IL-35及Th2細(xì)胞因子水平與呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎的關(guān)系*

廖廷彥，劉 柳，王力勇

(湖北省棗陽市第一人民醫(yī)院兒科，湖北襄陽 441200)

毛細(xì)支氣管炎(以下簡稱毛支)為臨床常見的下呼吸道感染性疾病之一，其病原體主要為呼吸道合胞病毒(RSV)，約占50%，并以毛細(xì)支氣管、肺泡、肺間質(zhì)發(fā)生炎癥為病理基礎(chǔ)，致黏膜下充血，引起水腫。嬰幼兒因免疫力較差，成為該疾病主要發(fā)病群體，若患兒未得到有效治療，可引發(fā)哮喘，嚴(yán)重威脅生命安全[1-2]。根據(jù)分泌細(xì)胞因子不同，CD4+T細(xì)胞可分為Th1、Th2等亞群。據(jù)多數(shù)臨床研究顯示，RSV毛支患兒存在Th1/Th2失衡，其中Th2細(xì)胞因子主要包括白細(xì)胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13，但其具體機(jī)制仍存在爭議[3-4]。此外，IL-35作為新的抗炎/免疫抑制細(xì)胞因子，在細(xì)胞內(nèi)感染及炎癥過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用，并參與多種自身免疫病、腫瘤等疾病發(fā)生、發(fā)展[5]。目前關(guān)于IL-35在RSV毛支中研究甚少。本研究通過檢測患兒的IL-35、Th2細(xì)胞因子水平，并與體檢健康兒童作對照，探討各因子在疾病中作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年4月至2019年8月本院收治的RSV毛支患兒168例作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患兒經(jīng)診斷符合RSV毛支診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；(2)臨床多伴有咳嗽、發(fā)熱、哮鳴音、濕性啰音等癥狀；(3)近2周內(nèi)無服藥史；(4)患兒家屬知曉本研究并簽訂知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)非因RSV所致毛細(xì)支氣管炎患兒；(2)合并先天性心臟病、心律不齊等心血管疾病患兒；(3)免疫缺陷及凝血功能障礙患兒；(4)肝、腎等功能嚴(yán)重異常患兒；(5)精神疾病及臨床資料不完整患兒。觀察組男91例，女77例；年齡2～16個(gè)月，平均(6.83±1.04)個(gè)月。另選取體檢健康兒童157例作為對照組，男84例，女73例；年齡1～15個(gè)月，平均(6.67±1.32)個(gè)月。兩組受試兒童性別、年齡等基本資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2肺功能指標(biāo)檢測 應(yīng)用北京麥邦光電儀器有限公司MSA99肺功能儀檢測呼吸頻率(RR)、每千克體質(zhì)量功能殘氣量(FRC/kg)、到達(dá)潮氣呼氣峰流速時(shí)呼出的氣量/潮氣量(%V-PF)、潮氣呼氣中期流速/潮氣吸氣中期流速(ME/MI)、呼出75%潮氣量時(shí)的呼氣流速/潮氣呼氣峰流速(25/PF)等肺功能指標(biāo)。

1.3細(xì)胞因子檢測 觀察組于確診后第2天清晨(對照組于體檢當(dāng)日)空腹采取靜脈血3 mL，3 000 r/min離心10 min(離心半徑10 cm)，并取上清液置于-80 ℃冰箱保存待檢。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測IL-35水平，另檢測IL-4、IL-5、IL-13等Th2細(xì)胞因子水平。IL-35、IL-4、IL-5、IL-13試劑盒購自南京森貝伽生物科技有限公司，并嚴(yán)格按照試劑盒說明書檢測。采用美國BD公司FACS CantoⅡ流式細(xì)胞儀及配套試劑盒檢測CD4+T細(xì)胞亞群水平。

2 結(jié) 果

2.1兩組基本資料比較 觀察組RR、FRC/kg、CD4+高于對照組，%V-PF、ME/MI、25/PF低于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1、圖1。

表1 兩組基本資料比較

注：A、B分別為觀察組、對照組CD4+T細(xì)胞亞群流式細(xì)胞圖。

2.2兩組IL-35與Th2細(xì)胞因子水平比較 觀察組IL-35水平顯著低于對照組，而IL-4、IL-5、IL-13水平顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組IL-35與Th2細(xì)胞因子水平比較

