構(gòu)巢曲霉產(chǎn)植酸酶的酶學(xué)特性分析

高兆建,楊培玲,楊 芳,宋玉林,趙宜峰,焦 魏,陳 騰,*

(1.徐州工程學(xué)院食品(生物)工程學(xué)院,江蘇徐州 221018;2.長江桂柳食品睢寧有限公司,江蘇徐州 221000;3.邳州市金大地肥料有限公司,江蘇徐州 221300)

植酸酶是催化植酸及植酸鹽水解成肌醇與磷酸或磷酸鹽的一類酶的總稱,它能將植酸分子上的磷酸基團逐個切下,形成中間產(chǎn)物肌醇五磷酸、肌醇四磷酸、肌醇三磷酸、肌醇工二磷酸、肌醇一磷酸,終產(chǎn)物為肌醇和磷酸[1]。在禾本科和豆科植物中植酸鹽是磷酸的主要貯存形式,它是食品營養(yǎng)素碳水化合物、蛋白質(zhì)、金屬離子的強螯合劑。人體消化系統(tǒng)缺乏植酸酶,因此不能代謝植酸鹽,限制了營養(yǎng)素在腸道的吸收[2],降低了食品的營養(yǎng)價值[3]。在植物性食品原料中添加植酸酶,釋放植酸中的磷,可以提高食品中磷的吸收利用率,并降解植酸鹽蛋白質(zhì)絡(luò)合物,減少植酸對微量元素的螯合。植酸酶在自然界中分布廣泛,目前,在動物、植物和微生物中都發(fā)現(xiàn)過植酸酶[4]。植酸酶種類豐富,結(jié)構(gòu)和性質(zhì)差異較大,催化機理也各不相同。根據(jù)植酸酶的最適pH可將其分為堿性植酸酶和酸性植酸酶,酸性植酸酶由真菌以及絕大多數(shù)的細菌和植物分泌,而少部分細菌和植物能產(chǎn)生中性或偏堿性植酸酶[4]。對微生物植酸酶的廣泛研究表明,植酸酶在人體健康、動物營養(yǎng)、環(huán)境保護等方面具有重要的應(yīng)用價值。目前植酸酶的研究報道較多,如Puppala等[5]報道的Streptomycessp.酸性耐熱植酸酶能促進植物生長;Rocky-Salimi等[6]報道的Bacillussubtilis植酸酶耐堿、耐熱,在環(huán)境修復(fù)方面有應(yīng)用潛力,但對影響植酸酶在食品中應(yīng)用的重要特性即底物催化特性未見報道。目前已經(jīng)有商業(yè)化的植酸酶應(yīng)用于動物飼料中,但應(yīng)用于食品加工的還較少,并且報道的植酸酶在最適催化條件、穩(wěn)定性、底物催化特性、酶活力等方面仍存在較多缺陷。Sanni等[7]報道的Aspergillusfumigatus植酸酶在中性偏堿性條件下穩(wěn)定性較好但耐熱性不高,50 ℃下保溫1 h酶活只剩48%;Sapna等[8]報道的Aspergillusoryzae植酸酶具有良好的抗蛋白酶降解特性,但酸堿及熱穩(wěn)定性不足,pH7.0孵育2 h酶活降為約40%,80 ℃保溫30 min酶活幾乎全部喪失。從報道文獻看出,植酸酶在酶學(xué)特性方面仍然存在諸多不足,尋找開發(fā)性能更好的適用于食品加工產(chǎn)業(yè)的新型植酸酶有著持續(xù)的市場需求。

根據(jù)查閱的文獻,本研究首次從構(gòu)巢曲霉中分離出植酸酶并對其特性研究。本研究采用實驗室篩選到的一株產(chǎn)植酸酶菌株,從其發(fā)酵液中分離純化植酸酶,并對該酶的酶學(xué)特性進行研究,確定其作為食品添加劑對改善食品營養(yǎng)的適宜性。該酶有希望應(yīng)用于谷類食品加工或動物飼料等領(lǐng)域。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

