實(shí)時(shí)熒光定量PCR在食品致病菌檢測(cè)中的應(yīng)用

古麗米娜

（新疆塔城地區(qū)疾病預(yù)防控制中心，新疆 塔城 834700）

傳統(tǒng)的檢測(cè)方法通常需要培養(yǎng)病原體才能開始檢測(cè)。且比較昂貴，緩慢且效率低下，并且難以滿足現(xiàn)代食品安全測(cè)試的要求。PCR技術(shù)檢測(cè)方法能夠快速，準(zhǔn)確地發(fā)現(xiàn)各種致病菌，具有快速、準(zhǔn)確、靈活、有效的優(yōu)點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于食品致病菌檢測(cè)領(lǐng)域。

1 基本資料

1.1 PCR技術(shù)簡(jiǎn)介 PCR技術(shù)是美國(guó)科學(xué)家于1985年創(chuàng)建的一種體外酶促合成技術(shù)，用于快速生長(zhǎng)特定的DNA片段。與通過培養(yǎng)皿檢測(cè)微生物的傳統(tǒng)方法相比，可以快速檢測(cè)特定的微生物。PCR技術(shù)的最大優(yōu)勢(shì)是能夠快速發(fā)現(xiàn)不同種類的微生物，并且具有快速而靈活的特應(yīng)性優(yōu)勢(shì)。因此，PCR技術(shù)在各種致病菌檢測(cè)中起著越來越重要的作用[1]。食源性致病菌的檢測(cè)是PCR技術(shù)在食品安全性測(cè)試中的重點(diǎn)。盡管PCR技術(shù)在該領(lǐng)域使用的時(shí)間較短，但近年來已逐漸得到推廣，進(jìn)展非常迅速?，F(xiàn)在利用這一技術(shù)可以檢測(cè)到大多數(shù)致病菌。傳統(tǒng)的細(xì)菌分離培養(yǎng)方法在檢測(cè)病原細(xì)菌方面效率較低，準(zhǔn)確性較低，而PCR技術(shù)很好彌補(bǔ)了這些缺點(diǎn)?，F(xiàn)在，PCR技術(shù)已經(jīng)成為檢測(cè)食源性致病菌的最重要方法。經(jīng)過相應(yīng)的開發(fā)之后，可以生產(chǎn)14-16種食源性致病菌PCR檢測(cè)試劑盒。

1.2 技術(shù)優(yōu)勢(shì) 傳統(tǒng)的檢測(cè)方法需要培養(yǎng)各種致病菌。該過程需要大量的人力和物力，操作非常繁瑣，并且各種微生物的生長(zhǎng)環(huán)境所需的pH，溫度和營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基都不相同。在檢測(cè)過程中，需要花費(fèi)幾天的培養(yǎng)時(shí)間，在鑒定過程中必須仔細(xì)觀察細(xì)胞特征和革蘭氏染色，并鑒定其生物學(xué)特征。而區(qū)分每種微生物是一個(gè)困難的過程，尤其是對(duì)于不穩(wěn)定的菌株而言，更難以發(fā)現(xiàn)。因此，與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比，PCR技術(shù)具有以下2個(gè)優(yōu)點(diǎn)。

1.2.1 方便 與傳統(tǒng)方法相比，PCR技術(shù)中使用的設(shè)施和設(shè)備操作更簡(jiǎn)單，整個(gè)過程更加便捷。

1.2.2 快速 傳統(tǒng)的檢測(cè)方法需要培養(yǎng)數(shù)天的樣品，導(dǎo)致效率較為低下。PCR技術(shù)可以快速產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果，可以更好地應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)。

