血清巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子、可溶型細(xì)胞間黏附分子-1及甲胎蛋白水平與慢性乙型肝炎患者肝纖維指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性分析

粟春林

(四川省遂寧市中心醫(yī)院消化中心四病區(qū)，四川 遂寧 629000)

慢性乙型肝炎作為乙型肝炎病毒感染所致消化系統(tǒng)傳染疾病，可導(dǎo)致患者肝臟纖維化甚至出現(xiàn)肝臟硬化病變，嚴(yán)重影響患者正常生活[1]。肝纖維化特指肝臟細(xì)胞因?yàn)榧?xì)胞外基質(zhì)膠原大量聚集，其作為眾多肝臟疾病發(fā)生過程，為可逆性病變過程，病變?cè)缙谶M(jìn)行診斷與治療可以有效緩解甚至逆轉(zhuǎn)纖維化過程[2]。血清巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)作為介導(dǎo)免疫應(yīng)激以及炎癥反應(yīng)淋巴因子，與患者乙型、丙型肝炎發(fā)病以及病程進(jìn)展關(guān)系密切[3]?？扇苄图?xì)胞間黏附分子-1(sICAM-1)主要由蛋白酶降解膜型ICAM-1而使細(xì)胞外成分分解所致，其水平變化與肝細(xì)胞病變關(guān)系密切[4]。甲胎蛋白(AFP)作為腫瘤特異性標(biāo)志物，在肝臟腫瘤疾病發(fā)生中水平異常上升[5]。目前對(duì)于肝炎患者肝纖維化評(píng)估主要應(yīng)用血清肝纖維指標(biāo)以及肝纖維化程度評(píng)估，是否可以應(yīng)用其他血清指標(biāo)評(píng)估肝炎纖維化程度尚需要進(jìn)一步研究。為豐富肝纖維化評(píng)估方法，明確乙型肝炎發(fā)病機(jī)制，本研究探討慢性乙型肝炎患者M(jìn)IF、sICAM-1及AFP水平與肝纖維指標(biāo)關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料2016年3月至2019年3月我院收治110例慢性乙肝肝炎患者(研究組)及同期健康體檢者104例(對(duì)照組)。研究組納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者乙肝表面抗原檢查顯示為陽性，且陽性時(shí)間超過6個(gè)月，肝組織穿刺活檢證實(shí)患者病情，期間未接受抗病毒治療；②對(duì)照組無慢性乙肝肝炎病情；③研究參與者精神或者意識(shí)正常，可以配合研究中各項(xiàng)操作；④研究參與者對(duì)研究知情，且獲得醫(yī)院倫理會(huì)批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①肝臟疾病類型為肝癌、失代償型肝硬化或者肝臟移植者；②已經(jīng)接受抗病毒治療；③并發(fā)心臟、腎臟以及肺部等器官功能異常者；④并發(fā)免疫性、代謝性以及感染性疾病。研究組男53例，女57例，年齡24～79歲[(52.64±19.54)歲]；對(duì)照組男50例，女54例，年齡22～80歲[(53.92±21.64)歲]。兩組基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1血清指標(biāo)水平測(cè)定 患者在入院當(dāng)日或次日、健康者在體檢當(dāng)日收集空腹靜脈血，血液離心后獲得上清液，血清MIF、sICAM-1、AFP均應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行測(cè)定，血清纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸(HA)、層黏蛋白(LN)以及Ⅳ型前膠原(Ⅳ-C)采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測(cè)定。上述指標(biāo)測(cè)定采用對(duì)應(yīng)試劑盒在Hitachi 7600型號(hào)全自動(dòng)生活分析儀上測(cè)定。

1.2.2肝纖維化程度評(píng)估 患者均進(jìn)行肝組織活檢，應(yīng)用經(jīng)皮肝穿刺法進(jìn)行活檢穿刺，肝組織樣本采集完成后行病理檢查評(píng)估患者肝纖維化程度。肝組織樣本應(yīng)用中性甲醛固定，采用乙醇進(jìn)行梯度脫水，二甲苯透明處理后進(jìn)行石蠟包埋，樣本切片后應(yīng)用網(wǎng)狀纖維以及蘇木精-伊紅染色，最后在顯微鏡下進(jìn)行觀察。最后肝臟纖維化程度評(píng)估由2位醫(yī)師進(jìn)行評(píng)估，意見一致顯示為最終結(jié)果有效，意見不一致則與第3位醫(yī)師討論達(dá)至統(tǒng)一意見。依據(jù)患者匯管區(qū)纖維化，小葉內(nèi)纖維間隔以及纖維化情況分為S0～S4期[6]：S0期為未見纖維化；S1期為匯管區(qū)纖維化變大，小葉內(nèi)部以及局限竇周纖維化；S2期為小葉區(qū)結(jié)構(gòu)未被破壞，匯管區(qū)附近纖維化，纖維間隔形成；S3期為小葉結(jié)構(gòu)異常且纖維間隔形成，尚未出現(xiàn)肝硬化；S4期為早期肝硬化形成。