菌種:本研究所用產(chǎn)植酸酶菌株 為前期實驗室篩選獲得,經(jīng)過生理生化及分子生物學(xué)鑒定確定為構(gòu)巢曲霉(Aspergillusnidulans)AnP-16;DEAE-Sepharose Fast Flow、Phenyl Sepharose 6 Fast Flow 瑞典Amersham pharmacia公司;蛋白質(zhì)標準分子質(zhì)量Marker、牛血清白蛋白 美國 Sigma公司;考馬斯亮藍R-250 美國Bio-Rad公司;其他試劑 均為國產(chǎn)分析純;PDA斜面培養(yǎng)基:馬鈴薯20 g/100 mL,葡萄糖2 g/100 mL,瓊脂1.5 g/100 mL,pH自然,121 ℃滅菌20 min;種子培養(yǎng)基:在PDA 培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加,NH4NO30.2 g/100 mL,MgSO4·7H2O 0.05 g/100 mL,KCl 0.05 g/100 mL,瓊脂1.5 g/100 mL,pH6.0。121 ℃蒸汽滅菌15 min;發(fā)酵培養(yǎng)基:玉米淀粉2.0 g/100 mL,葡萄糖1.0 g/100 mL,植酸鈣0.5 g/100 mL,NH4NO30.5 g/100 mL,MgSO4·7H2O 0.05 g/100 mL,KCl 0.05 g/100 mL,CaCl20.01 g/100 mL,pH6.0,121 ℃蒸汽滅菌15 min。

UV-2450型紫外可見光分光光度計 日本島津公司;Hoefer 2-D Electrophoresis電泳系統(tǒng) 美國HOEFR公司;AKTA Explorer 100型蛋白質(zhì)純化系統(tǒng) 美國GE公司;SIGMA3K30型臺式冷凍離心機 德國Sigma公司;JS-680D凝膠成像系統(tǒng) 上海培清科技有限公司;DYY-6B凝膠水平電泳儀 北京市六一儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 植酸酶的發(fā)酵制備 將培養(yǎng)好的構(gòu)巢曲霉AnP-16制成濃度為1×107個/mL孢子懸液,按1%(v/v)的接種量接種于液體發(fā)酵培養(yǎng)基,30 ℃、180 r/min培養(yǎng)6～7 d,發(fā)酵液過濾所得濾液10000 r/min離心15 min,收集上清液即粗酶液。

1.2.2 植酸酶的純化

1.2.2.1 離子交換層析 將發(fā)酵所得粗酶液按照20%～60%鹽析,充分透析脫鹽后的透析液上樣于用pH6.5,20 mmol/L磷酸緩沖溶液平衡的DEAE-Sepharose Fast Flow,用含0～0.8 mol/L NaCl同種緩沖液線性梯度洗脫,洗脫速度1.0 mL/min,3 mL/管自動收集,280 nm波長下在線檢測蛋白濃度。

1.2.2.2 疏水層析 離子交換層析后的樣品進一步Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow疏水層析純化。pH6.0、20 mmol/L的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液(含0.4 mol/L(NH4)2SO4)充分平衡層析柱后上樣,繼續(xù)用相同緩沖溶液洗脫至流出液OD280至0.1以下。再用含2.0～0 mol/L濃度的(NH4)2SO4相同緩沖液線性梯度洗脫,流速0.8 mL/min,3 mL/管收集洗脫液,測酶活以檢測純化情況。

1.2.3 植酸酶活性檢測 參考De Oliveira Ornela等[9]的方法并稍作改動測定植酸酶活力。將酶液用pH4.0、20 mmol/L的乙酸鈉緩沖液稀釋至合適濃度。取50 μL于55 ℃預(yù)熱5 min,加入50 μL的2.5 mmol/L植酸鈉溶液,55 ℃恒溫反應(yīng)30 min后立即加入100 μL的15%三氯乙酸終止反應(yīng),再加入300 μL去離子水,900 μL顯色液(H2SO40.76 mol/L,維生素C 10 g/100 mL,鉬酸銨2.5 g/100 mL),50 ℃溫浴20 min,820 nm下測吸光值,然后與標準磷酸鉀溶液對照計算酶活力。植酸酶活性的定義為[9]:在最適宜條件下,每分鐘從一定濃度的植酸鈉溶液中釋放1 μmoL的無機磷所需要的酶量為一個酶活力單位。

