放射性核素標記耐久霉素細胞凋亡顯像的研究進展

黃旭虎，李洪玉

(原子高科股份有限公司，北京 102413)

細胞死亡是人體重要的生理或病理現(xiàn)象,根據(jù)死亡細胞生化和分子水平的差異，主要分為程序性細胞死亡(如凋亡)和非程序性細胞死亡(如壞死)。細胞凋亡廣泛存在于人體的各個系統(tǒng)，其失調(diào)與很多疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。當細胞凋亡不足時，就會導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生,而細胞凋亡過度時，則會產(chǎn)生獲得性免疫缺陷綜合征、神經(jīng)退行性疾病及移植排斥反應(yīng)等。因此檢測凋亡對認識疾病、評價和指導(dǎo)疾病的治療以及開發(fā)相關(guān)藥物等具有重要意義。

傳統(tǒng)的凋亡檢測方法均為體外檢測，主要包括光學(xué)顯微鏡觀察、原位末端標記法分析、流式細胞儀檢測等，但這些方法都需要活體取材，屬于有創(chuàng)性的檢測方式，并且通常只能在某一時間點觀察凋亡，無法動態(tài)連續(xù)監(jiān)測凋亡在體內(nèi)的發(fā)生與發(fā)展過程。隨著分子影像學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，各種凋亡分子影像學(xué)技術(shù)的研究日漸成熟，為活體內(nèi)動態(tài)監(jiān)測細胞凋亡提供了全新的無創(chuàng)研究手段。放射性細胞凋亡顯像[1-4]是研究較為深入的體內(nèi)細胞凋亡檢測技術(shù)，通過放射性核素標記化合物與細胞凋亡過程中產(chǎn)生的特有靶點結(jié)合，采用影像學(xué)手段檢測細胞凋亡部分濃聚的探針分子，從而顯示凋亡。

細胞凋亡顯像在腫瘤研究中具有重要意義，放射性核素標記耐久霉素在腫瘤影像學(xué)和療效評價方面都表現(xiàn)出潛在的臨床應(yīng)用價值，本文綜述了近年來放射性核素標記耐久霉素在制備和純化方法、生物分布、療效評價等方面的研究進展，并對放射性核素標記耐久霉素的臨床應(yīng)用前景進行了展望。

1 細胞凋亡與磷脂外翻

細胞凋亡程序通過內(nèi)源或外源性途徑啟動之后，凋亡細胞自身會產(chǎn)生一系列的病理生理改變[5]，如磷脂外翻、Caspase級聯(lián)反應(yīng)激活、細胞膜印跡的改變、線粒體膜電位消失等，這些變化都可被作為可識別的、特異性的生物靶標，通過放射性核素標記化合物與凋亡細胞中特異靶標結(jié)合的特性，即可進行細胞凋亡的活體無創(chuàng)顯像。

細胞膜的內(nèi)膜外翻是細胞凋亡在分子水平的重要特征之一。在活細胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，PS)和磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，PE)位于哺乳動物細胞膜內(nèi)側(cè)小葉，并占了細胞膜內(nèi)膜上磷脂類很大一部分比例，而外側(cè)小葉主要含有磷脂酰膽堿(phosphatidylcholine，PC)和鞘磷脂。細胞發(fā)生凋亡時，細胞膜內(nèi)側(cè)的PS和PE能夠隨著細胞膜雙磷脂層的重分布或反轉(zhuǎn)而出現(xiàn)在細胞膜表面。PS和PE的這種跨膜翻轉(zhuǎn)特點使得它們成為適合的分子顯像靶點。

