日喀則脫毒馬鈴薯試管苗的擴(kuò)繁技術(shù)

次旦卓瑪

（日喀則市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，西藏 日喀則 857000）

馬鈴薯是一種外來茄科植物，在西藏有著龐大的種植區(qū)，種植歷史悠久。馬鈴薯富含淀粉，是一種既可以作為主食，又可以作為蔬菜的農(nóng)作物，有一定的抗衰老作用。

這些年，馬鈴薯的種植面積越來越大，但由于西藏地域范圍廣，馬鈴薯種植一般是農(nóng)戶自種自用，每一年全區(qū)的播種面積都不同，且生產(chǎn)分散無法形成規(guī)模化，效益較低。

為了進(jìn)一步擴(kuò)大馬鈴薯種植規(guī)模，藏區(qū)開始大量開展馬鈴薯的種植工作。在擴(kuò)張繁殖中，試管苗常遇到環(huán)境污染、馬鈴薯病害等問題。細(xì)菌及真菌引發(fā)的病害可以采用化學(xué)方法防治，但病毒類的病害卻無法使用化學(xué)藥劑防治。植株在感染病毒之后，病毒會在馬鈴薯的體內(nèi)快速增殖、積累，造成品種退化，導(dǎo)致馬鈴薯品質(zhì)與產(chǎn)量頻頻下降，嚴(yán)重的還可能出現(xiàn)絕收的情況。因此藏區(qū)開始嘗試進(jìn)行脫毒馬鈴薯的種植試驗，采用生物技術(shù)，根據(jù)馬鈴薯莖尖病毒攜帶少的原理，剝離0.1 ～0.3 mm 的莖尖生長點(diǎn)，在無菌的條件下培育脫毒組培苗，生產(chǎn)不攜帶病毒的種薯，有效抑制病毒引發(fā)的病害，實(shí)現(xiàn)馬鈴薯的增產(chǎn)增效。

1 脫毒馬鈴薯試管苗取樣

1.1 選擇剝離材料及催芽工作

脫毒馬鈴薯需要準(zhǔn)備好莖尖，其剝離工作是基礎(chǔ)。在選擇剝離材料時，選擇在馬鈴薯生長最好的季節(jié)里開展，為優(yōu)質(zhì)良種繁育打下基礎(chǔ)，擴(kuò)繁脫毒組培種苗才能生產(chǎn)出最優(yōu)秀的原種。這是馬鈴薯實(shí)現(xiàn)增收增效的基礎(chǔ)。選擇具備原品種典型特征的單株系薯塊，在培養(yǎng)箱進(jìn)行催芽處理。

1.1.1 消毒方法及剝離操作。用剪刀切1 ～2 cm 的壯芽，放入燒杯中，編號；用紗布包住在自來水流水下沖洗5 ～10 min；在超凈工作臺內(nèi)用75%的酒精浸泡10 s；用0.1%的升汞浸泡10 min（稱取升汞0.1 g，用酒精溶解，再加無菌水100 ml 或2% ～10% 的次氯酸鈉浸泡5 ～30 min），之后用滅菌后的無菌水反復(fù)沖洗3 ～5 次。對超凈工作臺內(nèi)進(jìn)行滅菌操作，提前外光燈照射20 min；接種工具鑷子、接種針（3 支）用75% 酒精浸洗，用酒精燈燒灼后放置冷卻待用。用鑷子取芽放在解剖鏡下，用第一支解剖針把外層大葉去除；然后換針去除幼葉，使生長點(diǎn)露出；用第三支針取下含有1 ～2 個葉原基的0.1 ～0.2 mm長的生長點(diǎn)進(jìn)行接種。在此過程中，注意不要損傷芽頂端圓錐體，分離芽時務(wù)必按次序使用消毒后的工具。

1.1.2 莖尖培養(yǎng)和病毒檢測。芽尖催芽以后芽為佳，消毒后置入無菌水沖洗5 ～6 次；之后將芽尖放在操作臺中進(jìn)行滅菌操作，用濾紙將其水分完全吸干；在解剖鏡觀察下，使用解剖針切取葉原基莖尖生長點(diǎn)，迅速接種到預(yù)先做好的培養(yǎng)基上；培養(yǎng)一段時間后統(tǒng)計成活率及污染率。

