散養(yǎng)豬口蹄疫、豬瘟分類分段免疫抗體檢測試驗

姜玉芳，宣小龍，田曉霞

（1.寧夏回族自治區(qū)隆德縣城關(guān)畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏 隆德 756300；2.寧夏回族自治區(qū)隆德縣動物疾病預(yù)防控制中心，寧夏 隆德 756300；3.寧夏回族自治區(qū)隆德縣張程畜牧獸醫(yī)工作站，寧夏 隆德 756300）

近年來，國家規(guī)定散養(yǎng)戶豬強制免疫重大動物疫病的種類主要有豬瘟、口蹄疫、高致病性豬藍耳病三種[1]，高致病性豬藍耳病已于2017年退出強制免疫接種計劃。豬瘟、豬口蹄疫（O型口蹄疫，A型口蹄疫）仍然實施國家強制免疫項目。豬瘟（classical swine fever，CSF）是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、發(fā)熱、接觸性傳染病，具有高度傳染性和致死性，本病在自然條件下只感染豬，不同年齡、性別、品種的豬和野豬都易感，一年四季均可發(fā)生?？谔阋撸╢oot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄動物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄獸，偶見于人和其他動物。其臨診特征為口腔黏膜、蹄部和乳房皮膚發(fā)生水皰。兩種疫病是威脅我國養(yǎng)豬業(yè)的主要疫病，接種疫苗是目前控制疫病的主要措施。規(guī)模養(yǎng)殖場的豬實行程序化免疫接種，免疫抗體水平一直維持在80%以上，散養(yǎng)戶的豬以春秋兩季集中免疫加平時加強免疫相結(jié)合的方式免疫接種，免疫抗體水平不太理想，易出現(xiàn)抗體水平不達標甚至為0。為提高免疫抗體水平，本試驗采取分類分段免疫方法[2]，分類即在同步免疫接種時，對豬口蹄疫O型疫苗、A型疫苗、豬瘟疫苗分別注射在豬的肩頸、臀部等不同部位，避免在同一部位免疫接種；分段就是免疫接種一種或兩種疫苗后間隔一定時間再進行另外一種或兩種疫苗的免疫接種。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

散養(yǎng)豬，對豬的品種、年齡、體重、飼養(yǎng)環(huán)境、生物安全管理水平進行統(tǒng)計并劃分，日齡在 80 d以下初次免疫的豬做母源抗體檢測，并做好記錄。分類免疫試驗選擇相同品種、年齡、體重、飼養(yǎng)環(huán)境的散養(yǎng)豬400頭；分段免疫試驗選擇母源抗體相同的80 d以下未免疫的散養(yǎng)豬90頭。

1.2 疫苗

豬瘟耐熱保護劑活疫苗（細胞源），國藥集團揚州威客生物工程有限公司生產(chǎn)，批號0418001，用量為1頭份/頭。O型口蹄疫疫苗，楊凌金海生物技術(shù)有限公司，批號JH170102，用量為2 ml/頭。A型口蹄疫疫苗，中農(nóng)威特生物科技股份有限公司，批號C170802J，用量為1 ml/頭。

1.3 試劑

豬瘟病毒抗體ELISA試劑盒(哈爾濱元亨生物藥業(yè)有限公司，規(guī)格96頭份)；改進型口蹄疫病毒O型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，規(guī)格50～100份血清樣品）；改進型口蹄疫病毒A型液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，規(guī)格50～100份血清樣品）。

1.4 試驗方案及影響因素設(shè)計

按照散養(yǎng)戶豬重大動物疫病強制免疫要求，制定分類分段6個試驗因素12個試驗。

分類試驗即對豬瘟、口蹄疫實行分類接種（豬瘟、O型口蹄疫、A型口蹄疫3個試驗因素），間隔一定時間（5～7 d）進行疫苗的免疫接種，分3個試驗（見表1）。A組試驗數(shù)量120頭，同一接種部位同時免疫豬瘟、O型口蹄疫、A型口蹄疫三種疫苗；B組試驗數(shù)量130頭，第一次免疫口蹄疫疫苗（分別接種不同部位），間隔5～7 d后第二次免疫豬瘟疫苗；C組試驗數(shù)量150頭，第一次免疫豬瘟疫苗，間隔5～7 d后第二次免疫口蹄疫疫苗（分別接種不同部位）。連續(xù)7 d測體溫，觀察有無精神萎靡、皮膚發(fā)紅、嘔吐、呼吸急促、食欲減退、死亡等免疫副反應(yīng)，記錄數(shù)量。