1.2.4 酶純度分析及分子量測定 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)測定純化情況。分離膠為12%,濃縮膠為4%,電壓為120 V,考馬斯亮藍R-250染色。以標準蛋白質(zhì)分子量的對數(shù)對相對遷移率作圖,得到標準曲線,lgMr=K-bmR,Mr蛋白質(zhì)分子量;K為常數(shù),b斜率,相對遷移率mR=樣品遷移距離(cm)/染料遷移距離(cm)。

1.2.5 植酸酶特性分析

1.2.5.1 最適pH及酸堿穩(wěn)定性 以植酸鈉為底物,pH2.0～10.0的反應(yīng)體系，55 ℃下酶解反應(yīng),分別測定純化后適當稀釋的植酸酶活性,確定酶的最適pH。純化后的植酸酶37 ℃下在以上不同pH下孵育3 h,測定殘余酶活力,未處理的酶液酶活力定義為100%,計算相對酶活力,確定酶的pH穩(wěn)定性。

表1 構(gòu)巢曲霉AnP-16產(chǎn)植酸酶的純化過程

1.2.5.2 最適溫度及熱穩(wěn)定性 參照文獻[7],并稍作修改。將純化后的植酸酶在pH4.0,溫度20～80 ℃下測定酶活力,確定最適反應(yīng)溫度。植酸酶在40～80 ℃下,分別熱處理1～4 h。再在55 ℃,pH4.0下測定植酸酶的活性,確定酶的熱穩(wěn)定性。

1.2.5.3 金屬離子及抑制劑對植酸酶的影響 參照文獻方法[8],并適當修改。取純化后的適當酶液,向其中分別加入金屬鹽、表面活性劑、抑制劑和有機溶劑等溶液。37 ℃保溫1 h后,測定殘余酶活力。以上均以不加任何試劑的酶液作為空白對照。

眾所周知，我國的文字屬于象形文字，而對“酒”字的演變進行考察后不難發(fā)現(xiàn)，酒字的甲骨文中就包含了陶罐的表現(xiàn)形式，也就是說，在酒出現(xiàn)的初期，就是被保存在陶罐之中的。

1.2.5.4 底物特異性測定 選取植酸鈉、植酸鈣、對硝基苯酚磷酸酯、三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、葡萄糖-1-磷酸、葡萄糖-6-磷酸、果糖-6-磷酸做為測定酶活的底物。所有底物的濃度均為3 mmol/L。具體測定方法參照1.2.3植酸酶活性檢測方法。以植酸鈉為底物的酶活記做100%,以相對酶活表示酶對不同底物的水解特異性。

1.2.5.5 酶的動力學(xué)分析 在20 mmol/L、pH4.0的乙酸鈉緩沖體系中,55 ℃條件下,分別以濃度為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0和5.0 mmol/L的植酸鈉為底物,與純化得到的植酸酶反應(yīng),測定酶活力,并計算相應(yīng)的反應(yīng)速度,利用雙倒數(shù)作圖法求得Lineweaver-Burk常數(shù)Km值及Vmax。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

所有實驗均以一式三份的形式進行,實驗數(shù)據(jù)用Microsoft Excel進行統(tǒng)計分析并作圖,結(jié)果用“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 植酸酶的分離純化

2.1.1 離子交換層析 離子交換層析洗脫曲線如圖1所示,經(jīng)洗脫得到四個蛋白洗脫峰,其中,P3峰有酶活性,25號管對應(yīng)的酶活性最高,對應(yīng)的NaCl洗脫濃度約為0.3 mol/L。洗脫曲線看出在該分離條件下,植酸酶與雜質(zhì)分子實現(xiàn)了較好分離。經(jīng)層析純化,酶比活力達到12.24 U/mg,純化倍數(shù)為10.2倍,回收率為66.1%。

圖1 植酸酶的離子交換層析

2.1.2 疏水層析 疏水層析洗脫曲線如圖2所示,經(jīng)洗脫得到六個蛋白洗脫峰,其中P4蛋白峰檢測到酶活力,對應(yīng)管數(shù)34～43,其中38號收集管酶活力最高,對應(yīng)(NH4)2SO4濃度約1.0 mol/L。收集含酶活性收集管層析液并測定蛋白濃度和酶活性。各步純化情況見表1,疏水層析后酶比活力達72.9 U/mg,純化倍數(shù)60.8,回收率41.6%,遠比Casey等[10]、Dutta等[11]、Boyce 等[12]報道的植酸酶純化倍數(shù)高。本研究建立的一步離子交換層析,一步疏水層析純化植酸酶的方法,不僅簡化了純化步驟,還避免了酶活損失,為研究植酸酶性質(zhì)奠定了基礎(chǔ)。