上述處理可以失活減化病毒，提升無病毒植株培育成功率。接種在培養(yǎng)基的莖尖放在培養(yǎng)室中培養(yǎng)（溫度25℃，濕度70% ～85%，日照16 h）一個月左右。此時肉眼可見明顯成長的小莖，葉原基形成小葉片，即可轉(zhuǎn)入未注入生長調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。在沒有污染的情況下，苗將繼續(xù)生長并形成根系，4 ～5 個葉片小植株于5 個月左右即可長出。此時，以單株為系做好擴(kuò)繁工作，當(dāng)達(dá)到200 株左右苗數(shù)時，隨機(jī)選擇4 ～5 個樣本，以10 株為一個樣本開始病毒檢測工作，從中篩選出脫毒試管苗用于繼續(xù)繁殖基礎(chǔ)苗。

1.2 自然光照培養(yǎng)

1.2.1 環(huán)境條件。組織培養(yǎng)的材料一般都放在培養(yǎng)架上并用日光燈照明，溫度、濕度控制十分重要。一般來說，溫度應(yīng)保持在25℃左右，上下不超過2℃，濕度應(yīng)保持在70% ～85%。培養(yǎng)室空間大，空氣流通比較好，光照強(qiáng)度理想，為脫毒馬鈴薯試管苗的健康成長提供了條件，在此基礎(chǔ)上輔以適當(dāng)放風(fēng)、控水、降濕即可。通過上述措施，可以使苗快速適應(yīng)外部的環(huán)境，減少緩苗的時間，并增加植株對大風(fēng)及低溫的抵抗力。一般情況下，直接移栽基質(zhì)溫室成活率可達(dá)到99.8%。

1.2.2 溫度控制。培養(yǎng)室降溫主要通過遮陽幕、風(fēng)機(jī)、暖機(jī)、水窗簾單獨(dú)使用或同時使用以達(dá)到目的。在春季通過遮陽幕、風(fēng)機(jī)降溫；在秋末夏初溫度較高時, 開啟風(fēng)機(jī), 使培養(yǎng)室內(nèi)的空氣形成對流降低溫度；在夏季溫度最高時, 同時使用三種手段，其中水簾降溫作用最大, 水在水簾內(nèi)通過循環(huán)風(fēng)機(jī)的作用將濕氣形成對流。冬季加溫主要利用暖氣,晴天和白天一般不需要加溫, 夜晚和陰天要通過控制暖氣開放次數(shù)和開放時間保持培養(yǎng)室內(nèi)溫度。

2 脫毒馬鈴薯組培苗的擴(kuò)繁原理及操作方法

2.1 脫毒種苗的制取

脫毒種苗的制取是整個脫毒馬鈴薯優(yōu)質(zhì)良種繁育體系的第一步, 是技術(shù)的核心。通過脫毒組培種苗的擴(kuò)繁, 生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)組培苗，這是原原種生產(chǎn)的關(guān)鍵。通過組織培養(yǎng)的手段,縮短育種周期, 加快繁殖速度, 短期內(nèi)可以大量地繁殖出優(yōu)良種苗, 提供給溫室擴(kuò)繁,生產(chǎn)優(yōu)良種薯。

2.2 馬鈴薯脫毒組培苗的擴(kuò)繁操作方法

選用無污染的試管苗, 在無菌條件下切成帶1 ～2 個葉片的莖段, 轉(zhuǎn)接于擴(kuò)繁培養(yǎng)基上，每瓶接10 ～15 段，培養(yǎng)15 ～20 d，待新的小苗長至6 ～8 cm 時再進(jìn)行下一輪擴(kuò)繁。

綜上所述，在應(yīng)用試管苗擴(kuò)繁技術(shù)過程中，應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確地按照科學(xué)、規(guī)范的步驟操作進(jìn)行，促進(jìn)脫毒馬鈴薯試管苗的順利擴(kuò)繁，進(jìn)而促進(jìn)馬鈴薯生產(chǎn)的穩(wěn)定發(fā)展，提高產(chǎn)業(yè)效益。