新鮮果蔬農(nóng)殘快速檢測(cè)中常見問題及處理
——以CL-BIII型八通道速測(cè)儀為例

罕麗華，俸 麗，李海英，陳加賀，王忠誠(chéng)*

（1.勐?？h農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)站，云南勐海666200，2.雙江縣勐庫(kù)鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)農(nóng)村服務(wù)中心，云南雙江677304）

酶抑制法測(cè)定新鮮果蔬農(nóng)藥殘留情況是目前中國(guó)控制初級(jí)農(nóng)產(chǎn)品高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法，也是目前國(guó)內(nèi)和云南省應(yīng)用最為廣泛的果蔬農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法[1]，廣泛用于縣、鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）、合作社、超市及蔬菜、水果生產(chǎn)基地和批發(fā)市場(chǎng)等區(qū)域和場(chǎng)所。農(nóng)殘速測(cè)儀在基層被廣泛應(yīng)用，然而由于基層檢測(cè)人員的學(xué)歷、專業(yè)、年齡差異較大，且多為兼職，人員調(diào)動(dòng)頻繁，開展檢測(cè)工作常面臨各種難題。農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)法具有用時(shí)短、成本低，對(duì)檢測(cè)人員要求不高，易于在基層推廣等優(yōu)點(diǎn)。

速測(cè)法對(duì)于基層人員快速篩選不合格新鮮農(nóng)產(chǎn)品，提高農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管水平具有重要作用?，F(xiàn)對(duì)勐海縣鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）級(jí)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)體系運(yùn)行8年使用CL-BIII 型八通道農(nóng)殘速測(cè)儀器過程中常見的問題及處理方法進(jìn)行梳理總結(jié)。

1 快速檢測(cè)操作及結(jié)果判定

1.1 實(shí)驗(yàn)操作步驟

1.2 判定依據(jù)

快速檢測(cè)儀檢測(cè)對(duì)象是新鮮蔬菜和水果中有機(jī)磷類和氨基甲酸酯類農(nóng)藥[2]。檢測(cè)方法依據(jù)GB/T 5009.199-2003《蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)》。判定方法依據(jù)酶抑制率測(cè)定值小于50%為合格；測(cè)定值超過50%為不合格，建議重復(fù)測(cè)定1 次，若測(cè)定值仍然超過50%，則初步判定為不合格樣本，需應(yīng)用大型儀器設(shè)備如氣相色譜、液相色譜等進(jìn)一步定性定量農(nóng)藥成分及各組分含量。

2 常見問題及處理

2.1 聯(lián)機(jī)失敗

窗口提示儀器連機(jī)失敗時(shí)，應(yīng)檢查儀器設(shè)備通訊串口是否匹配正確。點(diǎn)擊我的電腦右鍵-管理-設(shè)備管理器-端口-查看串口是 COM1 口、COM2 口、COM3 口還是COM4 口，再打開檢測(cè)平臺(tái)查看設(shè)置菜單欄-設(shè)備設(shè)置-參數(shù)設(shè)置-選擇與電腦端匹配的串口，配對(duì)成功按確定后，需重啟檢測(cè)平臺(tái)。當(dāng)儀器首次安裝、卸載重新安裝或改變USB 插入端口時(shí)聯(lián)機(jī)失敗現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，也有少數(shù)聯(lián)機(jī)失敗案例是由于數(shù)據(jù)串口線的損壞引起的，應(yīng)購(gòu)買RS-232 串行9 針型串口重新安裝聯(lián)機(jī)。

2.2 試劑配制錯(cuò)誤及保存不當(dāng)

CL-BIII 型速測(cè)儀配套的未拆封檢測(cè)試劑盒含有2 袋甲乙粉末，即磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀鹽晶體顆粒。配制時(shí)應(yīng)打開甲乙粉末包裝放進(jìn)潔凈玻璃燒杯里，加蒸餾水配制成510 ml 的緩沖鹽農(nóng)殘?zhí)崛∫骸Ｈ襞渲迫芤簳r(shí)因疏漏，只放了1 包甲試劑粉末或者乙試劑粉末，會(huì)導(dǎo)致試劑空白對(duì)照測(cè)定無效，無法進(jìn)入下一程序。