圖2 植酸酶的疏水層析

2.1.3 蛋白電泳檢驗純度 經(jīng)過系列純化的樣品SDS-PAGE凝膠電泳分析,結(jié)果如圖3所示。經(jīng)疏水層析后,植酸酶組分達到電泳純,顯示單一電泳條帶,表明植酸酶為單亞基蛋白。根據(jù)標準蛋白相對遷移率及其分子量測得植酸酶的分子量約為52 kDa,相比Neira-Vielma等[13]報道的黑曲霉(89 kDa)、Zhang等[14]研究的無花果曲霉(65.5 kDa)、Lee等[15]研究的草酸青霉(65.5 kDa)等霉菌來源的植酸酶分子量偏小,但遠比Casey等[16]從根霉分離的植酸酶(124 kDa)要小。不同來源的植酸酶表觀分子量差異較大,但報道的植酸酶的分子量大多在60～90 kDa之間。本研究的植酸酶同報道分子量差異較大,推測為新的植酸酶蛋白分子。

圖3 植酸酶的SDS-PAGE

2.2 植酸酶的特性分析

2.2.1 pH對植酸酶活性的影響 不同pH條件下測得植酸酶活性見圖4。pH2～7范圍內(nèi)有70%以上的活性,pH10時相對酶活仍有30%,在pH4測得酶活25.2 U/mL,具有最高活性,與Escobin-Mopera等[17]研究的肺炎克雷伯菌9-3B植酸酶最適pH相一致;但相比報道來源于黑曲霉[10]、毛霉[12]、黃曲霉[18]植酸酶最適pH要高。而報道的無花果曲霉[14]植酸酶最適pH為1.3,比本研究的pH要低。不同來源的植酸酶最適作用pH存在差異,表面酶蛋白分子結(jié)構(gòu)不同。本研究植酸酶在低pH時酶活性較高,說明更適合酸性環(huán)境下使用。

圖4 不同pH條件下植酸酶的活性

pH穩(wěn)定性結(jié)果表明,在pH3.0～7.0范圍內(nèi),具有90%以上的相對酶活。在pH2.0時酶活20.2 U/mL,活性略有下降,但仍有80%。但在堿性pH9.0、10.0,酶活大幅度下降,降至50%以下。Sann等[7]從煙曲霉得到的植酸酶在pH6.0的條件下保溫6 h后,其酶活只剩約50%。Sapna等[8]報道的米曲霉植酸酶pH5.0孵育1 h,酶活即下降至80%。而Escobin-Mopera等[17]關(guān)于肺炎克雷伯菌的研究表明,在pH6.0的條件下保溫6 h幾乎完全喪失酶活。從植酸酶用作食品添加劑的角度來看,該酶同食品一起從口腔(pH5.0)經(jīng)胃(pH2.0～4.0)最后到大腸上部(pH4.0～6.0)所經(jīng)消化道pH約在2～6之間,該酶在消化道的pH范圍內(nèi)可表現(xiàn)出顯著的活性和高穩(wěn)定性[13]。因此,本研究的植酸酶同其他文獻報道的相比,在人體消化道中更容易對植酸降解,確保食品在腸道中更好消化,促進腸道對營養(yǎng)物質(zhì)吸收。

2.2.2 植酸酶的最適反應(yīng)溫度及熱穩(wěn)定性 溫度是影響酶活性的重要因素。從圖5中可知,不同的溫度對植酸酶活性具有明顯的影響,在20～55 ℃的范圍內(nèi),隨著溫度的升高,酶活性增強,隨后酶活力逐漸降低,當溫度80 ℃時酶活力還能達到16.1 U/mL。故酶的最適作用溫度為55 ℃,最大酶活力26.7 U/mL,這與泡盛曲霉[19]、草酸青霉[16]最適作用溫度一致;但明顯高于粘滑羅斯菌[4]、煙曲霉菌[19]、無花果曲霉[8]植酸酶最適溫度。