當今，以磷脂外翻為靶點的活體內(nèi)檢測細胞凋亡的研究主要集中于靶向PS的顯像劑[5]。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)膜聯(lián)蛋白(Annexin)、突觸結(jié)合蛋白C2A片段和Zn2+-雙(2-吡啶甲基)胺(Zn2+-DPA)等可以與細胞外膜表面的PS特異性結(jié)合。其中，放射性核素標記的膜聯(lián)蛋白是研究較為廣泛的凋亡顯像劑。然而，由于膜聯(lián)蛋白相對分子質(zhì)量較大，導(dǎo)致該顯像劑血液清除較慢、信噪比低、早期顯像效果不佳；另外，制備成本高、結(jié)合特異性差和具有免疫原性等缺點也阻礙了其在臨床上的應(yīng)用[6]。

在哺乳動物細胞膜中，PE的含量約占總磷脂的20%～50%，而PS僅占總磷脂的2%～10%[7]。因此，與PS相比，PE作為細胞凋亡顯像的靶點，潛在的結(jié)合位點更多，有利于提高探針在凋亡細胞中的攝取，具有明顯的優(yōu)勢。

2 耐久霉素作為PE的探針

耐久霉素(Duramycin)是由肉桂色鏈輪絲菌產(chǎn)生的羊毛硫抗生素B家族的成員之一，是由19個氨基酸殘基組成的四環(huán)多肽，相對分子質(zhì)量為2013，其分子內(nèi)有三個硫醚鍵連接，還有一個獨特的賴氨酸丙氨酸環(huán)[8]，其整個結(jié)構(gòu)呈一個緊湊的環(huán)形，結(jié)構(gòu)圖示于圖1。耐久霉素與PE結(jié)合的部位為7位苯丙氨酸至14位半胱氨酸的親脂側(cè)鏈，15位天冬氨酸的羧基與PE頭部的氨基發(fā)生離子相互作用而緊密結(jié)合。此外，另有兩個苯丙氨酸側(cè)鏈錨定磷脂雙分子層的疏水區(qū)，使兩者結(jié)合更加穩(wěn)定。耐久霉素的解離常數(shù)可以達到納摩爾級(4～6 nM)，以1∶1比例與PE分子的頭部高特異性的結(jié)合。耐久霉素曾在臨床中用于治療囊性纖維化，從耐久霉素的臨床實際應(yīng)用中可以看出其沒有明顯的毒性和免疫原性[9-10]。

圖1 耐久霉素的結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structure of Duramycin

耐久霉素具有許多結(jié)構(gòu)特征及性質(zhì)[11]，使其可用于PE的分子成像：(1) 耐久霉素能夠特異性的與PE結(jié)合，且不與其他密切相關(guān)的磷脂物種(如PC、PS、磷脂酰肌醇)發(fā)生交叉反應(yīng)；(2) 與典型的線狀多肽和大蛋白相比，其多肽序列較短，相對分子質(zhì)量較低，能夠快速的從血液和非靶器官中清除，背景信號低，有利于成像性能的優(yōu)化；(3) 與蛋白質(zhì)探針相比，具有更好的組織穿透性；(4) 耐久霉素具有“精心設(shè)計”的結(jié)合口袋，其周圍的關(guān)鍵氨基酸殘基可以立體定向識別PE；(5) 分子內(nèi)由多個共價鍵連接，沒有游離的肽末端，這種結(jié)構(gòu)使得耐久霉素可以抵抗血液蛋白酶和肽酶的降解，具有更高的體內(nèi)穩(wěn)定性；(6) 耐久霉素1位半胱氨酸(Cys)和2位賴氨酸(Lys)的伯胺遠離結(jié)合口袋，它們既能提供潛在的生物結(jié)合和標記位點，又不影響與PE的結(jié)合。

目前已有研究將耐久霉素進行熒光素[12-13]或者生物素[12,14]標記，作為PE的探針，利用熒光顯微鏡或者流式細胞儀來檢測細胞凋亡情況，然而這些方法均具有一定的局限性，如熒光組織穿透深度較低、生物素的特異性較差等。

3 放射性核素標記的耐久霉素

放射性核素顯像的組織穿透能力更強，敏感性也更高，因此，在臨床中的應(yīng)用更廣。目前放射性核素標記耐久霉素的凋亡顯像探針主要分為兩類，分別是基于正電子發(fā)射斷層顯像(PET)的正電子類顯像劑和基于單光子發(fā)射計算機斷層顯像(SPECT)的單光子類顯像劑，以下主要對這兩類顯像探針的研究進展進行綜述。