快速檢測(cè)試劑盒規(guī)格為186 批次/盒，內(nèi)含3 ml/瓶?jī)龈蓜顟B(tài)的酶 6 份、3 ml/瓶底物 6 份、3 ml/瓶顯色劑1 份、白色晶體提取液2 份。未拆封的試劑應(yīng)保存于0 ℃以下環(huán)境的冷凍箱內(nèi)，保質(zhì)期為1 年。配制好的試劑及使用過的試劑，需保存在4 ℃條件下的儲(chǔ)藏箱內(nèi)。配制好的酶、底物保質(zhì)期為1 周，提取液為1年，顯色劑應(yīng)避光保存，且有效期為半年。配制好的試劑應(yīng)貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽內(nèi)容應(yīng)至少包含試劑名稱、唯一性編號(hào)、配制人、配制時(shí)間，保質(zhì)期期限等內(nèi)容。決不允許使用過期試劑藥品開展檢測(cè)工作。

已配制的試劑應(yīng)按要求保存，從冰箱取出時(shí)應(yīng)冷卻至室溫，或用手溫捂熱，使酶恢復(fù)其活性再使用。酶的空白對(duì)照測(cè)試3 min 吸光度變化差值應(yīng)在0.3 以上，才可進(jìn)一步操作。

2.3 檢測(cè)盲區(qū)

盲區(qū)體現(xiàn)在2 個(gè)方面，一是易產(chǎn)生假陽(yáng)性型果蔬對(duì)抑制率的干擾[3]，可能會(huì)造成結(jié)果偏高。二是色素含量較高的果蔬，屏蔽了部分吸光度，可能引起測(cè)定結(jié)果偏低。為減小誤差，軟件配套特殊果蔬《果蔬農(nóng)藥殘留比對(duì)數(shù)據(jù)庫(kù)》來校準(zhǔn)因假陽(yáng)性及色素吸收光譜帶來的干擾。當(dāng)檢測(cè)如韭菜、蔥、蒜等易產(chǎn)生假陽(yáng)性的蔬菜，以及番茄、紅莧菜、胡蘿卜等色素含量較高的樣本時(shí)應(yīng)單獨(dú)設(shè)置檢測(cè)通道導(dǎo)入標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照庫(kù)相應(yīng)對(duì)照曲線進(jìn)行樣本分析。

2.4 儀器調(diào)0和調(diào)100參考線不到位

儀器調(diào)0 和調(diào)100 是對(duì)儀器透射光通道的調(diào)試，先調(diào)試透射值0 還是100，其先后順序不影響測(cè)定結(jié)果。檢測(cè)平臺(tái)譜圖橫坐標(biāo)為測(cè)定時(shí)間，縱坐標(biāo)為投射比（t）。調(diào)0 值時(shí)放入黑塊，此時(shí)光束無法通過，Y=0 的橫軸上應(yīng)有紅色參考線通過。調(diào)100 值時(shí)通道為空，光速應(yīng)100%通過，Y=100 的橫軸上應(yīng)有紅色參考線通過，運(yùn)行30 s 后，點(diǎn)擊調(diào)試成功按鈕。在調(diào)試0 值和100 值的過程中，看不到參考紅線或紅線低（高）于透射值的情況，應(yīng)點(diǎn)擊“結(jié)束分析”，重啟“開始對(duì)照分析”繼續(xù)調(diào)試，直到透射比Y=0 或Y=100 的橫軸上有紅色直線通過才算成功。若以上操作仍不能完成調(diào)試，則可能是儀器內(nèi)部光源或通道已損壞，需要返廠維修。

