淺談山羊布魯氏桿菌病的診斷及防治

陳永紅

（姚安縣官屯鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村綜合服務中心，云南姚安 675305）

1 布魯氏桿菌病的診斷

1.1 根據(jù)癥狀和病理變化進行初步診斷

1.1.1 癥狀

妊娠母羊的主要癥狀為流產(chǎn)。流產(chǎn)前病癥表現(xiàn)為體溫升高、精神不振、食欲減退、有的長臥不起，由陰道排出黏液或帶血分泌物，陰唇和乳房腫脹，薦部與肋部下陷，以及乳汁呈初乳性質(zhì)，陰道黏膜出現(xiàn)粟粒大紅色結(jié)節(jié)，陰道流出灰白色或淺褐色黏液，繼而發(fā)生流產(chǎn)。流產(chǎn)母羊多數(shù)產(chǎn)出死胎，少數(shù)產(chǎn)出活的弱羔。有的病羊還發(fā)生關(guān)節(jié)炎和滑液囊炎，出現(xiàn)跛行。公羊可表現(xiàn)睪丸炎和附睪炎，公羊發(fā)生睪丸炎，有熱、痛，以后逐漸減輕，無熱、痛，觸之質(zhì)地堅硬。病羊流產(chǎn)后，常發(fā)生胎衣不下，若不及時處治則可能發(fā)生慢性子宮炎，引起不孕。

1.1.2 病理變化

流產(chǎn)胎衣、胎兒的病理損害。流產(chǎn)胎衣具有明顯病變，胎衣呈黃色膠凍樣浸潤，有些部位覆有纖維蛋白絮片和膿液，有的增厚而雜有出血點。胎衣絨毛膜充血和貧血，有時水腫或雜有小出血點，還可能覆蓋一層灰黃色滲出物。子宮絨毛膜間隙中存在灰色或黃色、無氣味的膠凍樣滲出物。胎兒多呈敗血癥變化，漿膜和黏膜有出血斑點，皮下結(jié)締組織發(fā)生漿液出血性炎癥，脾和淋巴結(jié)腫大，肺有支氣管肺炎。早死的胎兒可見干尸化。胎羊胃特別是第四胃中有淡黃色或白色黏稠的絮狀物，腸胃和膀胱的漿膜下可見點狀或線狀出血。漿膜腔略有微紅色液體，腔壁上可能覆有纖維蛋白凝塊，皮下呈出血性漿液性浸潤，肥厚。公羊生殖器精囊內(nèi)可能有出血點和壞死灶，大量釋放的細菌超過了吞噬細胞的吞噬能力，表現(xiàn)出明顯的敗血癥或毒血癥；同時細菌可隨糞、尿排除。流產(chǎn)后流出紅色黏液、胎盤明顯肥厚，皮下呈漿液性浸潤。

1.2 細菌學檢查

1.2.1 染色鏡檢

取可疑絨毛葉滲出液、胎衣、胎兒胃內(nèi)容物、水腫液、胸水、腹水、陰道分泌物等制成涂片，除用革蘭氏染色法染色外，還可用布魯氏菌鑒別染色法染色或柯茲洛夫斯基染色法染色。其中，布魯氏菌鑒別染色法染色鏡檢，布魯氏菌染成橘紅色，背景為藍色。柯茲洛夫斯基染色法染色鏡檢可見單個、成對或成堆存在的紅色球桿狀細菌，其他細菌被染成綠色或藍色。

1.2.2 分離培養(yǎng)

病料可采用流產(chǎn)母羊的子宮及陰道分泌物，也可采用病死羊的的肝、脾、淋巴結(jié)或流產(chǎn)胎兒的內(nèi)容物、肝、脾、淋巴結(jié)接種。常用培養(yǎng)基為血清瓊脂、血清葡萄糖瓊脂、胰蛋白?瓊脂、吐溫葡萄糖瓊脂、馬鈴薯瓊脂、肝湯培養(yǎng)基及甘油肝湯瓊脂等。為抑制雜菌生長，可在培養(yǎng)基中加入放線菌酮、桿菌肽、多黏菌素、乙基紫及結(jié)晶紫。對分離到的細菌可先做形態(tài)學檢查，再做種型鑒定。

