莢膜多糖抗原檢測在不同免疫狀態(tài)肺隱球菌病患者中的敏感性差異

江西省贛州市人民醫(yī)院（341000）張麗琴 鄒堅 徐玉輝 劉聰 劉婷 鄒淑慧

隱球菌廣泛分布于自然界，是條件致病性真菌之一[1]。該菌主要侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，可播散至肺、皮膚黏膜、關節(jié)和其他臟器。由它引起的肺隱球菌?。╬ulmonary cryptococcosis, PC）是一種急性、亞急性或慢性深部真菌病，PC的臨床及影像學表現(xiàn)均無特異性，易漏診、誤診、延誤治療[2]。國外非免疫抑制人群PC發(fā)病率<1/10萬，而國內(nèi)PC患者89.2%無免疫功能低下[3]。莢膜多糖抗原是隱球菌感染人體后分泌的物質(zhì)，能早期診斷PC，但它在免疫抑制和非免疫抑制PC患者中敏感性差異的相關報道較少[4]。為探究不同免疫狀態(tài)下莢膜多糖抗原的檢測水平，現(xiàn)以感染PC30例患者為研究對象，對比兩組患者的實驗室檢查結果、病理學檢查結果、莢膜多糖抗原檢測結果，以及檢測方法的靈敏性、準確性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究選取2017年1月～2019年12月感染PC患者30例，患者平均年齡為（55.70±11.92）歲。30例患者依據(jù)不同免疫狀態(tài)分為免疫抑制組12例和非免疫抑制組18例。患有AIDS、器官移植術后、長期使用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制藥物的PC患者納入免疫抑制組，無以上疾病和未接受上述治療的患者納入非免疫抑制組。比較兩組患者的年齡、性別等一般資料，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。本研究已告知患者及家屬，已簽署知情同意書，本研究已獲得醫(yī)院倫理委員會的認可與批準。

1.2 方法 采集患者全血進行血常規(guī)檢查。采集患者肺部組織置于福爾馬林中備用，進行病理學檢查。

采集患者空腹肘靜脈血約3mL，1600g離心10min取血清，血清標本保存于-80℃冰箱備用[5]。ELISA檢測方法配制工作洗滌液；取待測血清標本、標準曲線組樣本各300μL，分別加入100μL樣本處理液混勻，放入水浴鍋100℃加熱3 m i n后，4℃，10000g離心10min；分別取60μL加入混合板孔,再加入酶標抗體60μL混合，封板，37℃下孵育30min；然后每孔轉(zhuǎn)移100μL至酶標板孔，設空白對照孔，加入樣本稀釋液100μL，封板，37℃下孵育30min；揭開封板膜，洗滌酶標板，每孔每次加入不少于300μL的洗液，一共洗滌5次，再每孔加底物溶液100μL，37℃避光孵育15min后每孔加50μL終止液，加樣順序與加底物順序相同，混勻后在450nm處讀吸光度(A)值[6]。

1.3 觀察指標 對比兩組患者實驗室檢查結果、病理學檢查結果、血清CrAg水平并比較兩組檢測結果的靈敏性、準確性。

1.4 統(tǒng)計學方法 研究結果采用SPSS20.0分析數(shù)據(jù)，對統(tǒng)計結果進行χ2檢驗，記錄χ2值和P值，P<0.05為結果具有統(tǒng)計學差異。

2 結果

2.1 實驗室檢查 兩組間白細胞計數(shù)、紅細胞沉降率和C反應蛋白水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。免疫抑制組CD3+CD4+T淋巴細胞數(shù)顯著低于非免疫抑制組（P<0.05）。見附表1。

2.2 病理學檢查結果 本研究中兩組患者病理類型的構成比差異無統(tǒng)計學意義，見附表2。

2.3 血清CrAg的ELISA檢測結果 經(jīng)檢測，免疫抑制組CrAg水平在3.2μg/L以上者11例，占比91.67%，非免疫抑制組CrAg水平在3.2μg/L以上者占比88.89%，兩組對比無顯著性差異（P>0.05），見附表3。

附表1 實驗室檢查結果

附表2 病理檢查結果

附表3 兩組ELISA檢測結果比較（例,%）

2.4 莢膜多糖抗原檢測肺隱球菌病患者的準確性情況 研究表明，莢膜多糖抗原檢測肺隱球菌病患者靈敏性為92.59%（25/27），準確性為83.33%（25/30）。

3 討論

PC是一種少見的由新型隱球菌感染引起的一種急性或亞急性肺部真菌病。臨床資料記載，1998～2007年我國肺真菌感染患者中PC的發(fā)病率已上升至15%[7]，成為影響人類肺部功能的常見致病真菌之一。在免疫抑制患者中PC更為常見，此類患者因感染人類免疫缺陷病毒、患有惡性腫瘤、進行器官移植等原因長期服用抗生素類藥物或化學藥物，導致機體免疫水平異常，免疫功能減弱，感染的可能上升至10%[8]。PC的臨床表現(xiàn)無特異性，大部分患者無明顯癥狀，少數(shù)患者可能出現(xiàn)發(fā)熱、頭痛等全身性癥狀，因PC感染后不會產(chǎn)生毒素，不會破壞肺組織，炎性浸潤較輕。PC的臨床檢查有賴于開胸手術獲取的肺組織病理，標本較難獲取，也易造成患者的有創(chuàng)性，而莢膜多糖抗原檢測的臨床標本為血清、肺泡灌洗液，標本易得，敏感性與特異性較高。為探究不同免疫狀態(tài)下莢膜多糖抗原的檢測水平，結果表明，兩組間白細胞計數(shù)、紅細胞沉降率和C反應蛋白水平比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。免疫抑制組CD3+CD4+T淋巴細胞數(shù)顯著低于非免疫抑制組（P<0.05）；兩組患者病理類型的構成比無顯著性差異；免疫抑制組CrAg水平在3.2μg/L以上者11例，占比91.67%，非免疫抑制組CrAg水平在3.2μg/L以上者占比88.89%，兩組對比無顯著性差異（P>0.05），莢膜多糖抗原檢測肺隱球菌病患者靈敏性為92.59%，準確性為83.33%。

綜上所述，免疫抑制患者并發(fā)PC時實驗室檢查與非免疫抑制患者相比差異不明顯，病理組織學改變中黏液膠樣型多于非免疫抑制患者，免疫抑制PC患者的CrAg水平與非免疫抑制PC患者間無顯著性差異，該診斷方法靈敏度高、準確度高，可早期進行輔助診斷，減少了PC的漏診、誤診及治療時機的延誤，提高了患者的生存率。