1.3 方法 分析實(shí)時(shí)熒光定量PCR在常見食品致病菌的檢測(cè)效果。

2 結(jié)果

2.1 在金黃色葡萄球菌檢測(cè)中的應(yīng)用 該致病菌突變后，就會(huì)很難去除相對(duì)較大的金黃色葡萄球菌。在大多數(shù)情況下，普通農(nóng)藥殘留很難完全清除。如果使用過量的農(nóng)藥，將存在農(nóng)藥殘留，直接影響人類的身體健康。因此有必要仔細(xì)檢查水果和蔬菜中的金黃色葡萄球菌，以有效去除金黃色葡萄球菌的存在。金黃色葡萄球菌可以在水果和蔬菜中繁殖，并產(chǎn)生對(duì)人體有害的SE型毒素。這種毒素在進(jìn)食時(shí)會(huì)引起直接食物中毒，PCR可用于明確檢測(cè)這一致病菌。在大多數(shù)情況下，通過PCR技術(shù)都能準(zhǔn)確檢測(cè)出金黃色葡萄球菌的實(shí)際含量，可檢測(cè)出±1 pg的金黃色葡萄球菌，保證了總體檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，符合實(shí)際情況[2]。

2.2 在綠膿桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用 在我們目前食用的食物中，還有著綠膿桿菌這一種對(duì)人體極為有害的微生物。食物中綠膿桿菌的長(zhǎng)期存在會(huì)對(duì)人體造成極大傷害。PCR技術(shù)可用于擴(kuò)增食品和藥品的基因序列，并可快速檢測(cè)食品中是否含有綠膿桿菌。同時(shí)，這一技術(shù)還可以通過檢測(cè)食品中的毒素基因來確定其是否存在綠膿桿菌。一旦產(chǎn)生了毒素，毒素A基因就是綠膿桿菌獨(dú)特的基因，并且可以通過該基因進(jìn)行有效判斷。無論食物中是否含有綠膿桿菌，該方法都大大改善了對(duì)食物中是否含有綠膿桿菌的檢查準(zhǔn)確性。

2.3 在大腸桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用 大腸桿菌是食物中最常見的微生物之一，也是最知名的微生物之一。但是這種微生物對(duì)人體非常有害。如果使用傳統(tǒng)的食品檢測(cè)方法，則難以準(zhǔn)確地檢測(cè)食品中所含大腸桿菌的準(zhǔn)確值。需要意識(shí)到大腸桿菌和其他微生物是不同的，并且繁殖能力非常快。一旦未準(zhǔn)確檢測(cè)出大腸桿菌的值，則在一段時(shí)間后，大腸桿菌的值將呈指數(shù)增長(zhǎng)。通過PCR技術(shù)，可以對(duì)食品中的大腸桿菌進(jìn)行多重篩選，并且發(fā)現(xiàn)了毒素的序列基因。從而迅速發(fā)現(xiàn)大腸桿菌的基因序列，以確保通過PCR技術(shù)獲得的大腸桿菌值是最準(zhǔn)確的。

2.4 在沙氏門菌檢測(cè)中的應(yīng)用 在大多數(shù)情況下，沙門氏菌含量過多會(huì)導(dǎo)致腸道感染，而沙門氏菌感染如果不接受及時(shí)治療就會(huì)危及生命。傳統(tǒng)的食品檢測(cè)技術(shù)很難快速檢測(cè)食品中存在的外源DNA。然而PCR技術(shù)的使用則有所不同，PCR技術(shù)自身的靈敏度相對(duì)較高，可以快速檢測(cè)出各種食品中可能存在的沙門氏菌，減少了因檢測(cè)失誤引起錯(cuò)誤。但是，還應(yīng)該注意的是，使用PCR檢測(cè)技術(shù)時(shí)仍然存在錯(cuò)誤的可能性。為此，沙門氏菌的檢測(cè)還需要進(jìn)一步的優(yōu)化和改進(jìn)，以確保PCR技術(shù)能夠真正精準(zhǔn)檢測(cè)沙門氏菌的數(shù)量，確保人們的生命安全。

3 結(jié)束語

綜上所述，實(shí)時(shí)熒光定量PCR在檢測(cè)食物致病菌的應(yīng)用中有著非常優(yōu)秀的效果，對(duì)于常見的沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌等多種致病菌都有著較為有效地檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)在疾病防控的實(shí)踐中推廣并進(jìn)一步發(fā)展這一檢測(cè)方法。