18種化學(xué)殺菌劑對櫻桃莖腐病菌的室內(nèi)毒力測定

劉曉琳　于曉麗　王群青　田園園　王麗麗　王培松　王英姿

摘要：為測定不同化學(xué)殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌的毒力，采用平皿法分析25%吡唑醚菌酯懸浮劑（SC）、20%肟菌酯SC、30%王銅SC、80%三乙磷酸鋁水分散粒劑（WG）、30%烯酰·咪鮮胺SC、43%氰霜·百菌清SC、80%福美雙可濕性粉劑（WP）、40%氰霜唑·烯酰嗎啉SC、33.5%喹啉銅SC、18%烯肟·氟環(huán)唑SC、20%氰霜唑SC、35%氟啶胺·烯酰嗎啉SC、30%烯?！ぜ姿`WG、80%烯酰嗎啉WG、60%錳鋅·氟嗎啉WP、60%嘧菌酯WG、77%硫酸銅鋁WP、722 g/L霜霉威鹽酸鹽水劑（AS）等18種藥劑對櫻桃莖腐病的抑制效果。結(jié)果表明，18種供試殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌的毒力差別較大，吡唑醚菌酯對櫻桃莖腐病病菌的抑制效果最好，其EC50為0.153 9 mg/L;氰霜·百菌清、氰霜唑·烯酰嗎啉、氰霜唑、烯?！ぜ姿`、烯酰嗎啉、烯肟·氟環(huán)唑等化學(xué)殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌也有較好的防治效果，其EC50分別為1.103 3、0.582 9、0.831 0、0.426 0、6.051 7、7.723 7 mg/L。福美雙、肟菌酯、王銅、三乙磷酸鋁、烯酰·咪鮮胺、喹啉銅、氟啶胺·烯酰嗎啉、錳鋅·氟嗎啉、嘧菌酯、硫酸銅鋁、霜霉威鹽酸鹽等化學(xué)殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌菌絲生長的抑制效果較差，其EC50在10.416 8～948.653 6 mg/L 之間。該研究結(jié)果為田間防治櫻桃莖腐病的有效化學(xué)藥劑選擇提供了參考和理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：櫻桃莖腐病;煙草疫霉;平皿法;化學(xué)殺菌劑;毒力

中圖分類號：S436.629?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）19-0106-05

收稿日期：2019-12-17

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（編號：31701751）;山東省農(nóng)業(yè)微生物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金（編號：SDKL2017015）;山東省自然科學(xué)基金（編號：BS2015NY004）。

作者簡介：劉曉琳（1996—）女，山東濰坊人，碩士研究生，從事植物病理學(xué)研究。E-mail：liuxiaolin116055@qq.com。

通信作者：于曉麗，博士，高級農(nóng)藝師，從事植物病理學(xué)研究。Tel：（0535）6352015;E-mail：yuxiaoli92jn@126.com。

我國大櫻桃的主要產(chǎn)區(qū)是煙臺市和大連市，煙臺市自19世紀(jì)70年代開始栽培種植大櫻桃，至今已有140多年的歷史。煙臺市種植櫻桃面積最廣、引進(jìn)最早、產(chǎn)量最高、品種眾多，現(xiàn)在大櫻桃已成為煙臺市的“城市名片”[1]。櫻桃莖腐病是由煙草疫霉（Phytophthora nicotianae）引起的病害，主要危害葉片和新生枝條的莖部，導(dǎo)致葉片和新生枝條干枯死亡[2-3]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，櫻桃莖腐病是導(dǎo)致櫻桃苗木大面積死亡的主要病害，在多雨高溫的年份發(fā)病的苗圃更容易出現(xiàn)毀園現(xiàn)象[3-4]?；瘜W(xué)藥物防治仍然是病蟲害防治的主要手段，生物殺菌劑防治雖然具有安全無污染的優(yōu)點(diǎn)，對食品安全具有重要的作用[5]，但在災(zāi)害嚴(yán)重泛濫的時(shí)候，大多數(shù)的生物殺菌劑治療效果并不明顯，不能夠與化學(xué)殺菌劑混用，且容易受到環(huán)境因素的制約和干擾?；瘜W(xué)殺菌劑殺菌范圍廣、見效快，混合使用能夠發(fā)揮更好的藥效，在病害嚴(yán)重時(shí)期優(yōu)點(diǎn)更加突出[6]。目前對煙草疫霉引起的植物病害，其田間防治主要以化學(xué)藥劑防治為主，但隨著殺菌劑的大量使用，隨之而來的是病原菌對化學(xué)藥劑產(chǎn)生抗藥性。據(jù)報(bào)道，煙草疫霉已對甲霜靈產(chǎn)生了抗藥性[7]。因此，為了在田間更好地防治櫻桃莖腐病，須要篩選更多安全高效的化學(xué)殺菌劑在田間交替使用，避免產(chǎn)生抗藥性。本研究通過室內(nèi)毒力測定對25%吡唑醚菌酯懸浮劑（SC）、50%肟菌酯SC、30%王銅SC、80%三乙磷酸鋁水分散粒劑（WG）、30%烯?！み漉r胺SC、43%氰霜·百菌清SC、50%福美雙可濕性粉劑（WP）、40%氰霜唑·烯酰嗎啉SC、33.5%喹啉銅 SC、18%烯肟·氟環(huán)唑SC、20%氰霜唑SC、35%氟啶胺·烯酰嗎啉SC、30%烯?！ぜ姿`WG、80%烯酰嗎啉WG、60%錳鋅·氟嗎啉WP、60%嘧菌酯WG、77%硫酸銅鈣WP、722 g/L霜霉威鹽酸鹽水劑（AS）等18種化學(xué)藥劑進(jìn)行室內(nèi)篩選試驗(yàn)，以期為田間科學(xué)選藥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥劑

試驗(yàn)主要藥劑有25%吡唑醚菌酯SC（江蘇劍牌農(nóng)化股份有限公司）、50%肟菌酯SC（南通泰禾化工股份有限公司）、30%王銅SC（廣東大豐植保科技有限公司）、80%三乙磷酸鋁WG（利民化工股份有限公司）、30%烯?！み漉r胺SC（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、43%氰霜·百菌清SC[中農(nóng)立華（天津）農(nóng)用化學(xué)品有限公司]、50%福美雙WP（江西中訊農(nóng)化有限公司）、40%氰霜唑·烯酰嗎啉SC（青島星牌作物科學(xué)有限公司）、33.5%喹啉銅SC（浙江海正化工股份有限公司）、18%烯肟·氟環(huán)唑SC（沈陽科創(chuàng)化學(xué)品有限公司）、20%氰霜唑SC（江蘇劍牌農(nóng)化股份有限公司）、35%氟啶胺·烯酰嗎啉SC（安道麥馬克西姆有限公司）、30%烯?！ぜ姿`WG（青島奧迪斯生物科技有限公司）、80%烯酰嗎啉WG（江蘇健神生物農(nóng)化有限公司）、60%錳鋅·氟嗎啉WP（沈陽科創(chuàng)化學(xué)品有限公司）、60%嘧菌酯WG（江蘇明德立達(dá)作物科技有限公司）、77%硫酸銅鈣WP（西班牙艾克威化學(xué)工業(yè)有限公司）、722 g/L霜霉威鹽酸鹽AS[拜耳作物科學(xué)（中國）有限公司]。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 含藥培養(yǎng)基配制

1 L 10% V8汁固體培養(yǎng)基：100 mL V8汁中加入1 g CaCO3，與水1 ∶9（體積比）稀釋，加入15 g瓊脂粉，121 ℃高溫滅菌15 min。

用Eppendorf微量可調(diào)移液槍取1 mL 10 000 mg/L 殺菌劑母液，用滅菌去離子水將供試藥劑配成一定濃度的稀釋液，取1 mL稀釋液加入49 mL 10% V8汁固體培養(yǎng)基中，混合均勻后倒入培養(yǎng)皿中制成含藥平板。

1.2.2 平皿法

2018年4月3日在室內(nèi)無菌環(huán)境下，用接種針挑取直徑為6 mm的菌絲塊，放置于含藥平板中央，以不加藥平板作為對照，每個(gè)濃度重復(fù)3次，26 ℃恒溫培養(yǎng)5 d。應(yīng)用十字交叉法垂直測量平板菌落直徑，計(jì)算藥劑對櫻桃莖腐病病菌菌絲生長的抑制率。抑制率=（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%。

1.3 數(shù)據(jù)分析

用DPS 18.10軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，計(jì)算各處理濃度的對數(shù)值（X）和菌絲生長抑制率概率值（Y），求毒力回歸方程和相關(guān)系數(shù)，得出生物殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌的抑制中濃度（EC50），并得到95%置信區(qū)間。