圖5 植酸酶的最適反應(yīng)溫度

植酸酶的熱穩(wěn)定性實驗表明,植酸酶在40～50 ℃條件下保溫2 h酶活仍有90%以上,60～70 ℃保溫1 h時,剩余酶活80%以上(圖6),表明植酸酶有相對較好的熱穩(wěn)定性,比文獻報道的源于Eupenicilliumparvum[20]、Aspergillusjaponicus[21]、Aspergillusflavus[18]的植酸酶熱穩(wěn)定性高;但相比Bacillussubtilis[6]和Bacillusamyloliquefaciens[22]的植酸酶熱穩(wěn)定性低。在人體營養(yǎng)中,植酸酶不僅需要在胃的pH環(huán)境下保持高活性,并且在儲存、加工和通過胃腸道的過程中必須保持穩(wěn)定。耐熱性是植酸酶的優(yōu)良酶學(xué)特性,本研究的植酸酶在需要加熱處理的飼料加工造粒以及食品巴士殺菌中能夠保持良好的穩(wěn)定性[23],可以滿足這些工藝要求。

圖6 植酸酶的熱穩(wěn)定性

2.2.3 金屬離子及抑制劑對植酸酶的影響 各試劑對植酸酶作用效果如表2所示,Ca2+和Mg2+在1和5 mmol/L離子濃度下對酶均有明顯激活作用,這與報道的其他植酸酶相一致,如Bacillusamyloliquefaciens[22]植酸酶嚴格依賴Ca2+;AspergillusoryzaeSBS50植酸酶Ca2+可使其活性提高至121.7%,推測Ca2+可以減少活性位點裂隙周圍的負電荷,使植酸更容易靠近酶活性中心[22],由此激活酶活性。K+、Na+、Co2+和Ba2+對酶活力無顯著影響。5 mmol/L的Cu2+和Mn2+對植酸酶有強烈抑制作用,而Neira-Vielma等[13]報道的10 mmol/L Cu2+和Mn2+則可使Aspergillusniger植酸酶活性分別提高至135%和128%。推測本研究構(gòu)巢曲霉植酸酶催化中心結(jié)構(gòu)同報道的結(jié)構(gòu)不同,Cu2+和Mn2+與活性中心關(guān)鍵氨基酸的側(cè)鏈結(jié)合導(dǎo)致底物不能正常和酶催化中心靠近,導(dǎo)致酶活性受到強烈抑制。Hg2+對酶活力有強烈的抑制作用,在5 mmol/L Hg2+濃度下,植酸酶酶活力幾乎完全喪失。

表2 金屬離子、表面活性劑、抑制劑及有機溶劑對植酸酶活性的影響

Tween 80對酶有激活作用,而陰離子表面活性劑SDS和Triton X100則對酶有抑制作用,且SDS的抑制作用較Triton X100更強,據(jù)報道,SDS對其它來源的植酸酶也有強的抑制作用,嗜熱鏈球菌[24]植酸酶被SDS強烈抑制,5 mmol/L的SDS可以使Aspergillusfumigatus[7]植酸酶喪失約50%的活性,0.1%的SDS可以使黑曲霉[25]的植酸酶其喪失92%的活性。這種抑制作用可能由于帶有負電荷的去污劑和帶有正電荷的植酸酶活性位點之間相互作用,導(dǎo)致底物難以進入酶的催化活性位點。

抑制劑EDTA對酶沒有明顯作用,表明酶的催化活性不需要金屬離子,這與大多數(shù)植酸酶相似[25]。還原劑β-巰基乙醇和DTT對酶有強烈抑制作用,說明酶蛋白半胱氨酸殘基-SH基團位于酶的催化活性中心并參與酶的催化活性。蛋白酶特異性抑制劑PMSF對植酸酶有較強的抑制作用,濃度0.2%時酶活性殘余53%,這與其他植酸酶類似,如A.niger植酸酶在使用0.5 mmol/L PMSF時其活性大部分喪失[26];另一種來自嗜熱鏈球菌的植酸酶5 mmol/L PMSF能使酶喪失28%的活性[27]。

有機溶劑甲醇和乙醇都有激活作用,而丙酮和異戊醇基本沒有影響。有機溶劑的分子結(jié)構(gòu)改變了酶分子周圍的微環(huán)境,從而影響酶的二級和三級結(jié)構(gòu),進而影響催化性能。文獻報道丁醇、異戊醇和己烷對Aspergillusoryzae[8]和Sporotrichumthermophile[24]植酸酶都有輕微的激活作用。