2.3CD4+與Th2細(xì)胞因子水平相關(guān)性 CD4+與IL-4、IL-5、IL-13水平呈正相關(guān)(r=0.367，P=0.032；r=0.311，P=0.038；r=0.405，P=0.021)。見圖2。

2.4IL-35與Th2細(xì)胞因子水平相關(guān)性 IL-35水平與IL-4、IL-5、IL-13水平呈負(fù)相關(guān)(r=―0.432，P<0.05；r=―0.404，P=0.022；r=―0.399，P=0.029)。見圖3。

2.5影響RSV毛支發(fā)生因素的Logistic多元回歸分析 以RSV毛支是否發(fā)生為因變量(是=0，否=2)，以IL-35、IL-4、IL-5及IL-13水平為自變量進(jìn)行Logistic多元回歸分析(均為實(shí)際值賦值)。結(jié)果顯示IL-35、IL-4、IL-5、IL-13水平均為影響RSV毛支發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。見表3。

注：A、B、C分別為CD4+與IL-4、IL-5、IL-13的相關(guān)性。

注：A、B、C分別為IL-35與IL-4、IL-5、IL-13的相關(guān)性。

表3 影響RSV毛支發(fā)生因素的Logistic多元回歸分析

3 討 論

近年來RSV毛支發(fā)病率隨生活方式的改變、工業(yè)化進(jìn)程的加快呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重威脅患兒身心健康[7]。目前關(guān)于該疾病的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，多認(rèn)為與神經(jīng)免疫機(jī)制、免疫損害等因素有關(guān)。當(dāng)前對獲得性免疫相關(guān)因子的研究較多，機(jī)體受呼吸道合胞病毒感染后，可促使炎性細(xì)胞釋放炎性介質(zhì)，進(jìn)而加重患兒病情，引發(fā)哮喘，影響患兒預(yù)后效果[8-9]。對此，研究相應(yīng)免疫因子對臨床診斷、治療具有重要意義，便于觀察病情進(jìn)展?fàn)顩r，調(diào)整治療措施。

相關(guān)研究指出，IL-35是EB病毒誘導(dǎo)基因3蛋白與IL-12p35亞基所組成的異源二聚體，屬于IL-12細(xì)胞因子家族，參與體內(nèi)的免疫應(yīng)答過程，與腫瘤、糖尿病、膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[10-11]。因IL-35是由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)特異性分泌，而Treg作為機(jī)體內(nèi)一種具有免疫抑制功能、低反應(yīng)性的T細(xì)胞亞群，在維持腫瘤免疫、微生物感染、機(jī)體免疫平衡等方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)功能，所以IL-35可使T細(xì)胞增殖活化，產(chǎn)生細(xì)胞因子，對免疫系統(tǒng)、免疫反應(yīng)發(fā)揮負(fù)向抑制作用。同時(shí)，IL-35在變態(tài)反應(yīng)性疾病中也受到當(dāng)前臨床研究的關(guān)注，當(dāng)IL-35表達(dá)較低時(shí)，可參與過敏性哮喘、毛細(xì)支氣管炎等發(fā)生，相關(guān)研究指出IL-35可以產(chǎn)生長效的免疫抑制，有效降低機(jī)體過敏性炎性反應(yīng)的發(fā)生率，并且在疾病的控制與改善的過程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，推測其具有潛在治療價(jià)值[12-13]。

T細(xì)胞作為體內(nèi)起免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞成分之一，其中CD4+被抗原激活后所釋放的細(xì)胞因子在RSV毛支發(fā)病中具有重要意義，可分為Th0、Th1、Th2等亞群，Th0可在不同因素作用下向Th1或Th2細(xì)胞分化[14-15]。Th2細(xì)胞產(chǎn)生IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子，同時(shí)在多種因素作用下，Th1、Th2間相互調(diào)節(jié)并維持平衡，當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌、病毒感染，則可導(dǎo)致Th1/Th2兩者失衡[16-17]。既往研究顯示，Th1/Th2失衡是導(dǎo)致RSV毛支發(fā)生的主要機(jī)制之一，并且以Th2水平升高為主，主要表現(xiàn)為IL-4、IL-5等細(xì)胞因子分泌顯著增加[18]。拮抗IL-4致使B細(xì)胞合成免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白G4(IgG4)功能明顯減弱，并在Th0分化過程中起重要作用，因患兒機(jī)體內(nèi)IL-4分泌過多，IgE、IgG4數(shù)量也相應(yīng)增多，可大量釋放白三烯、組織胺等炎性介質(zhì)，引發(fā)氣道痙攣、阻塞。IL-5可促使淋巴母細(xì)胞分化為Th2淋巴細(xì)胞，從而形成氣道淋巴細(xì)胞浸潤，這在RSV毛支發(fā)病進(jìn)展中起重要作用[19]。IL-13經(jīng)研究證實(shí)在哮喘炎癥過程中發(fā)揮主導(dǎo)作用，可促進(jìn)IgE合成，屬于Th2細(xì)胞源性最具有代表性細(xì)胞因子，與疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)[20]。