3.1 正電子核素標記的耐久霉素

與SPECT相比，PET的分辨率和敏感性更高，更易于定量分析，使用正電子核素18F、68Ga標記的耐久霉素均有報道。

3.1.118F標記的耐久霉素 Yao等[15]通過4-硝基苯基-2-[18F]氟代丙酸酯(18F-NFP)來進行耐久霉素的18F標記。從18F離子起始合成18F-NFP共需80 min，未經(jīng)衰變矯正，放化收率為(25±5)%(n=10)；以18F-NFP為原料合成至18F-FP-Duramycin共需20 min，未經(jīng)衰變矯正，放化收率為(70±3)%(n=8)，終產(chǎn)物18F-FP-Duramycin的放化純度大于99%，比活度為(23.7±13.7) GBq·μmol-1(n=10)。在小鼠的生物分布實驗中，18F-FP-Duramycin表現(xiàn)出了高血漿和腎臟清除率，經(jīng)尾靜脈注射后 120 min測定，其主要蓄積在肝臟和脾臟中。荷瘤鼠經(jīng)治療后注射18F-FP-Duramycin，1 h后行PET 顯像。荷S180腫瘤裸鼠在治療前后的腫瘤攝取分別為(0.87±0.1)%ID/g和(1.3±0.1)%ID/g，荷A549腫瘤裸鼠在治療前后的腫瘤攝取分別為(1.1±0.2)%ID/g和(1.7±0.1)%ID/g。小動物 PET 顯像實驗表明，18F-FP-Duramycin可成功檢測到動物體內(nèi)腫瘤治療引起的細胞凋亡過程。但18F-FP-Duramycin合成過程復(fù)雜，不利于實現(xiàn)自動化合成，而且其在肝臟和脾臟的放射性攝取較高，這種高背景信號限制了其在腹部區(qū)域成像的應(yīng)用。

Haskali等[16]采用糖氨基酸對18F-FP-Duramycin顯像劑進行了結(jié)構(gòu)優(yōu)化，合成了18F-FP-galacto-Duramycin和18F-FP-digalacto-Duramycin。研究結(jié)果表明，18F-FP-galacto-Duramycin和18F-FP-digalacto-Duramycin的Log D7.4(探針在pH=7.4的PBS緩沖液和正辛醇體系中的脂水分配系數(shù))分別為-0.52±0.04和-2.6±0.04，與18F-FP-Duramycin(Log D7.4為-0.22±0.05)相比，水溶性明顯增加。正常鼠注射18F-FP-digalacto-Duramycin后110 min行PET顯像，結(jié)果顯示，18F-FP-digalacto-Duramycin在腎臟和膀胱中的攝取明顯增高，但是肝臟攝取依然很顯著。

Yuan等[17]采用Al[18F]F標記法合成了Al[18F]F-NOTA-PEG3-Duramycin，合成過程只需30 min，未經(jīng)衰變矯正，放化收率為(21.3±2.6%)(n=10)，放化純度大于99%，比活度為(5.3±1.5)GBq·μmol-1(n=10)。正常小鼠生物分布結(jié)果表明，Al[18F]F-NOTA-PEG3-Duramycin在體內(nèi)分布迅速，血液清除率高。在腦中的攝取最低，這表明其沒有穿過血腦屏障。18F-FP-Duramycin在5 min和2 h時，肝臟中的攝取分別為(39.7±6.5)%ID/g和(11.9±0.9)%ID/g。與18F-FP-Duramycin相比，Al[18F]F-NOTA-PEG3-Duramycin肝臟攝取明顯降低，分別為(8.52±1.4)%ID/g和(4.96±1.0)%ID/g。這一結(jié)果表明，引入PEG3基團可以提高其水溶性，降低其在肝臟中的攝取。但是，其在腎臟中的滯留很高，在30 min和2 h時，分別為(14.31±3.1)%ID/g 和(10.95±1.9)%ID/g，而18F-FP-Duramycin在30 min和2 h時的腎臟攝取分別為(4.64±0.2)%ID/g和(1.14±0.1)%ID/g。荷HCC827腫瘤裸鼠經(jīng)靶向藥物Erlotinib治療后6 h經(jīng)尾靜脈注射Al[18F]F-NOTA-PEG3-Duramycin，1 h后行PET/CT顯像，結(jié)果顯示，腫瘤攝取為(2.96±0.25)%ID/g，與治療前(0.89±0.15)%ID/g相比，攝取值增加了2倍。