1.2.3 動物接種

豚鼠是最適于做布魯氏桿菌分離檢查的試驗動物。病料中含菌量少而能檢出的可靠方法是接種豚鼠。如病料污染較輕，可接種于腹腔；如污染嚴重，可做皮下或肌肉注射。每種病料至少接種2只豚鼠，1只在接種后3周剖殺，另1只在6周剖殺。剖殺前須采血作凝集試驗，滴度在1∶5以上判為陽性。剖殺時，如脾腫，肝與腎有壞死灶，并做細菌分離鑒定。剖殺豚鼠，取脾、肝和淋巴結(jié)等病料涂片染色鏡檢或作細菌分離培養(yǎng)，若分離培養(yǎng)有可疑菌落，則用已知布魯氏桿菌陽性血清作凝集反應，凝集反應為陽性，則可確定為布氏桿菌。若剖殺前的血清凝集反應為陽性，即使剖檢時培養(yǎng)為陰性也可以診斷為布魯氏桿菌病。此外，小鼠和家兔也可以用作試驗動物。

1.3 分子生物學檢查

核酸探針、聚合酶鏈反應（PCR）可以快速檢測布魯菌。PCR技術(shù)有普通PCR、多重PCR、實時熒光定量PCR和AMOS-PCR等方法。病料可采取患病動物脾臟、淋巴結(jié)、流產(chǎn)胎兒內(nèi)容物、胎衣、絨毛膜滲出物、水腫液、胸水、腹水等，也可采取糞便、尿液、乳汁等。

1.4 免疫學檢查

1.4.1 血清凝集試驗

血清凝集試驗是布魯菌病診斷和檢疫常用的方法，具有較高的特異性和敏感性。有試管凝集試驗、平板凝集試驗、緩沖布魯菌抗原試驗、虎紅平板凝集試驗、緩沖平板凝集試驗。緩沖布魯菌抗原試驗是診斷羊布魯菌的指定篩選試驗。我國常用的檢測試驗為虎紅平板凝集試驗和試管凝集試驗，一般用虎紅平板凝集試驗初篩，陽性者用試管凝集試驗做復核試驗。細菌侵入機體后7～15 d血液中就出現(xiàn)凝集抗體隨后凝集滴度逐漸增高。病畜流產(chǎn)后10 d以上，大多數(shù)（1∶100）～（1∶1000）的滴度，陽性反應可保持幾個月甚至2～3年以上，因此流產(chǎn)后采血時間要在7～10 d以后更好。另外由于其他細菌感染，可出現(xiàn)非特異性反應，在羊血清試驗時，要用5 %～10 %鹽水稀釋血清，檢出率才高。

1.4.2 補給結(jié)合反應

本法具有很高的特異性，是OIE確定的國際貿(mào)易指定用于羊布魯菌、綿羊附睪布魯菌試驗。病畜感染后7～14 d血中出現(xiàn)補體結(jié)合抗體，保持時間比凝集素長，特異性和敏感性高，對布魯氏桿菌病診斷有特殊的診斷價值，但操作復雜，通常只作為輔助診斷方法。

1.4.3 全乳環(huán)狀反應

此法操作簡便，敏感性高，可用于混合羊乳的普查，以判定羊群是否存在布魯菌病。絕大部分陽性病例都從奶中排菌，如與血清凝集反應同時并用，不僅可以提高檢出率，也可以說明病的活動性。1只病羊的乳與幾只健康羊的乳混合，仍可出現(xiàn)陽性，若有陽性再分別檢查病羊。注意：初乳或產(chǎn)犢后14 d內(nèi)的乳、泌乳后期的乳、一般乳房炎的乳、接種疫苗后6個月內(nèi)的乳、日產(chǎn)乳量低于5 kg等情況不適合。

1.4.4 變態(tài)反應

可用于檢查犢羊、羊和豬。在尾根皮內(nèi)注射0.2 mL流產(chǎn)布魯菌菌素，陽性者24 h內(nèi)出現(xiàn)紅腫，陰性者無任何變化。羊感染布氏桿菌后20～30 d以上出現(xiàn)變態(tài)反應，它比凝集反應出現(xiàn)稍遲，但持續(xù)時間長，羊在病愈后1～1.5年才逐漸消失。所以本法不適于早期診斷。我國對山羊的布魯氏桿菌病采用布氏桿菌水解素進行大群檢疫。

