8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB及iNOS在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)病人中的表達(dá)研究

汪 莉，石慧芬，江海英，劉金霞，陳 茵

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion,RSA)指的是連續(xù)發(fā)生2次或2次以上的自然流產(chǎn),其也是臨床最常見的病理妊娠疾病，可對病人身心和生育健康造成巨大的危害[1]。關(guān)于該疾病的發(fā)病機(jī)制臨床尚無明確定論，但有研究[2-4]表明，RSA中能夠識別病人病因的僅占1/2，主要包含母體生殖道異常、免疫功能異常、內(nèi)分泌異常、染色體異常、生殖道感染及子宮解剖因素等。但仍有1/2病人發(fā)病原因不明。因此，本研究分析8-異構(gòu)前列腺素(8-isoprostane)、超氧化物歧化酶(SOD)、血漿總抗氧化能力(AOA)、轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)在RSA中表達(dá)及影響，以探究不明原因RSA發(fā)病的相關(guān)機(jī)制,以期能為該疾病預(yù)防和治療提供有效的參考?，F(xiàn)作報道。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2018年6月至2019年10月收治的119例不明原因RSA病人作為研究對象，分為不明原因RSA病人60例作為研究對象(病例組)，進(jìn)行正常妊娠分娩婦女59例作為參照對象(對照組)，病例組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)連續(xù)發(fā)生早期自然流產(chǎn)3～10次者；(2)女方生殖道未出現(xiàn)器質(zhì)性改變者；(3)生殖道內(nèi)分泌正常者；(4)無生殖道感染者；(5)抗子宮內(nèi)膜抗體、抗心磷脂抗體等呈陰性者；(6)夫妻雙方染色體正常者；(7)病人及家屬對該項(xiàng)研究均知情同意，且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并存在心、肝、腎功能障礙者；(2)合并存在其他可能影響本研究結(jié)果的疾病者。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)正常早孕孕婦；(2)病人及家屬對該項(xiàng)研究均知情同意，且簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并存在心、肝、腎功能障礙者；(2)合并存在其他可能影響本研究結(jié)果的疾病者。2組病人的年齡與體質(zhì)量指數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表1)，具有可比性。

表1 2組病人一般資料比較

1.2 方法 血液指標(biāo)檢測：對照組在分娩20 min內(nèi)，病例組在流產(chǎn)后20 min內(nèi)抽取病人10 mL靜脈血，采用3 000 r/min離心10 min后，留取血清保存于-60 ℃冰箱中待檢，采用雙抗體夾心法檢測8-isoprostane水平，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測SOD、AOA水平和NF-κB、iNOS含量。

絨毛蛻膜組織相關(guān)指標(biāo)檢測：收集對照組分娩后和病例組流產(chǎn)后的蛻膜組織，采用0.9%氯化鈉溶液反復(fù)沖洗，漂洗干凈后，在4 ℃環(huán)境中采用10%甲醛將絨毛蛻膜組織固定24 h，使其使其脫水干凈，再采用石蠟將其制成包塊，并制備厚度為4 μm左右的石蠟切片，然后對切片標(biāo)本采用免疫組織化學(xué)SP法進(jìn)行染色，最后，采用ELISA法對各組絨毛蛻膜組織中的8-isoprostane、SOD、AOA水平和NF-κB、iNOS含量進(jìn)行檢測[5]。

1.3 觀察指標(biāo) 比較2組病人血液和絨毛蛻膜組織中的8-isoprostane、SOD、AOA等氧化應(yīng)激指標(biāo)及NF-κB、iNOS水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用t(或t′)檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 2組血液中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比較 2組病人血液中AOA水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，不明原因RSA病人血液中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均高于正常妊娠婦女(P<0.01)，血液中SOD水平低于正常妊娠婦女(P<0.01)(見表2)。

表2 2組血液中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-kB和iNOS水平比較

2.2 2組絨毛蛻膜組織中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比較 2組病人絨毛蛻膜組織中AOA水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，不明原因RSA病人絨毛蛻膜組織中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平均明顯高于正常妊娠婦女(P<0.01)，SOD水平明顯低于正常妊娠婦女(P<0.01)(見表3)。

表3 2組絨毛蛻膜組織中8-isoprostane、SOD、AOA、NF-κB和iNOS水平比較

3 討論

近年來，我國RSA發(fā)病率呈明顯的上升趨勢，該疾病不僅會引發(fā)孕婦病人出現(xiàn)連續(xù)自然流產(chǎn)現(xiàn)象，同時還會引發(fā)其停經(jīng)后出現(xiàn)陰道出血、腹痛等癥狀，從而對病人身心和生育健康造成嚴(yán)重的影響[6]。要預(yù)防RSA的發(fā)生和采取有效的方案對病人進(jìn)行治療，就需對其致病原因進(jìn)行明確[7]。然而，臨床研究表明，導(dǎo)致RSA的致病因素十分復(fù)雜，RSA中能夠識別病人病因的僅占1/2，主要包含母體生殖道異常(如母體子宮畸形、子宮肌瘤、宮頸機(jī)能不全或存在Asherman綜合征等)、免疫功能異常(主要包含自身免疫和同種免疫)、內(nèi)分泌異常(包含黃體功能不全、高泌乳素血癥、多囊卵巢綜合征、糖尿病、甲狀腺疾病等)、染色體異常(包含胚胎染色體異常和羅伯遜易位、平衡易位等夫妻染色體異常)、生殖道感染(多指由解脲支原體、沙眼衣原體感染引起的宮頸炎或子宮內(nèi)膜炎)等，但仍有1/2病人發(fā)病原因不明[8-9]。