3.1.268Ga標記的耐久霉素68Ga是一種優(yōu)良的正電子核素，半衰期為68 min，且可通過發(fā)生器方便的獲得。黃斌等[18]以正電子核素68Ga通過螯合劑NOTA標記Duramycin，合成了68Ga-NOTA-Duramycin，標記率為(92.5±2.1)%，放化純度>90%，體外穩(wěn)定性良好。正常小鼠體內(nèi)生物分布研究表明，注射后5 min，68Ga-NOTA-Duramycin在血液、心、肝、脾、肺有少量放射性攝取，但清除較快；腎放射性攝取較多，隨時間延長，雙腎放射性攝取減少，表明該顯像劑主要經(jīng)腎臟排泄。在豬心肌缺血再灌注損傷模型中，注射68Ga-NOTA-Duramycin 1 h后行PET顯像，結(jié)果顯示缺血組織呈異常局灶性放射性濃聚，與凋亡體外病理檢測結(jié)果一致。

Anne 等[19]還以NODAGA為雙功能螯合劑，制備了68Ga-NODAGA-Duramycin。68Ga-NODAGA-Duramycin在體內(nèi)快速分布，在血液和肝臟中初始示蹤劑濃度最高。血液半衰期為10.10±9.25 min，血液清除快，在2 h內(nèi)，大部分示蹤劑已從體內(nèi)清除。68Ga-NODAGA-Duramycin在肝臟和腎臟有滯留，經(jīng)腎代謝后積聚在膀胱里。在檢測化療引起的器官毒性實驗中，注射68Ga-NODAGA-Duramycin后2 h通過PET/CT成功檢測到化療引起的組織毒性，并通過免疫組織化學(xué)和血液參數(shù)分析證實。

3.2 單光子核素標記的耐久霉素

3.2.199mTc-HYNIC-Duramycin的制備及生物分布 SPECT中常用的同位素有99mTc、123I、111In等，目前報道的僅有99mTc標記的耐久霉素。99mTc發(fā)射純 γ 射線，半衰期 6.02 h，其理化性質(zhì)良好、方便易得，是核醫(yī)學(xué)顯像檢查中最常用的放射性核素。HYNIC (6-hydazinonicotinic acid)是99mTc標記化合物最常用的雙功能螯合劑之一，其標記速度快、產(chǎn)率高、標記物穩(wěn)定性好。

圖2 99mTc-HYNIC-Duramycin的結(jié)構(gòu)Fig.2 Chemical structure of 99mTc-HYNIC-Duramycin

