揚(yáng)州鵝關(guān)節(jié)痛風(fēng)病例的診斷及病原鑒定

岳 穩(wěn) 張 瑞 黃 瑜 傅光華＊

(1.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013；2.龍巖學(xué)院 福建龍巖 364012)

痛風(fēng)（Gout）是由于家禽體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝障礙造成血液中尿酸增多，最終形成高尿酸血癥，蓄積的尿酸以鈉鹽形式在內(nèi)臟、關(guān)節(jié)、軟組織、軟骨、系膜等處沉積下來， 在臟器表面或關(guān)節(jié)腔形成石灰樣白色塵屑狀物質(zhì)，該病主要見于雞、火雞、水禽和鴿[1]。 家禽痛風(fēng)發(fā)生的原因尚不完全清楚，臨床上，當(dāng)飼料中核蛋白和嘌呤堿的蛋白質(zhì)含量， 日糧中鈣、 鎂含量過高，或長期缺乏維生素A 等，或重金屬、化學(xué)毒物、霉菌毒素、藥物濫用等因素引起的腎臟功能損傷等，均可誘發(fā)家禽發(fā)生痛風(fēng)。 另外，一些病原微生物，如沙門氏菌等感染引起腎臟機(jī)能損傷， 造成尿酸鹽排泄受阻，也可引起痛風(fēng)。 2017 年以來，我國江蘇、山東、安徽、河南及廣東等地雛鵝群陸續(xù)發(fā)生高度致死性痛風(fēng)，該病可感染3 日齡以內(nèi)不同品種的雛鵝，以內(nèi)臟、胸腿部肌肉及關(guān)節(jié)沉積大量尿酸鹽為特征，感染鵝群病死率10%～40%，給養(yǎng)鵝業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2-5]。

2019 年 5 月， 江蘇省揚(yáng)州市某鵝場飼養(yǎng)的1 000 羽20 日齡揚(yáng)州大三花鵝發(fā)病，發(fā)病雛鵝出現(xiàn)精神沉郁、食欲減退、腿腳癱軟、運動遲緩、喜臥。 隨著病程持續(xù)，雛鵝出現(xiàn)頻繁腹瀉，糞便呈水樣白色或黃綠色稀糞，體況消瘦。在出現(xiàn)臨床癥狀1～2 d 后即死亡，每天最多死亡達(dá)30 羽，在發(fā)病7 d 內(nèi)累計死亡超過17%。 經(jīng)臨床診斷和實驗室病原檢測，確診為鵝星狀病毒感染， 并對樣品進(jìn)行了病原分離鑒定，為預(yù)防和控制該病的流行提供參考依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 臨床診斷

2019 年5 月，福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所接診一例來自江蘇省揚(yáng)州市某鵝場送檢的揚(yáng)州大三花鵝病例，應(yīng)養(yǎng)殖戶要求，對該病例進(jìn)行實驗室確診。 病死鵝整體消瘦、羽毛稀疏，臨床剖檢可見雛鵝肝臟、腎臟腫大出血，腸壁稀薄，內(nèi)含水樣糞便。雛鵝雙側(cè)關(guān)節(jié)明顯腫脹， 關(guān)節(jié)囊內(nèi)可見白色黏稠的尿酸鹽沉著，滑液含有大量由尿酸和尿酸鈣形成的結(jié)晶，關(guān)節(jié)面及關(guān)節(jié)軟骨組織出現(xiàn)輕微潰爛、 壞死 （見圖1-圖 2）。

圖1 病死雛鵝臨床癥狀

2 實驗室病原微生物檢測

圖2 關(guān)節(jié)囊內(nèi)出現(xiàn)尿酸鹽沉積

2.1 臨床樣品的處理 無菌采集發(fā)病雛鵝的肝臟和腎臟， 一部分用于細(xì)菌分離鑒定， 另一部分采組織加入含抗生素 （青霉素 1 000 IU/mL、 鏈霉素1 000 ug/mL）的PBS 緩沖液，研磨、制備成20%混懸液用于病毒檢測。