2.2.4 植酸酶底物特異性 由于酶對不同底物的結(jié)合能力不同,表現(xiàn)出不同的酶活,表3顯示植酸酶可對多種底物有催化活性,以對硝基苯酚磷酸酯為底物催化活性最高,可達到132.5%,這與很多文獻報道的結(jié)果相一致,如Fugthong等[20]報道的Eupenicilliumparvum植酸酶、Singh等[1]報道的Sporotrichumthermophile植酸酶。植酸酶對植酸鈣的水解活性同植酸鈉基本一致,有96.4%的水解活性;對葡萄糖-1-磷酸和葡萄糖-6-磷酸也有較高的水解活性,分別達到82.3%和67.6%。對其他底物水解活性略低,相對酶活為32.5%～38.0%。不同生物來源的植酸酶其底物特異性往往區(qū)別較大,來源Rhizopusmicrosporus[9]的植酸酶對植酸鈉有強的水解活性,而對其他底物水解活性極低,Aspergillusflavus[18]植酸酶除了對植酸鈉和對硝基苯酚磷酸酯活性高外,其他底物無水解活性,而源自Aspergillusoryzae[8]、Aspergillusniger[13]、Aspergillusficuum[14]、Sporotrichumthermophile[1]等真菌的植酸酶對多種有機磷酸鹽表現(xiàn)出寬廣的底物特異性。底物特異性較寬的植酸酶與底物特異性較窄的植酸酶相比,更適合用做食品添加劑,可以在不同種類的糧食產(chǎn)品中使用。

表3 植酸酶的底物特異性

2.2.5 植酸酶的動力學(xué)分析 利用不同濃度的植酸鈉為底物測定植酸酶的反應(yīng)初速率,以酶促反應(yīng)初速率倒數(shù)1/v為縱坐標,底物濃度倒數(shù)1/[S]為橫坐標,用Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法作圖,經(jīng)線性回歸計算反應(yīng)動力學(xué)參數(shù)。植酸酶對植酸鈉的水解作用符合米氏方程,求得植酸酶的表觀米氏常數(shù)Km為0.576 mmol/L,最大反應(yīng)速率Vmax為29.35 μmol/min。該植酸酶的米氏常數(shù)Km和草酸青霉[15]植酸酶Km=0.545 mmol/L比較接近。比黑曲霉[15]植酸酶Km=0.660 mmol/L、乳酸桿菌[3]植酸酶Km=0.773 mmol/L和米曲霉[8]植酸酶Km=1.14 mmol/L等要低,說明本研究的植酸酶與植酸鈉的親和能力更強,但與嗜熱霉菌[1]植酸酶Km=0.156 mmol/L、曲霉NTG-23[14]植酸酶Km=0.295 mmol/L和克雷伯氏菌[28]的植酸酶Km=0.300 mmol/L要高。

3 結(jié)論

本研究報道了來源于構(gòu)巢曲霉AnP-16的植酸酶。經(jīng)過一系列的分離純化,得到了單一組分的植酸酶。酶比活力達到72.9 U/mg,純化倍數(shù)60.8倍,顯現(xiàn)了優(yōu)良的純化效果。植酸酶在廣泛的酸性環(huán)境(pH2～6)及較高溫度范圍內(nèi)酶活力高、穩(wěn)定性強,說明在人體消化道中可充分發(fā)揮酶的催化功能,并可以耐受食品加工環(huán)節(jié)的高溫工藝過程。金屬離子Ca2+與Mg2+可分別使酶活提高至121.7%和112.4%;表面活性劑Tween 80可激活酶活性至119.1%,0.1%濃度的Triton X100及2%和5%的丙酮、乙醇、異戊醇等有機溶劑對酶活性無顯著影響,而2%的甲醇能增強酶活性至121.4%。植酸酶具有寬泛的底物特異性,用做食品添加劑方面有著突出優(yōu)勢?？傮w而言,本實驗從構(gòu)巢曲霉AnP-16發(fā)酵液分離純化的植酸酶酶學(xué)特性特別是其優(yōu)良的在酸性環(huán)境下的穩(wěn)定性及耐熱性使其開發(fā)食品添加劑方面有較大潛力。