1.3 觀察指標(biāo)比較兩組血清三指標(biāo)及肝纖維化指標(biāo)水平，不同肝纖維化程度患者血清三指標(biāo)水平，分析血清三指標(biāo)水平與肝纖維化指標(biāo)及程度相關(guān)性，血清三指標(biāo)水平對(duì)患者肝纖維化預(yù)測(cè)價(jià)值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析及SNK-q檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析；血清三指標(biāo)水平對(duì)肝纖維化預(yù)測(cè)價(jià)值采用ROC曲線。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清三指標(biāo)及肝纖維化指標(biāo)水平比較研究組血清MIF、sICAM-1、AFP及HA、LN、Ⅳ-C水平高于對(duì)照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組血清三指標(biāo)及肝纖維化指標(biāo)水平比較

2.2 不同肝纖維化程度患者血清三指標(biāo)水平比較

肝纖維化S1、S2、S3、S4期分別有33、30、27及20例，隨著患者肝纖維化程度加重，血清MIF、sICAM-1及AFP水平上升(P<0.05)，見表2。

表2 不同肝纖維化程度患者血清三指標(biāo)水平比較

2.3 血清三指標(biāo)水平與肝纖維化指標(biāo)及程度相關(guān)性分析血清MIF、sICAM-1及AFP水平與HA、LN、Ⅳ-C及肝纖維化程度正相關(guān)(P<0.05)，見表3。

表3 血清三指標(biāo)水平與肝纖維化指標(biāo)與程度相關(guān)性分析

2.4 血清三指標(biāo)水平對(duì)患者肝纖維化預(yù)測(cè)價(jià)值分析ROC曲線顯示血清MIF、sICAM-1、AFP水平處于31.67 μg/L、31.67 μg/L、3.86 ng/ml時(shí)，用于預(yù)測(cè)患者肝纖維化靈敏度分別為78.65%、81.64%、80.19%，特異度分別為81.59%、78.64%、84.52%，AUC分別為0.792、0.806、0.813，見表4與圖1。

表4 血清三指標(biāo)水平對(duì)患者肝纖維化預(yù)測(cè)價(jià)值分析

圖1 血清三指標(biāo)水平對(duì)患者肝纖維化預(yù)測(cè)價(jià)值的ROC曲線

3 討論

乙肝肝炎患者長(zhǎng)時(shí)間處于感染狀態(tài)，病毒感染會(huì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)激活，造成肝臟組織部分蛋白酶活性增加，進(jìn)一步誘使肝臟組織中膠原蛋白被膠原蛋白酶降解，造成肝組織細(xì)胞以及細(xì)胞質(zhì)之間通道被破壞，最終導(dǎo)致肝纖維化與肝硬化[7]。HA、LN、Ⅳ-C為反映機(jī)體肝纖維化重要指標(biāo)，均存在于肝臟組織基質(zhì)，在肝臟組織纖維化過程中會(huì)逐漸被釋放進(jìn)入血液，所以肝炎患者血清HA、LN、Ⅳ-C水平顯著上升。本研究中研究組血清MIF、sICAM-1、AFP水平顯著高于對(duì)照組。MIF作為免疫調(diào)節(jié)因子，可以在機(jī)體免疫作用中發(fā)揮誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞活化，減少巨噬細(xì)胞移動(dòng)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞聚集以及粘附，最終誘導(dǎo)機(jī)體炎癥作用。Tang等[8]研究認(rèn)為MIF作為一種參與遲發(fā)性超敏反應(yīng)和多種巨噬細(xì)胞功能淋巴因子，具有有效吞噬、擴(kuò)散和殺瘤活性，其表達(dá)在胃炎、炎癥性腸病、肝炎和胰腺炎患者血清和局部病變中均顯著增加，而阻斷MIF生物活性可抑制胃炎、結(jié)腸炎、肝炎和胰腺炎疾病中炎癥。另有研究發(fā)現(xiàn)肝移植患者術(shù)后較易出現(xiàn)再灌注以及缺血損傷，其組織損傷與患者M(jìn)IF釋放水平上升關(guān)系密切。Marin等[9]研究中酒精性肝炎患者M(jìn)IF主要在肝細(xì)胞表達(dá)，而肝組織MIF濃度與患者病情嚴(yán)重程度以及死亡率正相關(guān)。sICAM-1作為膜型ICAM-1裂解產(chǎn)生而成，其在肝細(xì)胞癌中表達(dá)水平異常上升，其水平上升與患者肝臟腫瘤復(fù)發(fā)以及轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。Osibogun等[10]研究中發(fā)現(xiàn)肝炎病毒感染患者內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物sICAM-1和sVCAM-1明顯高于健康者，與本研究中相關(guān)結(jié)論一致。國外研究者發(fā)現(xiàn)乙肝與丙肝共感染患者sICAM-1高于乙肝病毒感染以及健康對(duì)照組，患者接受治療后sICAM-1水平明顯下降，顯示其水平與患者病毒感染載量關(guān)系密切。AFP作為胚胎卵黃囊或者肝細(xì)胞分泌球蛋白，是評(píng)估肝癌病情特異性指標(biāo)，而在乙型肝炎中其水平變化則反映了肝細(xì)胞損傷以及功能修復(fù)情況。楊凱等[11]研究顯示隨著乙型肝炎患者炎癥程度加重，AFP水平逐漸上升，但是AFP水平與病毒載量無顯著相關(guān)性，分析認(rèn)為乙肝病毒感染并不會(huì)直接導(dǎo)致機(jī)體炎癥發(fā)生，而是通過激活免疫作用間接使肝臟組織炎癥反應(yīng)劇烈。

