養(yǎng)殖對蝦的主要病毒性疾病及其免疫防控措施（12）

○張喜貴 孟長明 陳昌福

（1.453700，河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司；2.430070，華中農(nóng)業(yè)大學，武漢）

④ 血藍蛋白與酚氧化酶血藍蛋白是存在于節(jié)肢動物和軟體動物血淋巴中的含銅呼吸蛋白。血藍蛋白不僅具有運輸氧氣、調(diào)節(jié)滲透壓、貯存能量、調(diào)節(jié)蛻皮過程和合成黑色素等功能外，近年來研究表明，血藍蛋白及其降解片段還具有酚氧化酶活性、凝集素活性以及抗菌抗病毒等多種免疫學功能。雖然血藍蛋白的氨基酸序列與酚氧化酶的氨基酸序列顯示出高度同源性，但二者的合成部位不同。酚氧化酶在血細胞中表達，以酶原的形式合成，其氨基端被裂解后才發(fā)揮生物學活性，參與角質(zhì)硬化和免疫防御反應；血藍蛋白則是在肝胰腺中合成并釋放至血漿中的。

（六）其它免疫因子

除上述幾種重要的體液免疫因子外，甲殼動物體內(nèi)還含有一些與免疫應答有關的免疫因子，如類免疫球蛋白和補體分子、蛋白酶抑制劑、溶酶體酶等。

1.類免疫球蛋白和補體分子

一般認為無脊椎動物體內(nèi)無免疫球蛋白和補體存在，但近年來一些研究表明甲殼動物血淋巴中可能存在類免疫球蛋白和補體分子。王雷采用單向免疫擴散法測定出中國對蝦血淋巴中存在類似IgM的因子；王偉慶采用免疫比濁測定出中國對蝦血淋巴中存在類IgG、類IgA、類IgM等免疫球蛋白樣物質(zhì)以及類C3、類C4等補體蛋白樣物質(zhì)。免疫系統(tǒng)的進化是與動物的進化緊密相連的，隨著動物從無脊椎動物到脊椎動物的進化，免疫系統(tǒng)的進化也發(fā)生了重大飛躍。突出表現(xiàn)在：無脊椎動物只有簡單的細胞吞噬等防御手段；低等脊椎動物開始有彌散的淋巴系統(tǒng)，出現(xiàn)IgM樣大分子抗體；哺乳類動物體內(nèi)抗體進化順序為 IgM→IgG→IgA→IgD→IgE。由于進化的連續(xù)性，作為最早出現(xiàn)的免疫球蛋白IgM，在無脊椎動物中極可能含有其結(jié)構(gòu)類似物。然而這些物質(zhì)究竟是否存在于甲殼動物血清中，還有不同的觀點，因此，這些能與哺乳動物抗血清發(fā)生反應的甲殼動物血清成分的本質(zhì)有待于進一步研究。采用現(xiàn)代分子生物學技術克隆表達其基因，研究其功能則是一重要研究手段。

2.蛋白酶抑制劑

蛋白酶抑制劑是另一種由血細胞產(chǎn)生的重要免疫因子，參與蛋白酶級聯(lián)反應，防止蛋白酶的過量激活，從而避免宿主組織的自身損傷。目前己在甲殼動物血淋巴及血細胞顆粒中發(fā)現(xiàn)了多種蛋白酶抑制劑，其中比較重要的有以下3種：枯草菌素蛋白酶抑制劑、α2-巨球蛋白、絲氨酸蛋白酶抑制劑。

3.溶酶體酶

溶酶體酶的水解作用是甲殼動物免疫系統(tǒng)抵抗病原微生物的一種重要機制。溶酶體酶一般包括溶菌酶、過氧化物酶及各種水解酶類（蛋白酶、肌酶、磷酸酶、脂酶和糖酵解酶等）。吞噬細胞對病原微生物進行吞噬或包囊后，細胞內(nèi)的溶酶體與病原微生物進行融合形成吞噬溶酶體，繼而溶酶體發(fā)生脫顆粒現(xiàn)象，外來入侵的病原微生物可以被其中的溶菌酶、過氧化物酶、磷酸酶等直接殺死，隨后各種水解性酶類再進一步將它們水解消化而排出體外。

4.活性氧中間體（Reactive oxygen intermediats，ROIs）

血細胞吞噬病原微生物后形成吞噬體，并向吞噬體內(nèi)釋放各種消化酶，產(chǎn)生一系列ROIs。活性氧的產(chǎn)生最初是在哺乳動物的嗜中性白細胞和巨噬細胞中發(fā)現(xiàn)，被稱為呼吸爆發(fā)，即超氧陰離子的釋放。它是可溶性刺激物或外來顆粒激活吞噬細胞膜上NAD（P）H氧化酶的結(jié)果，其表現(xiàn)為細胞內(nèi)糖原分解增強、氧耗增加，并產(chǎn)生超氧陰離子（O2-）、過氧化氫（H2O2）,羥自由基〔OH-〕和單線態(tài)氧（1O2）等一系列 ROIs。這些活性氧有極強的殺菌功能，可直接或同溶酶體共同抵抗外源性病原微生物的侵入，也可通過髓過氧化酶一鹵化物一H2O2系統(tǒng)產(chǎn)生次鹵化物或高鹵化物等，形成潛在的殺菌體系。不同甲殼動物個體，其血細胞產(chǎn)生ROls的水平存在明顯差異，此與甲殼動物的生理狀況、免疫水平及血細胞的類別有關，活性氧產(chǎn)生的量可直接反映血細胞的殺菌能力。

5.可凝固蛋白（clottable protein，CP）

可凝固蛋白是甲殼動物血淋巴內(nèi)不同于凝集素的又一類免疫因子，具有凝血作用，從而阻止血細胞通過傷口損失。1999年Hall首先從螯蝦體內(nèi)分離鑒定出第一種甲殼動物的可凝固蛋白，隨后在龍蝦、淡水大對蝦、沙螯蝦、蟹類和軟尾太平蝲蛄體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)CP。甲殼動物CP為一二聚體極高密度脂蛋白，分子量為380～400 KDa，由2個相同的亞基通過二硫鍵組成，每個亞基各含一個游離的賴氨酸和谷氨酸。在轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶的作用下，兩者之間共價結(jié)合在一起。序列分析表明不同甲殼動物的CP具有相似的氨基酸組成和N端序列。雖然甲殼動物CP與鱟的血凝素以及脊椎動物的纖連蛋白具有相似的血凝作用，但在序列上并無任何同源性。甲殼動物CP的凝血過程是甲殼動物受傷后，血細胞（尤其是透明細胞和小顆粒細胞）釋放谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶，在谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶和血漿鈣離子作用下不同CP分子之間的游離賴氨酸和谷氨酸進行共價結(jié)合，形成CP二聚體，從而使血淋巴發(fā)生凝固，防止機體血淋巴的流失。

（全文完）