1.4.5 熒光偏振試驗

熒光偏振試驗是OIE確定的國際貿(mào)易指定試驗，具有很高的敏感性和特異性，可批量檢測的優(yōu)點。實時熒光定量 PCR是在PCR反應體系中加入熒光基團 ，利用對熒光信號積累的實時檢測來監(jiān)測整個PCR進程 ，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析 。方法：取20 uL血清樣品加入黑色96孔微量反應板內(nèi)，加180 uL反應緩沖液，室溫孵育3 min，置熒光偏振儀上讀板，加結(jié)合物10 uL，室溫孵育2 min，置茨光偏振儀上讀板，兩次讀取值的差值與陰性對照的差值進行比較，檢測小于72 mp為陰性，表示無布魯氏抗體，72～93 mp為可疑，大于93 mp，則判定為陽性。

2 預防和防治措施

2.1 健康羊群的預防措施

2.1.1 合理選址及布局

羊舍的位置與公共場所的距離要符合獸醫(yī)主管部門規(guī)定的標準。不把羊舍建在交通主干道、公路邊、居民生活區(qū)、生活飲用水源地、學校、醫(yī)院等公共場所周邊，并按照獸醫(yī)主管部門和環(huán)保部門的規(guī)定標準進行建造。羊舍間距離不能太近，便于防疫和安全生產(chǎn)。同時要具備消毒舍、隔離舍、化污池、化尸池、防疫室等設施，一旦發(fā)生疫病能立即采取防疫隔離措施，切斷傳播途徑，控制疫病的流行。

2.1.2 加強飼養(yǎng)管理

堅持自養(yǎng)自繁，必須引進種羊時應從無病地區(qū)引入并進行嚴格檢疫。對引入的種羊有隔離觀察記錄，及近3年完整的種羊銷售記錄。購進精液、胚胎、引種來源有《種畜禽生產(chǎn)經(jīng)營許可證》的單位，或符合相關(guān)規(guī)定國外進口的種羊、胚胎或精液。引入種羊、精液、胚胎證件齊全，銷售種羊、胚胎或精液有疫病抽查記錄，同時留用種羊、精液有抽檢檢測報告結(jié)果：羊布魯氏菌病檢測陰性、羊口蹄疫病原檢測陰性。對引入種羊進行兩次布魯菌病的免疫學檢查，檢查均為陰性者才可以與健康羊群混群飼養(yǎng)。

2.1.3 定期檢疫和疾病監(jiān)測

每年定期對羊群作布魯氏桿菌病檢疫，以及時發(fā)現(xiàn)病畜。應用免疫學方法對動物群體定期抽樣檢查布魯氏菌病。如發(fā)現(xiàn)陽性動物，及時隔離或撲殺，并做無害化處理，以防止感染其他動物；若有原因不明的流產(chǎn)時，必須嚴格隔離流產(chǎn)母羊，對流產(chǎn)胎兒及胎膜進行微生物檢查，嚴格消毒處理流產(chǎn)物污染的環(huán)境和用具；對流產(chǎn)母羊作血清學檢查，直到證明為非傳染性流產(chǎn)時才能取消隔離。

2.2 受威脅羊群的預防措施

2.2.1 定期檢疫

應當建立健全防疫制度，同時定期執(zhí)行，以便及時發(fā)現(xiàn)和處理病畜。對羊群每年進行2次檢疫，采用免疫學方法定期進行普遍檢疫，將檢出的陽性和可疑反應的病羊隔離飼養(yǎng)，如檢出患病羊的數(shù)量少，應該及時淘汰；當數(shù)量多時，采用檢疫凈化進行處理。在1年內(nèi)連續(xù)3次檢疫未出現(xiàn)陽性的山羊，則認為是凈化山羊群體，才可以與健康羊群進行合群飼養(yǎng)。其中種公羊必須檢疫，健康的種公羊才能作為種用。

2.2.2 布魯氏豬型2號弱毒苗應用

此種疫苗可以口服、拌水飲服或灌服、皮下注射或肌肉注射和噴霧法。山羊在配種前1～2個月或在懷孕期采用口服法，此法不受懷孕限制。拌水飲服或灌服時，不能用熱水，山羊在口服疫苗當天、前1 d或后1 d應停止應用抗生素添加飼料和發(fā)酵飼料。注射法和噴霧法不能用于孕羊，噴霧完畢后，讓羊群在室內(nèi)停留20～30 min。