分段試驗是根據(jù)抗體產(chǎn)生曲線時間變化，在分類免疫基礎(chǔ)上，再經(jīng)過一定時間采取加強免疫（10～20 d、20～30 d、30～40 d3個試驗因素），以此來提高所有免疫項目的抗體水平，分9個試驗（見表2）。第一組試驗在分段免疫后間隔10～20 d加強免疫豬瘟及O、A型口蹄疫疫苗，第二組試驗在分段免疫后間隔20～30 d加強免疫豬瘟及O、A型口蹄疫疫苗，第三組試驗在分段免疫后間隔30～40 d加強免疫豬瘟及O、A型口蹄疫疫苗；第四組試驗在分段免疫后間隔10～20 d加強免疫豬O、A型口蹄疫疫苗，第五組試驗在分段免疫后間隔20～30 d加強免疫豬O、A型口蹄疫疫苗，第六組試驗在分段免疫后間隔30～40 d加強免疫豬O、A型口蹄疫疫苗；第七組試驗在分段免疫后間隔10～20 d加強免疫豬瘟疫苗，第八組試驗在分段免疫后間隔20～30 d加強免疫豬瘟疫苗，第九組試驗在分段免疫后間隔30～40 d加強免疫豬瘟疫苗。每組10頭，分別于分段免疫接種前，分段免疫后進行采血，實驗室檢測抗體水平。

表1 散養(yǎng)豬分類免疫試驗方案

表2 分段因素試驗檢測

表3 不同試驗組免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

1.5 免疫

所有免疫按照春秋兩季重大動物疫病集中免疫執(zhí)行，免疫劑量：按照疫苗規(guī)定計量注射，對照組進行生理鹽水注射。免疫方式按照《口蹄疫免疫接種技術(shù)規(guī)范》NYT 1955-2010中對疫苗的使用要求和日常防疫員實際行為開展免疫，免疫方式均為皮下注射。

1.6 采血

按照抗體監(jiān)測采血要求和前面試驗設(shè)計要求進行監(jiān)測采血，并做好記錄

1.7 檢測方法

采用《中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標準 豬瘟診斷技術(shù)》GB/T 16551-2008、《中華人民共和國國家標準 口蹄疫診斷技術(shù)》GB/T 18935-2003進行檢測和結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 不同試驗組免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

對表3數(shù)據(jù)進行整理后，采用SPASS19.0統(tǒng)計軟件進行卡方分析得出，A、B、C三組相比較，A組出現(xiàn)免疫副反應(yīng)總數(shù)達18例，免疫副反應(yīng)15%；B組免疫副反應(yīng)總數(shù)9例，免疫副反應(yīng)6.9%；C組免疫副反應(yīng)11例，免疫副反應(yīng)7.3%。A、B、C三組相比，B組與C組差異不顯著，B組、C組與A組差異顯著，說明分類免疫副反應(yīng)低的為B組和C組，所以，在重大動物疫病免疫接種過程中，可采用B組或C組方案進行免疫接種。

2.2 不同組免疫抗體合格率試驗驗證結(jié)果

對表4數(shù)據(jù)整理后，采用SPASS19.0統(tǒng)計軟件進行T檢驗，分析得出CSF分段之前與分段之后九組數(shù)據(jù)差異不顯著，也就是說，CSF進行免疫接種，只要保證首免科學(xué)、規(guī)范、到位，再間隔10～20 d、20～30 d、30～40 d，注射部位在肩頸部或臀部，實驗室免疫抗體水平均保持在80%以上，抗體水平合格率均達到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部規(guī)定標準以上。