2.5 抽（?。硬灰?guī)范

抽樣、取樣不規(guī)范的細(xì)節(jié)問題時(shí)有發(fā)生，抽取的樣本應(yīng)按《農(nóng)藥殘留分析樣本的采樣方法》（NY/T 789-2004）要求，填好抽樣單，貼上標(biāo)簽，標(biāo)簽應(yīng)至少包含樣品名稱、編號(hào)、抽樣人、時(shí)間、地點(diǎn)等內(nèi)容。當(dāng)樣本到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)立即開展檢測(cè)前處理工作，將樣本去除不可食部分，截成小段后混勻，采用四分法縮分。稱樣時(shí)樣本剪成1～2 cm 見方即可，不必剁碎，以免造成難以提取澄清溶解液和引起更多的色素干擾。當(dāng)提取液較渾濁時(shí)應(yīng)過濾后再測(cè)定。

2.6 結(jié)果未保存

儀器運(yùn)行測(cè)定環(huán)節(jié)耗時(shí)3 min，測(cè)定完畢，檢測(cè)平臺(tái)會(huì)彈出樣本是否合格的窗口，應(yīng)及時(shí)點(diǎn)擊保存按鈕。若直接關(guān)閉窗口，將導(dǎo)致數(shù)據(jù)直接消失，前面的工作都是徒勞。若發(fā)現(xiàn)窗口彈出的是不合格樣品的提示，應(yīng)再重復(fù)測(cè)定1 次，以避免實(shí)驗(yàn)誤差造成誤判。

2.7 實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件不滿足要求

勐?？h溫濕度較大，應(yīng)保證室內(nèi)檢測(cè)環(huán)境溫度在（23±5）℃，濕度控制在（65±15）%。配制試劑及樣品前處理應(yīng)在有洗滌池旁的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面上進(jìn)行。測(cè)定樣品時(shí)應(yīng)將檢測(cè)池蓋蓋緊。用完的比色皿應(yīng)及時(shí)用自來水清洗干凈，再用蒸餾水清洗，倒置在濾紙上，待自然風(fēng)干后及時(shí)放進(jìn)比色皿盒子里。實(shí)驗(yàn)完畢，應(yīng)做好使用儀器情況登記，及時(shí)清洗所用器皿，整理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，保證實(shí)驗(yàn)室干凈整潔有序。實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)有關(guān)水、關(guān)電、禁止吸煙提示及無關(guān)人員禁止入內(nèi)的提醒標(biāo)志。

2.8 檔案不完整

檔案工作是檢測(cè)工作的一項(xiàng)重要內(nèi)容，檢測(cè)流水單或檢測(cè)統(tǒng)計(jì)單應(yīng)及時(shí)打印并跟隨對(duì)應(yīng)抽樣單歸檔。檔案還應(yīng)含儀器使用說明書、實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程、檢測(cè)工作年終總結(jié)、年初目標(biāo)責(zé)任計(jì)劃書、現(xiàn)場(chǎng)抽樣及檢測(cè)圖片、開展工作的簡(jiǎn)報(bào)等內(nèi)容。

2.9 其他問題

實(shí)驗(yàn)的開展應(yīng)至少有2 名檢測(cè)人員互相監(jiān)督和配合完成，嚴(yán)格按照操作規(guī)程的步驟和時(shí)間規(guī)定進(jìn)行，不能急于求成，更不能減少步驟。

為減小誤差，樣品應(yīng)做平行對(duì)照，并規(guī)定第1 個(gè)樣品和每10 個(gè)樣品間設(shè)置平行對(duì)照。

加入底物后，應(yīng)迅速混勻，立即測(cè)試。

移液槍用完要將量程調(diào)到最大值，用畢應(yīng)放置在移液槍架上，不能平放在實(shí)驗(yàn)桌面上，以免提取液回流造成槍體污染。調(diào)量程時(shí)應(yīng)遵循數(shù)值從大到小的原則。一次性槍頭使用后應(yīng)及時(shí)丟棄，避免樣本交叉污染。