文獻(xiàn)研究[10]表明，不明原因自然流產(chǎn)發(fā)生和孕婦機(jī)體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)密切相關(guān)。氧化應(yīng)激指的是體內(nèi)氧化和抗氧化作用失衡，傾向于氧化作用，并產(chǎn)生大量氧化中間物[11]。并且，我國已有不少研究[12-13]證實(shí)，氧化應(yīng)激參與了血管內(nèi)皮損傷，而血管形成是決定胚胎著床與否、良好供血與否以及孕婦病人妊娠成功與否的關(guān)鍵。若孕婦病人早期發(fā)生了氧化應(yīng)激，可引發(fā)其血管內(nèi)皮細(xì)胞受損和引發(fā)其機(jī)體出現(xiàn)炎性反應(yīng)，這樣便會增加其機(jī)體炎性反應(yīng)介質(zhì)釋放和激活中性粒細(xì)胞，產(chǎn)生大量氧化自由基，從而易導(dǎo)致氧自由基聚集和細(xì)胞壁浸潤，最終促進(jìn)動脈粥樣硬化斑塊的形成，而大量中性粒細(xì)胞被激活又可導(dǎo)致氧化自由基劇增，從而進(jìn)一步加重孕婦病人機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，進(jìn)而會降低孕婦妊娠過程中抗氧化系統(tǒng)功能，使其發(fā)生自然流產(chǎn)[14-15]。人體氧化應(yīng)激反應(yīng)包含8-isoprostane、SOD、AOA等多項(xiàng)氧化應(yīng)激指標(biāo)。本研究中，分別對60例不明原因RSA病人及59例正常妊娠婦女行血液和絨毛蛻膜組織中8-isoprostane、SOD、AOA等氧化應(yīng)激指標(biāo)及NF-κB、iNOS水平檢測，結(jié)果顯示，2組病人血液和絨毛蛻膜組織中AOA水平對比無顯著差異，不明原因RSA病人血液中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平顯著高于正常妊娠婦女，不明原因RSA病人血液中SOD水平顯著低于正常妊娠婦女，不明原因RSA病人絨毛蛻膜組織中8-isoprostane、NF-κB和iNOS水平顯著高于正常妊娠婦女，不明原因RSA病人血液中SOD水平顯著低于正常妊娠婦女，說明不明原因RSA病人與正常妊娠婦女血液和絨毛蛻膜組織中的 8-isoprostane、SOD、NF-κB和iNOS表達(dá)存在顯著差異，提示這些指標(biāo)可能是引發(fā)不明原因RSA發(fā)生的危險因素。

在上述影響指標(biāo)中，8-isoprostane過度表達(dá)可抑制Th2細(xì)胞分泌和促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖，并促使Th細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Th1細(xì)胞，從而會導(dǎo)致母胎界面細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡，引發(fā)胚胎植入失敗，進(jìn)而會引發(fā)孕婦病人出現(xiàn)非正常流產(chǎn)[16-18]。另外，臨床研究[19-20]表明，孕婦妊娠時，其機(jī)體SOD水平升高能維持氧化和抗氧化平衡，若SOD水平降低則會導(dǎo)致氧化和抗氧化失衡，從而易導(dǎo)致孕婦難以維持正常妊娠而發(fā)生自然流產(chǎn)。NF-κB可參與胚胎早期發(fā)育和調(diào)節(jié)胚胎著床過程，若母胎界面NF-κB表達(dá)過度，則易誘發(fā)其下游的IFN-γ及TNF-α過度表達(dá)，從而易誘發(fā)病人發(fā)生自然流產(chǎn)。iNOS與孕婦病人機(jī)體免疫調(diào)節(jié)具有直接影響關(guān)系，一般情況下，iNOS基因不表達(dá)，只在多種細(xì)胞因子和內(nèi)毒素刺激下，才可發(fā)生翻譯、轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。若其正常表達(dá)可發(fā)揮有效的免疫功能調(diào)節(jié)作用，而在妊娠免疫耐受中免疫調(diào)節(jié)作用能促進(jìn)孕婦機(jī)體Th1/Th 動態(tài)平衡得到有效維持，從而能維持其正常妊娠，若iNOS基因表達(dá)不正常，則會導(dǎo)致Th1/Th失衡，從而難以維持母胎微環(huán)境穩(wěn)定，進(jìn)而易引發(fā)其發(fā)生自然流產(chǎn)。

綜上所述，不明原因RSA病人血液和絨毛蛻膜組織中的8-isoprostane、SOD、NF-κB和iNOS表達(dá)與正常妊娠婦女具有明顯差異，因此，其可作為預(yù)測不明原因RSA發(fā)生的重要因子。