2008年，Zhao等[20]首次描述了99mTc-HYNIC-Duramycin的制備方法，99mTc-HYNIC-Duramycin的結(jié)構(gòu)示于圖2。耐久霉素的分子結(jié)構(gòu)呈一個緊湊的環(huán)形，分子中有兩個伯胺， 其中1位Cys上的伯胺位于環(huán)形內(nèi)側(cè)，而2位Lys上的伯胺位于環(huán)形外側(cè)。在耐久霉素和HYNIC偶聯(lián)的過程中，可能會有三個產(chǎn)物，分別是1位Cys偶聯(lián)HYNIC、2位Lys偶聯(lián)HYNIC以及1、2位氨基酸都偶聯(lián)HYNIC的產(chǎn)物。其中，1、2位氨基酸都偶聯(lián)HYNIC的產(chǎn)物Di-HYNIC-Duramycin可以通過HPLC純化除去，而1位Cys偶聯(lián)HYNIC、2位Lys偶聯(lián)HYNIC的產(chǎn)物HYNIC-Duramycin無法通過HPLC分離，是一對異構(gòu)體。由于立體位阻的原因，導(dǎo)致2位Lys上的伯胺反應(yīng)活性高于1位Cys的伯胺，因此，Zhao等推斷HYNIC-Duramycin主要是2位Lys偶聯(lián)HYNIC的產(chǎn)物。HYNIC-Duramycin是一種穩(wěn)定的復(fù)合物，在還原劑氯化亞錫存在的情況下，以三苯基膦三磺酸鈉(TPPTS)和三羥甲基甘氨酸(tricine)作為協(xié)同配體可與99mTc快速有效的進行反應(yīng)。為了簡化標記過程，隨后Zhao等[21]對配方進行了優(yōu)化，成功研制了一步法標記99mTc-HYNIC-Duramycin的藥盒，高锝酸鈉的用量為1.1～1.5 GBq，在80 ℃下孵育20 min，即可快速可靠地得到放化純度大于90%的99mTc-HYNIC-Duramycin。細胞結(jié)合實驗結(jié)果表明[20]，和對照組相比，99mTc-HYNIC-Duramycin與用喜樹堿誘導(dǎo)凋亡的 Jurkat淋巴細胞的結(jié)合顯著增強。在含有PE的脂質(zhì)體濃度增加的情況下，這種結(jié)合被競爭性地消除。然而，由PC、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol)或PS組成的脂質(zhì)體并不能競爭性地降低99mTc-HYNIC-Duramycin在凋亡細胞中的放射性攝取。這些結(jié)果表明，標記過程對耐久霉素的結(jié)構(gòu)和生物活性沒有影響。在正常大鼠體內(nèi)生物分布實驗結(jié)果顯示99mTc-HYNIC-Duramycin靜脈注射后主要經(jīng)腎臟快速排泄，血液半衰期小于4 min，肝臟和胃腸道的攝取較低。凋亡細胞對99mTc-HYNIC-Duramycin的攝取超過正?；罴毎麛z取的30倍。

然而，Elvas等[22]使用經(jīng)藥盒制備的99mTc-HYNIC-Duramycin進行實驗時，發(fā)現(xiàn)其在小鼠血液中清除速度較慢，脾臟和肝臟攝取較高。于是，他們又對99mTc-HYNIC-Duramycin的純化方法進行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未經(jīng)純化或者固相萃取(SPE)純化后的99mTc-HYNIC-Duramycin相比，經(jīng)過HPLC純化后的99mTc-HYNIC-Duramycin在凋亡腫瘤細胞的攝取更高，而且降低了脾臟和肝臟的攝取。他們推測在耐久霉素的藥盒中存在過量的標記前體HYNIC-Duramycin，可能與99mTc-HYNIC-Duramycin競爭性的結(jié)合凋亡細胞中的PE，另外可能對99mTc-HYNIC-Duramycin的生物分布和排泄動力學(xué)也有一定的影響，而HPLC純化可以有效分離標記物與標記前體，因此得到更理想的結(jié)果。

3.2.299mTc-HYNIC-Duramycin在腫瘤治療療效評估中的應(yīng)用 在放射性核素標記的耐久霉素中，99mTc-HYNIC-Duramycin是生物學(xué)分布和輻射劑量比較理想的一種放射性藥物。99mTc-HYNIC-Duramycin凋亡顯像應(yīng)用范圍廣泛，如心肌缺血再灌注損傷[20,21,23-25]、冠狀動脈粥樣斑塊[25-29]、腦缺血性損傷[24]、電離輻射損傷[29-30]、肺缺氧損傷[31]以及腫瘤治療療效的早期評估等，其中最有潛力的應(yīng)用就是對腫瘤治療療效的早期評估。在臨床上，腫瘤的早期療效評估可以區(qū)分應(yīng)答患者和無反應(yīng)患者，從而最大限度地減少因無效治療而產(chǎn)生的全身毒性，并利于臨床及時調(diào)整治療策略，從而提高患者生存率并減少醫(yī)療成本的優(yōu)勢。以下將主要介紹99mTc-HYNIC-Duramycin在腫瘤早期療效評估中的應(yīng)用。