FMD分段之前與分段之后前六組數(shù)據(jù)差異極顯著。第一組A-FMD免疫抗體合格率76.2%（分段前）80.1%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率74.5%（分段前）79.6%（分段后）。第二組A-FMD免疫抗體合格率76.3%（分段前）85.6%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率76.0%（分段前）84.9%（分段后）。第三組A-FMD免疫抗體合格率75.9%（分段前）80.2%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率76.8%（分段前）81.2%（分段后）。第四組A-FMD免疫抗體合格率73.6%（分段前）83.3%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率77.0%（分段前）82.3%（分段后）。第五組A-FMD免疫抗體合格率74.8%（分段前）88.7%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率77.2%（分段前）88.1%（分段后）。第六組A-FMD免疫抗體合格率78.3%（分段前）83.1%（分段后）；O-FMD免疫抗體合格率76.9%（分段前）82.5%（分段后）?？ǚ綑z驗得出FMD分段之后第七、八、九組免疫抗體合格率與前六組結(jié)果差異極顯著，從表4可以看出，9組數(shù)據(jù)免疫抗體合格率均達到70%以上，符合國家規(guī)定標準，尤其是第七組、第八組、第九組A-FMD免疫抗體合格率、O-FMD免疫抗體合格率與前六組相比較，前六組均高于73%，第二組（免疫間隔20d～30 d）、第四組（免疫間隔10～20 d）FMD免疫抗體合格率與其他第一組、第三組、第五組、第六組結(jié)果差異顯著。

通過實驗室檢測免疫間隔10～20 d、20～30 d、30～40 d免疫不同疫苗時動物血清的抗體水平得出CFS免疫抗體合格率與分段因素無關(guān)，F(xiàn)MD免疫抗體合格率在分段20～30 d間隔時最佳，即采用第二組方案最佳。

表4 不同試驗組不同間隔時間免疫抗體合格率（為均數(shù)）

3 試驗結(jié)論及展望

3.1 試驗結(jié)論

通過分類分段試驗及研究結(jié)果顯示，散養(yǎng)戶豬分類免疫的確可以降低免疫副反應(yīng)造成的損失，尤其對豬口蹄疫（O、A）與豬瘟疫苗間隔5～7 d進行免疫注射，副反應(yīng)最小，均低于7.3%；從表4數(shù)據(jù)分析得出，分段免疫過程中，豬瘟分段免疫差異不顯著，所以豬瘟在首次免疫中做好免疫注射就能達到預(yù)期目標。但是口蹄疫必須進行加強免疫，免疫間隔時間最佳方案為間隔20～30 d時再次免疫口蹄疫疫苗，方能達到最佳效果。

3.2 展望

影響免疫抗體水平因素雜多，既有主觀因素，又有客觀因素。主觀因素比如每個防疫技術(shù)人員操作技能、免疫注射消毒、疫苗保存運輸，是否按照劑量要求操作和按照疫苗使用說明書操作等等?？陀^因素包括畜禽個體差異，飼養(yǎng)環(huán)境、應(yīng)激、科學(xué)飼喂，疫苗生產(chǎn)廠家等等。但從多年的重大動物疫病免疫接種副反應(yīng)統(tǒng)計匯總及此次試驗結(jié)果可以看出，同時進行豬瘟、口蹄疫免疫接種，副反應(yīng)很大，不食、發(fā)燒、死亡、流產(chǎn)等比較嚴重，進行分類免疫可以大大降低免疫副反應(yīng)造成的經(jīng)濟損失，尤其在分類免疫過程中不能同時接種兩種以上疫苗，間隔5～7 d，免疫副反應(yīng)最小，所以在首次免疫過程中分類免疫特別必要。但為了有效提高免疫抗體水平，必須進行加強免疫，加強免疫的時間間隔點20～30 d，也就是分段免疫的時間點為20～30 d，分段免疫是根據(jù)免疫抗體應(yīng)答過程中產(chǎn)生抗體水平的曲線和抗體峰值進行有必要的再次加強免疫，由于時間點把握不準確都會影響抗體水平和免疫質(zhì)量，通過此次試驗，再次驗證了分段加強免疫的最佳時間段為20～30 d。此試驗的驗證對于今后廣大獸醫(yī)工作者開展免疫服務(wù)中能夠提供準確的技術(shù)指導(dǎo)和參考，對于全面有效提高豬瘟、口蹄疫免疫接種質(zhì)量起到一定的參考依據(jù)，并有一定的推廣和應(yīng)用價值。