2.2 臨床樣品的細(xì)菌分離及病毒 （RT-）PCR 檢測將采集的病死鵝組織樣品， 分別取樣劃線接種血瓊脂平板，進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。以病毒DNA/RNA 抽提試劑盒，按照產(chǎn)品說明書提取樣品中的核酸，分別進(jìn)行禽流感病毒、小鵝瘟病毒、鵝禽1 型副黏病毒、鵝星狀病毒和鵝圓環(huán)病毒等檢測。 核酸檢測擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳。

結(jié)果表明，采集的樣品細(xì)菌分離陰性，病毒核酸檢測僅鵝星狀病毒呈陽性，其余病原均呈陰性（見圖3）。擴(kuò)增片段送生物試劑公司進(jìn)行序列測序，測序結(jié)果表明獲得的擴(kuò)增片段序列與GenBank 數(shù)據(jù)庫中的SDPY 株及JSHA 株等鵝星狀病毒分離株核苷酸序列同源性均在99.5%以上。

圖3 樣品核酸擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

3 病毒的分離鑒定

將制備的組織混懸液離心，取上清，經(jīng)尿囊膜途徑接種5 枚10 日齡鵝胚，每枚接種0.2 mL。 之后于37 ℃恒溫培養(yǎng)，連續(xù)觀察7 d。無菌收集致死鵝胚尿囊液，并以鴨胚連續(xù)傳代3 次，對所收集尿囊液測定血凝活性并再次檢測。 結(jié)果顯示，鵝胚接種后60 h，第1 代即出現(xiàn)死亡，尿囊液不能凝集雞紅細(xì)胞、鴨紅細(xì)胞和鵝紅細(xì)胞，RT-PCR 檢測結(jié)果顯示，收獲的鵝胚尿囊液僅鵝星狀病毒檢測陽性。

4 討 論

2017 年以來，我國部分地區(qū)飼養(yǎng)的雛鵝陸續(xù)大范圍出現(xiàn)痛風(fēng)病例。 各品種鵝（如長樂灰鵝、揚(yáng)州白鵝、朗德鵝、皖西白鵝等）均有發(fā)生[2-3]。 發(fā)生日齡見于30 日齡內(nèi)，其中5～20 日齡雛鵝多發(fā)。 一年四季均可發(fā)生，以冬春季節(jié)多發(fā)，病死率在10%～40%，最高可達(dá)60%[2-4]。 雛鵝多表現(xiàn)為運動遲緩、厭食、衰弱和腹瀉，部分雛鵝出現(xiàn)跛行，腿、翅關(guān)節(jié)明顯腫脹。剖檢病死鵝在肝臟、心臟、脾臟、腎臟及輸尿管等內(nèi)臟，腸系膜及氣囊等處可見不同程度的尿酸鹽沉積，關(guān)節(jié)腫脹的病例則可見關(guān)節(jié)囊、 關(guān)節(jié)軟骨處有石灰樣白色粉樣物質(zhì)覆蓋[4-5]，經(jīng)實驗室病原學(xué)檢查及動物回歸試驗證實，該病是由鵝星狀病毒感染引起，這與家禽食用大量高蛋白飼料或磺胺類藥物過量使用等引發(fā)的痛風(fēng)病例十分類似[6]。 目前，鵝星狀病毒感染引起的雛鵝痛風(fēng)的發(fā)病機(jī)制尚不清楚， 鑒于該病的廣泛流行態(tài)勢和嚴(yán)重危害性， 需要深入開展病原致病機(jī)制研究，為該病的有效防控提供技術(shù)支撐。

目前該病尚無特別有效的治療方法。 在飼養(yǎng)管理上要注意控制富含核蛋白和嘌呤堿的動物性飼料飼喂量，給予充足的飲水，供給富含維生素A 或胡蘿卜素的飼料。 不要長期或過量使用對腎功能影響大的抗細(xì)菌藥物等。臨床發(fā)病時，可針對具體情況采取切實可行的措施，往往可收到良好的效果。鵝群出現(xiàn)痛風(fēng)時，可在飲水中添加腎腫解毒藥物，飲水3～5 d，能緩解癥狀，同時添加5%葡萄糖會對治療效果起到良好的促進(jìn)作用。