1) 在靶向治療療效評估中的應(yīng)用

Elvas等[32]用99mTc-HYNIC-Duramycin觀察荷結(jié)腸癌COLO205模型鼠經(jīng)單克隆抗體conatumumab靶向治療誘導(dǎo)細胞凋亡情況。治療后24 h注射99mTc-HYNIC-Duramycin，4 h后行SPECT顯像。治療前，腫瘤/肌肉和腫瘤/血液攝取值比為分別為(4.45±0.92)和(1.83±0.32)。經(jīng)過conatumumab一個療程的靶向治療后，腫瘤/肌肉和腫瘤/血液攝取值比為分別為(30.80±1.89)和(14.93±1.32)，治療后腫瘤攝取值是治療前腫瘤攝取值的7倍，凋亡的腫瘤組織在SPECT圖像中呈現(xiàn)“高亮”區(qū)域，與周圍組織對比度高。然而，conatumumab治療無效的HT29腫瘤，在治療前后，99mTc-HYNIC-Duramycin的攝取水平均較低，這與細胞凋亡誘導(dǎo)的缺乏相對應(yīng)。

18F-FDG是監(jiān)測腫瘤治療反應(yīng)的臨床金標準，可反映腫瘤細胞中葡萄糖的代謝水平，18F-FDG明顯降低往往意味著有效的治療，但18F-FDG并不是腫瘤的特異性顯像劑。在此研究中[32]，同樣用18F-FDG對腫瘤治療的療效進行了評估。無論是治療敏感的COLO205腫瘤，還是治療無效的HT29腫瘤，在conatumumab一個療程的靶向治療后，18F-FDG攝取都沒有明顯的變化。這一結(jié)果表明，對于18F-FDG低親和力的惡性腫瘤，99mTc-HYNIC-Duramycin凋亡顯像可作為評價治療反應(yīng)的一種潛在替代策略。

2) 在化療療效評估中的應(yīng)用

Elvas等[33]采用化療藥物依立替康治療荷結(jié)腸癌COLO205模型鼠，治療后24 h注射99mTc-HYNIC-Duramycin，4 h后行SPECT顯像，監(jiān)測腫瘤對治療的反應(yīng)。在依立替康治療一個周期后，99mTc-HYNIC-Duramycin的攝取為(1.62±0.07)%ID/mL，可以檢測到腫瘤對治療的反應(yīng)。99mTc-HYNIC-Duramycin同樣也適用于多藥聯(lián)合治療腫瘤凋亡成像。奧沙利鉑與依立替康聯(lián)合治療荷結(jié)腸癌COLO205模型鼠后，放射性示蹤劑的攝取進一步增加，為(2.61±0.46)%ID/mL,是空白對照組的2.8倍，并與腫瘤的凋亡反應(yīng)呈正相關(guān)，而預(yù)先注射未標記的耐久霉素可以成功地阻斷腫瘤對99mTc-HYNIC-Duramycin攝取。

