(zhì)

青蛤蛋白質(zhì)是分子量較大的肽類物質(zhì)。呂達等人[17]研究了青蛤金屬硫蛋白及硫氧還蛋白的基因表達與克隆，發(fā)現(xiàn)Cd2+能夠誘導青蛤金屬硫蛋白及硫氧還蛋白基因的表達的時序性升高。李子牛等人[18]分析了鹽度對青蛤超氧化物歧化酶（SOD） 和過氧化氫酶（CAT） 的影響，發(fā)現(xiàn)在鹽度脅迫下這2 種酶的含量波動性較大。對于青蛤這類活性物質(zhì)的研究，有助于了解青蛤的生理狀態(tài)及免疫防御狀態(tài)，為青蛤養(yǎng)殖提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

2.3 青蛤凝集素

凝集素是一類具有多價糖結(jié)合特性的糖蛋白，具有多種多樣的生理活性。從青蛤血淋巴中分離出了一種分子量為72 kDa 的N- 乙酰- 半乳糖胺/ 甘露糖特異性凝集素（CSL）[19]。CSL 具有凝集酵母，刺激酵母生長及產(chǎn)生乙醇增加的作用[19]。Liu S 等人[20]進一步利用非標記定量蛋白質(zhì)組技術(shù)研究了CSL對酵母生長的影響，發(fā)現(xiàn)在CSL 作用下酵母的己糖激酶、甘油醛-3- 磷酸脫氫酶、烯醇酶表達上調(diào)，二氫硫辛酰胺脫氫酶及乙醛脫氫酶下調(diào)，這表明CSL 通過改變酵母的代謝途徑使其生長并產(chǎn)生乙醇增加。為了深入研究CSL 與酵母的相互作用，劉帥等人[21]研究了CSL 與酵母細胞壁肽聚糖的相互作用，發(fā)現(xiàn)CSL 與酵母細胞壁肽聚糖的相互作用具有濃度依賴性，而且兩者的結(jié)合可以被N- 乙酰- 半乳糖胺和甘露糖抑制，同時CSL 導致了酵母的細胞壁發(fā)生變化。佟長青等人[22]通過濾紙片法研究了CSL 的抑菌活性，利用呼吸抑制作用深入研究表明，CSL通過抑制EMP 途徑來抑制大腸桿菌和產(chǎn)氣莢膜菌，通過抑制HMP 途徑來抑制枯草芽孢桿菌，并且CSL能夠抑制大腸桿菌、產(chǎn)氣莢膜菌和枯草芽孢桿菌的DNA、RNA 及蛋白的合成。

3 結(jié)語

青蛤作為養(yǎng)殖貝類，具有資源豐富的優(yōu)勢。青蛤中含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、糖分、無機元素等，具有較廣闊的開發(fā)前景。目前，對青蛤中含有多糖、抗菌肽、凝集素等活性物質(zhì)研究較多，對其中所含有的小分子活性物質(zhì)，如核苷酸、?；撬?、脂肪酸、甾體類活性物質(zhì)研究也較少。因此，對于青蛤研究的廣度和深度都有待于擴展，對青蛤活性物質(zhì)的深入研究，將有利于促進青蛤的下游產(chǎn)業(yè)鏈的延伸，使其在更廣闊的領(lǐng)域得到應用。