2.2.3 布魯氏桿菌羊型5號弱毒苗應用

此疫苗用于預防羊和羊的布氏桿菌病。注意對體質(zhì)瘦弱、食欲和體溫不正常、妊娠期的山羊及公畜，不宜采用。羊經(jīng)檢疫陰性的進行接種，陽性反應的山羊接種，應進行隔離和淘汰，如檢疫有困難的大群羊，可不經(jīng)檢疫進行預防接種。幼羊應在3～8月齡時接種；成年羊一般不接種，宜采取分群隔離、培養(yǎng)健康幼畜和淘汰病畜的辦法進行凈化。連續(xù)接種2～3年的羊群，可隔1～1.5年進行檢疫，再決定繼續(xù)進行免疫或停止接種。

2.3 感染山羊的防治措施

2.3.1 檢疫凈化

對感染山羊群體，以免疫學方法進行反復多次檢疫，檢出的患病山羊應立即淘汰。如果血檢陽性動物數(shù)量多，應隔離飼養(yǎng)，專人飼養(yǎng)，避免與健康羊群接觸；如陽性山羊數(shù)量少，必須淘汰處理。這樣逐步檢疫凈化，直到全群山羊均為陰性，再經(jīng)1年以上檢疫或連續(xù)3次檢疫未出現(xiàn)陽性的山羊群體，即認為是凈化山羊群體。

2.3.2 培育健康山羊群體

如血檢陽性山羊數(shù)量多，不能立即淘汰處理，則采用培育健康山羊群體方法。血檢陽性雌性山羊用雄性山羊的精液人工授精，雌性山羊產(chǎn)前、產(chǎn)后要對體軀和產(chǎn)房環(huán)境進行徹底消毒。幼齡山羊出生后、立即與雌性山羊群體隔離，喂健康山羊初乳，以后喂健康乳或消毒乳；在1年內(nèi)進行2～3次免疫學檢查，如檢查均為陰性，可作為健康山羊飼養(yǎng)；如為陽性，則淘汰處理。

2.3.3 嚴格執(zhí)行消毒等獸醫(yī)衛(wèi)生措施

對圈舍的環(huán)境定期進行嚴格消毒。一旦發(fā)現(xiàn)流產(chǎn)，則必須對流產(chǎn)物、胎兒、胎衣進行徹底的無害化處理，同時對污染的環(huán)境嚴格消毒?；疾∩窖虻姆置谖?、排泄物及其污染的環(huán)境、廄舍、用具、運輸工具等均應徹底消毒。疫區(qū)的生皮、羊毛等動物產(chǎn)品及飼草飼料等也應進行消毒處理才能利用。流產(chǎn)污染的草場，應空置3個月以上才能再次放牧，周圍地區(qū)緊急免疫接種，同時做好相關(guān)人員的個人防護。建立病死羊無害化處理制度，并且記錄完整，具有可追溯性，無害化處理設施運轉(zhuǎn)正常，并且按國家規(guī)定處置患布魯氏菌病的山羊。

2.3.4 免疫接種

免疫接種是控制本病的有效措施，布魯菌病免疫時以細胞免疫為主。其保護宿主抵抗布魯菌的作用機制是特異T細胞與布魯菌抗原反應，產(chǎn)生淋巴因子，提高了巨噬細胞活性，從而消除細胞內(nèi)的細菌。在沒有隔離條件的山羊群體，可以采取接種疫苗措施控制布魯菌病。疫苗首先選用毒力穩(wěn)定、使用安全、免疫力好、且適用于孕羊的布魯氏豬型菌2號弱毒苗；其次選用免疫效果較好，但毒力較強，不適用于孕羊的布魯氏桿菌羊型5號弱毒苗。

2.3.5 病羊處理

病羊頭數(shù)不多且價值不大，以淘汰屠宰為宜。逐步淘汰和肉品合理利用是一種積極的措施，各地可因地制宜采用。此外對病畜進行對癥治療，如剝離胎衣、子宮炎時進行沖洗及治療、抗生素的應用等。羊流產(chǎn)時用土霉素配成5%溶液，肌肉注射，每日1次，連注4次，能制止流產(chǎn)的繼續(xù)發(fā)生。