對患兒肺功能主要指標(biāo)進(jìn)行檢測，觀察組RR、FRC/kg、CD4+顯著高于對照組，%V-PF、ME/MI、25/PF顯著低于對照組，表明患兒氣道功能發(fā)生異常。因氣道阻塞導(dǎo)致通氣、換氣功能發(fā)生障礙，并且因分泌物增多，炎性改變降低氣道順應(yīng)性，增加阻力，各指標(biāo)均可作為觀察病情變化的敏感指標(biāo)。對IL-35、Th2細(xì)胞因子進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示觀察組IL-35水平顯著低于對照組，而IL-4、IL-5、IL-13水平顯著高于對照組，表明RSV感染可使Th2細(xì)胞因子釋放及表達(dá)明顯增多。因IL-35不僅可影響多個(gè)T細(xì)胞亞群分化，還可通過巨噬細(xì)胞有效抑制促炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)物，也是機(jī)體中一種重要保護(hù)性因子，因此，在臨床中可作為評估RSV毛支控制水平的參考指標(biāo)之一。但患兒IL-35水平明顯下降，IL-4、IL-5、IL-13等因子大量釋放，從而使Th2細(xì)胞因子呈升高狀態(tài)，其中IL-4作為Th2細(xì)胞產(chǎn)生的特征性細(xì)胞因子，促進(jìn)體液免疫應(yīng)答，并致使IgE產(chǎn)生，最終引發(fā)患兒反復(fù)喘息。IL-5能夠使嗜酸性粒細(xì)胞水平增加。此外，IL-13水平增高可導(dǎo)致該疾病反復(fù)發(fā)作，對Th2細(xì)胞因子進(jìn)行檢測，便于為患兒提供有效治療，預(yù)防喘息反復(fù)發(fā)作。本研究結(jié)果顯示，CD4+與IL-4、IL-5、IL-13水平呈正相關(guān)，因T細(xì)胞是機(jī)體與抗原唯一直接發(fā)生反應(yīng)的細(xì)胞，結(jié)果表明患兒體內(nèi)T抑制細(xì)胞功能不足，尤其是CD4+水平明顯升高，其在一定程度上也反映Th2細(xì)胞因子水平發(fā)生相應(yīng)變化，臨床治療需兼顧抗病毒與調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，從而積極預(yù)防哮喘發(fā)生。本研究還顯示，IL-35水平與IL-4、IL-5、IL-13水平呈負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步表明IL-35是Treg發(fā)揮免疫負(fù)調(diào)控的主要細(xì)胞因子之一，兩者之間存在一定聯(lián)系，但其具體機(jī)制仍需深入探究。此外，IL-35、IL-4、IL-5、IL-13水平均為影響RSV毛支發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，因此，臨床對IL-35、Th2細(xì)胞因子進(jìn)一步研究，可有望成為治療RSV毛支的靶點(diǎn)。但本研究所選取的樣本數(shù)量偏少，后期研究可在擴(kuò)大樣本數(shù)量基礎(chǔ)上對IL-35的作用機(jī)制進(jìn)一步研究，提高臨床研究準(zhǔn)確性。

4 結(jié) 論

RSV毛支患兒IL-35水平下降，Th2細(xì)胞受病毒感染后，可明顯增加IL-4、IL-5、IL-13等分泌，且IL-35水平與IL-4、IL-5、IL-13水平呈負(fù)相關(guān)，從而為臨床治療RSV毛支提供了新思路，可通過應(yīng)用Th1/Th2平衡調(diào)節(jié)劑治療以改善患兒氣道炎癥，并預(yù)防向哮喘方向轉(zhuǎn)變。