2 結(jié)果與分析

2.1 18種化學(xué)殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌菌絲生長的抑制效果

由表1可知，25%吡唑醚菌酯SC的抑制效果最明顯，在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為49.41%～79.22%，藥劑濃度較低時(shí)依然有較好的抑制效果;30%烯酰·甲霜靈WG次之，在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為2549%～92.94%;40%氰霜唑·烯酰嗎啉SC在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為3961%～100.00%;20%氰霜唑SC在藥劑濃度為020～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為47.84%～6431%;43%氰霜·百菌清SC在藥劑濃度為020～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為27.45%～8392%;50%肟菌酯SC在藥劑濃度為0.20～2500 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為1.96%～60.00%;30%王銅SC在藥劑濃度為0.39～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為0.78%～17.65%;80%三乙磷酸鋁WG在藥劑濃度為0.39～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為0.39%～10.20%;30%烯?！み漉r胺SC在藥劑濃度為0.39～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為118%～35.69%;50%福美雙WP在藥劑濃度為020～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為0.78%～6039%;33.5%喹啉銅SC在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L 范圍內(nèi)，抑制率為1.18%～45.10%;18%烯肟·氟環(huán)唑SC在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L 范圍內(nèi)，抑制率為17.65%～55.29%;35%氟啶胺·烯酰嗎啉SC在藥劑濃度為0.39～12.50 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為3.92%～100.00%;80%烯酰嗎啉WG在藥劑濃度為1.56～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為11.76%～92.55%;60%錳鋅·氟嗎啉WP在藥劑濃度為3.13～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為1.96%～92.94%;60%嘧菌酯WG在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為1804%～37.25%;77%硫酸銅鈣WP在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為0.39%～22.35%;722 g/L霜霉威鹽酸鹽AS在藥劑濃度為0.20～25.00 mg/L范圍內(nèi)，抑制率為19.22%～3882%。

2.2 毒力測定結(jié)果

經(jīng)DPS回歸分析各處理濃度的對數(shù)值（X）和菌絲生長抑制率概率值（Y），得到不同殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)和抑制中濃度（EC50）。室內(nèi)毒力測定結(jié)果（表2）表明，18種供試殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌的毒力差別較大。分析EC50表明，吡唑醚菌酯對病菌的抑制效果最好，其EC50為0.153 9 mg/L;氰霜·百菌清、氰霜唑·烯酰嗎啉、氰霜唑、烯?！ぜ姿`、烯酰嗎啉、烯肟·氟環(huán)唑等化學(xué)藥劑對櫻桃莖腐病病菌也有較好的防治效果，其EC50分別為1.103 3、0.582 9、0831 0、0426 0、6.051 7、7.723 7 mg/L。福美雙、肟菌酯、王銅、三乙磷酸鋁、烯?！み漉r胺、喹啉銅、氟啶胺·烯酰嗎啉、錳鋅·氟嗎啉、嘧菌酯、硫酸銅鋁、霜霉威鹽酸鹽等對櫻桃莖腐病病菌的防治效果較差，其EC50在10.418 6～1 948.653 6 mg/L之間。

3 結(jié)論與討論

該試驗(yàn)供試的18種化學(xué)殺菌劑對櫻桃莖腐病病菌的毒力差別較大。其中，吡唑醚菌酯、氰霜·百菌清、氰霜唑·烯酰嗎啉、氰霜唑、烯?！ぜ姿`、烯酰嗎啉、烯肟·氟環(huán)唑等化學(xué)藥劑對櫻桃莖腐病的病原菌煙草疫霉的防效較好，其EC50分別為0153 9、1.103 3、0.582 9、0.831 0、0.426 0、6.051 7、7723 7 mg/L;福美雙對病菌的EC50雖然較高，為14.406 1 mg/L，但作為一種保護(hù)性殺菌劑，在感病前或感病初期使用能夠提高植物抗性，有較好的保護(hù)效果;吡唑醚菌酯被用來防治子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌和卵菌綱真菌引起的病害，并且對黃瓜白粉病、葡萄霜霉病、馬鈴薯晚疫等均有較好的防治效果[8];氰霜·百菌清在防治甜瓜霜霉病、葡萄霜霉病上效果較好，其2種有效成分對卵菌綱引起的病害有很好的防治作用，2種有效成分作用機(jī)制不同，能夠延緩抗藥性的產(chǎn)生[9];氰霜唑·烯酰嗎啉對作物具有高效的保護(hù)、治療和內(nèi)吸作用，具有效期長，與其他殺菌劑沒有交叉抗性等優(yōu)點(diǎn);氰霜唑作為新型的低毒殺菌劑，有效期長、具有很好的保護(hù)活性和一定的內(nèi)吸和治療活性等優(yōu)點(diǎn)，對卵菌的所有生長階段均有作用，且對已經(jīng)對甲霜靈產(chǎn)生的抗性或敏感性的菌株依然有活性[10];烯酰嗎啉主要被用于防治葡萄等果樹上的霜霉病和晚疫病等卵菌病害，防治效果較好[11];烯肟·氟環(huán)唑是三唑類與甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的復(fù)配制劑，對病害具有預(yù)防和治療活性;福美雙是一種低毒、廣譜保護(hù)性殺菌劑，對多種作物的霜霉病、疫霉病等病害均具有較好的防治效果[12-13]。該研究結(jié)果為櫻桃莖腐病的田間防治提供了高效化學(xué)殺菌劑選擇的理論依據(jù)。結(jié)合當(dāng)年降雨、溫濕度等氣象資料及該病害田間發(fā)病的情況[2]，適時(shí)適量用藥，以達(dá)到防治該病害的目的。

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