Li等[34]將荷乳腺癌MDA-MB-468模型小鼠隨機分為治療組和空白對照組，應(yīng)用99mTc-HYNIC-Duramycin監(jiān)測經(jīng)順鉑化療前后的細胞凋亡情況。第1組在治療前和治療后24 h注射99mTc-HYNIC-Duramycin，4 h后用小動物SPECT/CT評價治療效果。順鉑治療3天后，治療組腫瘤中的99mTc-HYNIC-Duramycin攝取量(7.89±0.62)%ID/g明顯高于對照組(1.69±0.58)%ID/g，且治療后與治療前有顯著性差異。治療前，腫瘤/肌肉(T/M)和腫瘤/血液(T/B)攝取值比為分別為(3.64±1.03)和(1.98±0.65)；治療之后，T/M和T/B分別為(17.69±2.56)和(9.56±1.62)。此外，對腫瘤體積的動態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，直到治療后第8天，腫瘤開始縮小，晚于通過99mTc-HYNIC-Duramycin顯像可作出診斷的時間，這進一步證實99mTc-HYNIC-Duramycin可在治療初期即對療效做出正確評價。

Luo等[35]建立了荷MDA-MB-231乳腺癌細胞的雌性Balb/c小鼠模型，采用紫杉醇化療誘導(dǎo)細胞凋亡72 h后，注射99mTc-HYNIC-Duramycin，2 h后檢測細胞凋亡情況。結(jié)果表明，紫杉醇治療組腫瘤與肌肉(T/M)的比值(5.29±0.62)明顯高于對照組(2.48±0.89)。經(jīng)紫杉醇治療后，腫瘤體積明顯縮小，而99mTc-HYNIC-Duramycin攝取明顯增加，與凋亡指數(shù)、組織學(xué)改變和超微結(jié)構(gòu)改變的趨勢一致。

3) 在放療療效評估中的應(yīng)用

單純放療或聯(lián)合化療是腫瘤常用的治療方式。電離輻射通過激活caspase級聯(lián)反應(yīng)而誘導(dǎo)癌細胞凋亡，而在體外γ射線照射后，PS和PE在細胞膜中同時外翻。Elvas等[33]證實了99mTc-HYNIC-Duramycin在檢測放療誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡方面的能力。荷結(jié)腸癌COLO205模型鼠經(jīng)過4.5 Gy放療24 h后注射99mTc-HYNIC-Duramycin，4 h后進行小動物SPECT/CT顯像。結(jié)果表明，治療組99mTc-HYNIC-Duramycin的攝取比對照組增加了2倍。最后一次放療后，組織學(xué)分析顯示照射誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡。因為放療后細胞凋亡水平的增加程度通常相對較小，敏感性是臨床試驗中細胞凋亡靶向劑的一個主要衡量指標。盡管放療后腫瘤細胞凋亡水平較低，但99mTc-HYNIC-Duramycin仍有足夠的敏感性可檢測到腫瘤對治療的反應(yīng)。

4 結(jié)論

綜上所述，細胞凋亡在腫瘤研究中具有重要意義, PE在細胞凋亡早期暴露在細胞膜表面，可以作為細胞凋亡顯像的靶點。耐久霉素可以與PE特異性結(jié)合，是檢測細胞凋亡的靈敏探針。利用放射性核素對耐久霉素標記后，通過其與PE的結(jié)合，可以活體檢測細胞凋亡。

在放射性核素標記的耐久霉素中，對99mTc-HYNIC-Duramycin的研究最為廣泛，包括標記、藥盒化、純化、動物實驗等，多項動物實驗研究表明，其在腫瘤影像學(xué)和療效評價方面都具有潛在的臨床應(yīng)用價值。然而，將動物研究轉(zhuǎn)化為臨床實踐仍面臨許多挑戰(zhàn)，比如，在患者治療后進行放射性標記耐久霉素的最佳顯像時間和最佳注射劑量還需要深入研究。與SPECT相比，PET的分辨率和敏感性更高，已有學(xué)者使用18F、68Ga等正電子核素來標記耐久霉素，但是現(xiàn)階段其體內(nèi)的生物學(xué)特征并不理想，還有待進一步的優(yōu)化。

目前放射性核素標記的耐久霉素都還處于動物實驗研究階段，我們期待這種新型的分子影像探針能夠早日進入臨床應(yīng)用，在疾病診斷特別是腫瘤的早期療效評估方面取得突破性的進展。