乙型肝炎患者肝纖維情況可以應(yīng)用血清肝纖維指標(biāo)評(píng)估。本研究中隨著患者肝纖維化程度加重，患者血清MIF、sICAM-1以及AFP水平逐漸上升，顯示纖維化程度與血清MIF、sICAM-1以及AFP水平正相關(guān)。Wirtz等[12]研究中發(fā)現(xiàn)MIF與丙型肝炎所致纖維化程度關(guān)系密切，這種關(guān)系主要由MIF啟動(dòng)子區(qū)域rs755622和rs5844572多態(tài)性介導(dǎo)，與雜合子攜帶者或野生型相比，rs755622中C等位基因的純合子攜帶者纖維化程度低，C/C基因型和微衛(wèi)星重復(fù)次數(shù)高患者肝功能損傷、肝細(xì)胞癌變風(fēng)險(xiǎn)較高。MIF經(jīng)由上調(diào)活性氧介導(dǎo)纖維細(xì)胞糖酵解作用進(jìn)而誘導(dǎo)膠原生成，加速肺部纖維化進(jìn)程。王烈等[13]認(rèn)為乙肝肝硬化患者肝硬化程度越高，sICAM-1越高，sICAM-1則可以促進(jìn)T細(xì)胞受體作用，加快抗原呈遞細(xì)胞與淋巴細(xì)胞之間結(jié)合作用，可以協(xié)同激活細(xì)胞免疫作用，患者肝硬化程度越高內(nèi)部炎癥作用越激烈，體內(nèi)細(xì)胞免疫作用激烈，sICAM-1越高。Moqueet等[14]研究中sICAM-1指標(biāo)可以有效預(yù)測(cè)大鼠3年肝纖維化風(fēng)險(xiǎn)，顯示炎性指標(biāo)在肝纖維化評(píng)估中優(yōu)異價(jià)值。余明杰等研究結(jié)果顯示明顯肝炎、急性肝炎、肝硬化以及肝癌患者肝纖維化程度加重，AFP水平依次上升，可用于鑒別各種肝臟疾病。郭飛波等[15]研究顯示肝硬化伴肝癌患者血清AFP水平異常，且其水平與患者肝纖維化程度以及肝纖維化指標(biāo)關(guān)系密切，可用于肝硬化伴肝癌診斷。血清指標(biāo)用于疾病診斷、病情嚴(yán)重程度評(píng)估以及預(yù)后預(yù)測(cè)中具有快速以及無創(chuàng)優(yōu)勢(shì)，且其臨床應(yīng)用價(jià)值優(yōu)異。本研究中ROC曲線顯示血清MIF、sICAM-1、AFP用于預(yù)測(cè)乙型肝炎肝纖維化AUC分別為0.792、0.806、0.813，顯示三指標(biāo)其應(yīng)用于預(yù)測(cè)乙型肝炎肝纖維化價(jià)值優(yōu)異。

綜上，乙型肝炎患者血清MIF、sICAM-1、AFP異常上升，三者水平與肝纖維化指標(biāo)、肝纖維化程度正相關(guān)，其用于預(yù)測(cè)患者肝纖維化價(jià)值優(yōu)異。