ZO-1 相關性核酸結(jié)合蛋白表達對原發(fā)性膀胱癌癌細胞增殖、凋亡的作用研究

陳秀儉

（河南省滑縣人民醫(yī)院 滑縣456400）

膀胱癌是臨床多發(fā)泌尿系惡性腫瘤，膀胱黏膜處高發(fā)，隱匿性強，90%以上僅表現(xiàn)為血尿，但血尿肉眼可見時多數(shù)已至中晚期[1]。血清腫瘤標志物檢測早期膀胱癌敏感性較低，臨床急需尋找特異性、敏感性高的膀胱癌相關分子標志物，以便早期確診、治療。緊密連接蛋白主要構(gòu)成部分有閉鎖小帶蛋白-1相關性核酸結(jié)合蛋白（ZONAB），在多種腫瘤組織內(nèi)顯示變異表達，細胞學研究指出，ZONAB 在膀胱癌組織中表達異常，可能參與腫瘤的發(fā)病、發(fā)展[2]。本研究旨在探討ZONAB 表達在原發(fā)性膀胱癌癌細胞增殖、凋亡中的作用機制?，F(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年6月～2019年7月我院收治的原發(fā)性膀胱癌患者64例為研究對象，男41例，女23例；年齡48～64 歲，平均（56.03±3.01）歲；體質(zhì)量指數(shù)17.8～24.9 kg/m2，平均（21.36±1.05）kg/m2。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審批通過。

1.2 納入及排除標準 納入標準：（1）病理組織學確診；（2）原發(fā)性膀胱癌；（3）未經(jīng)治療；（4）患者及其家屬知情研究并簽署知情同意書。排除標準：（1）繼發(fā)性膀胱癌患者；（2）伴感染性疾病者；（3）合并自身免疫性疾病者；（4）其他腫瘤疾病患者。

1.3 檢測方法 取每位膀胱癌患者的膀胱癌、癌旁組織各1 塊（1 cm×1 cm×1 cm），生理鹽水洗滌，液氮保存，隨后轉(zhuǎn)至-80℃冰箱保存；取60～100 mg 標本加Trizol 1 ml，提取總RNA，以分光光度計檢測所提取RNA 吸光值，用實時熒光定量PCR 技術檢測ZONAB 基因、增殖基因、凋亡基因表達情況。實時熒光定量PCR 儀購自中山大學達安基因股份有限公司，所用試劑、試劑盒均為儀器配套提供，并由相同資深?？茩z驗醫(yī)師規(guī)范完成。

1.4 觀察指標 （1）對比膀胱癌組織、癌旁組織的ZONAB mRNA 表達量。（2）對比膀胱癌組織、癌旁組織增殖基因，包括核轉(zhuǎn)運蛋白（KPNA2）、HS 糖蛋白（HSG）、Yes 相關蛋白（YAP）mRNA 的表達量。（3）對比膀胱癌組織、癌旁組織凋亡基因，B 淋巴細胞瘤-2（Bcl-2）、胱冬肽酶-3（Caspase-3）、胱冬肽酶-7（Caspase-7）、抗凋亡因子（Livin）、凋亡抑制蛋白（Survivin）mRNA 表達量。（4）分析膀胱癌組織、癌旁組織ZONAB mRNA 表達量與增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 表達量的關系。

1.5 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)采用SPSS21.0 統(tǒng)計軟件學分析處理。符合正態(tài)分布的計量資料以（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗。相關性用Pearson 相關分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌組織、 癌旁組織ZONAB mRNA 表達量分析 膀胱癌組織ZONAB mRNA 表達量較癌旁組織高（P＜0.05）。見表1。

表1 膀胱癌組織、癌旁組織ZONAB mRNA 表達量分析（±s）

表1 膀胱癌組織、癌旁組織ZONAB mRNA 表達量分析（±s）

組織 n ZONAB mRNA 表達量膀胱癌組織癌旁組織6464 tP 139.67±15.7697.56±9.4818.317＜0.001

2.2 膀胱癌組織、癌旁組織增殖基因mRNA 表達量分析 膀胱癌組織KPNA2、HSG、YA 的mRNA 表達量較癌旁組織高（P＜0.05）。見表2。

表2 膀胱癌組織、癌旁組織增殖基因mRNA 表達量分析（±s）

表2 膀胱癌組織、癌旁組織增殖基因mRNA 表達量分析（±s）

組織 n KPNA2 HSG YAP膀胱癌組織癌旁組織6464 tP 129.68±13.6795.33±9.0216.779＜0.001121.29±14.3882.67±8.0618.742＜0.001123.54±13.6698.77±11.8010.978＜0.001

2.3 膀胱癌組織、癌旁組織凋亡基因mRNA 表達量分析 膀胱癌組織Bcl-2、Livin、Survivin 的mRNA表 達 量 較 癌 旁 組 織 高，Caspase-3、Caspase-7 的mRNA 表達量較癌旁組織低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 膀胱癌組織、癌旁組織凋亡基因mRNA 表達量分析（±s）

表3 膀胱癌組織、癌旁組織凋亡基因mRNA 表達量分析（±s）

組織 n Bcl-2 Livin Survivin Caspase-3 Caspase-7膀胱癌組織癌旁組織6464 tP 113.67±12.3993.05±10.0610.336＜0.001126.54±13.0782.13±8.2922.955＜0.001101.77±11.2383.08±8.1410.780＜0.00174.05±7.34102.66±11.3916.891＜0.00179.67±7.9291.06±8.447.873＜0.001

2.4 分析ZONAB mRNA 表達與增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 的關系 經(jīng)Pearson 分析，ZONAB mRNA 與增殖基因mRNA、凋亡基因Bcl-2、Livin的 Survivin、mRNA 呈 正 相 關， 與 Caspase-3、Caspase-7 的mRNA 呈負相關，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

表4 分析ZONAB mRNA 表達量與增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 的關系

3 討論

近年來膀胱癌患病率有顯著升高趨勢，且隱匿性強，發(fā)現(xiàn)時往往已是中晚期。因此臨床需尋找敏感性高、診斷效果可靠的檢測手段，以早確診，早治療[3]。ZONAB 激活進入細胞核后高特異性結(jié)合增殖細胞核抗原（PCNA）啟動子，刺激細胞惡性轉(zhuǎn)化，研究表明，ZONAB 在異常增殖、分化細胞內(nèi)呈現(xiàn)高表達[4～5]。本研究結(jié)果顯示，與癌旁組織對比，膀胱癌組織ZONAB mRNA 高表達（P＜0.05），表明ZONAB可能介導膀胱癌的發(fā)病、發(fā)展。

有研究顯示，增殖基因表達紊亂為膀胱癌核心進展機制，增殖基因高表達，抗增殖基因弱表達[6～7]。KPNA2 是核轉(zhuǎn)運蛋白，已有研究發(fā)現(xiàn)，其在卵巢癌、食管癌中呈異常表達狀態(tài)[8]。YAP 是下游轉(zhuǎn)錄因子，可能介導腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。HSG 主要調(diào)節(jié)線粒體融合過程，惡性細胞過度增殖會致能量大量消耗，線粒體持續(xù)代謝補充，因此，HSG 高表達屬惡性細胞活躍增殖關鍵證據(jù)。本研究結(jié)果顯示，膀胱癌組織KPNA2、YAP、HSG 的mRNA 高表達（P＜0.05），與上述機理基本相符。此外，與細胞增殖活性對應的是凋亡活性，當?shù)蛲龌钚越档蜁r，惡性細胞出現(xiàn)持續(xù)增殖及惡性轉(zhuǎn)變[9]。Bcl-2、Livin、Survivin 均為凋亡抑制因子，Caspase-3、Caspase-7 為凋亡行為主要執(zhí)行者，已有研究顯示，在結(jié)腸癌、前列腺癌中上述指標存在表達失衡情況[10]。本研究發(fā)現(xiàn)結(jié)果顯示，膀胱癌組織內(nèi)Livin、Bcl-2、Survivin 的mRNA表達高于癌旁組織，Caspase-3、Caspase-7 的mRNA低于癌旁組織，經(jīng)Pearson 分析，ZONAB mRNA 表達與增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 呈正相關，與Caspase-3、Caspase-7 的mRNA 呈負相關（P＜0.05），表明ZONAB 表達參與癌細胞增殖、凋亡。綜上所述，閉鎖小帶蛋白-1 相關性核酸結(jié)合蛋白表達與原發(fā)性膀胱癌癌細胞增殖、凋亡關系密切，可為臨床評估病情提供數(shù)據(jù)支持。