慢性乙型肝炎后肝硬化患者外周血T細(xì)胞亞群及促炎癥亞群CD16+單核細(xì)胞的變化及臨床意義

孟玉麗，王 斌，張紅旭

(河南省漯河市中心醫(yī)院，河南 漯河 462000)

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)簡(jiǎn)稱乙肝，是一種由過(guò)血液途徑傳播的乙型肝炎病毒性疾病，指患者表面抗原呈陽(yáng)性，轉(zhuǎn)氨酶間歇或持續(xù)性上升超過(guò)半年，隨著病情變化，患者將逐漸向肝硬化發(fā)展[1，2]。主要是因患者機(jī)體內(nèi)免疫功能發(fā)生紊亂所致，而T細(xì)胞參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)，且是目前臨床上對(duì)免疫狀態(tài)進(jìn)行有效評(píng)估的細(xì)胞因子[3]。研究指出，CHB患者體內(nèi)存在著較多的非特異性細(xì)胞例如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等均參與了乙型肝炎向肝硬化發(fā)展的過(guò)程，對(duì)肝炎的病變過(guò)程具有重要意義[4]。而眾所周知，單核細(xì)胞在CHB患者的肝臟中的浸潤(rùn)及損傷的病變中具有緊密聯(lián)系[5]。而目前關(guān)于外周血T細(xì)胞及促炎癥亞群?jiǎn)魏思?xì)胞在CHB患者中的意義的相關(guān)研究較少[6]。本研究對(duì)本院確診的142例CHB及乙型肝炎后肝硬化患者進(jìn)行分析，探究T細(xì)胞亞群與促炎癥亞群CD16+單核細(xì)胞的表達(dá)對(duì)乙型肝炎后肝硬化患者的病程變化的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年8月至2019年8月我院收治的研72例乙型肝炎患者和70例乙型肝炎后肝硬化患者，均經(jīng)臨床上慢性乙型肝炎或肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]確診且未合并酒精性肝炎、自身免疫性肝病及其他類型肝炎或其他感染性疾病。再納入60例同時(shí)間段進(jìn)行體檢的健康人群作為對(duì)照組，各組基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 各組一般資料比較

1.2 方法試劑與儀器：運(yùn)用PE標(biāo)記的單克隆抗體CD16以及運(yùn)用FITC進(jìn)行標(biāo)記的CD14、T細(xì)胞亞群試劑盒(美國(guó)BD公司)、流式細(xì)胞分析儀(美國(guó)BD FACSCalibur)、石蠟、4%甲醛。檢測(cè)方法：①T細(xì)胞亞群檢測(cè)：抽取所有受檢者3 ml清晨空腹靜脈血，并加入EDTA-K2進(jìn)行抗凝。由專業(yè)技術(shù)人員嚴(yán)格按照說(shuō)明將標(biāo)準(zhǔn)量的抗體抽取放置于流式管，予以加入100 μl已經(jīng)混勻的全血并漩渦混勻放置于避光處15 min，將BD溶血素1.5 ml溶入流式管并于避光處孵育10 min直至完全溶透亮，再加入PBS予以洗滌一次并進(jìn)行離心，將上清液摒棄后再次加入PBS洗滌2次，洗滌完成后加入600μl的1% 固定液，上機(jī)待檢。②促炎癥亞群CD16+單核細(xì)胞檢測(cè)：將抽取的靜脈血加入枸櫞酸鈉抗凝處理放置于流式管，再將50μl全血混入，其中一支試管中加入予以標(biāo)記的單克隆抗體CD16+、CD14，放置于避光處15 min，再加入1.5 ml BD溶血素加入試管，其余步驟同上，另一支試管溶入全血后則加入IgG予以對(duì)照。將兩組流式管放置于分析儀，其檢測(cè)結(jié)果運(yùn)用CELLQuest軟件分析。選取各組樣本的有核細(xì)胞的散射光和銀光區(qū)信號(hào)15萬(wàn)個(gè)通過(guò)光散射性質(zhì)設(shè)定單核細(xì)胞區(qū)，并對(duì)細(xì)胞亞群進(jìn)行分類和測(cè)定。③患者肝臟病理病變程度檢測(cè)：予以確診為乙型肝炎后肝硬化的患者進(jìn)行一秒鐘肝臟穿刺，并利用4%甲醛將肝穿組織予以固定，予以石蠟包埋進(jìn)行病理組織檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 18.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用F檢驗(yàn)及LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組外周血T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)情況比較對(duì)照組CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+計(jì)數(shù)明顯高于乙型肝炎組和乙型肝炎后肝硬化組，乙型肝炎組上述亞群計(jì)數(shù)高于乙型肝炎后肝硬化組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 各組外周血T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)比較

2.2 各組促炎癥亞群CD16+單核細(xì)胞計(jì)數(shù)情況比較乙型肝炎后肝硬化組的CD14+CD16+亞群計(jì)數(shù)比率明顯高于乙型肝炎組和對(duì)照組，對(duì)照組低于乙型肝炎組(P<0.05)；對(duì)于CD14+CD16-亞群計(jì)數(shù)比率，對(duì)照組明顯高于乙型肝炎組、乙型肝炎后肝硬化組，乙型肝炎后肝硬化最低(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組促炎癥亞群CD16+單核細(xì)胞計(jì)數(shù)情況比較 (%)

2.3 乙型肝炎后肝硬化患者外周血T細(xì)胞亞群及促炎癥亞群CD16+單核細(xì)胞與肝炎病變程度相關(guān)性分析乙型肝炎后肝硬化患者的CD14+CD16+/CD14+與肝炎病變程度成正相關(guān)關(guān)系，而外周血T細(xì)胞亞群以及CD14+CD16-/CD14+的表達(dá)與患者肝炎病變程度呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表4。

3 討論

由于我國(guó)人口基數(shù)大，慢性乙型肝炎的患病率較高，約占我國(guó)總?cè)藬?shù)的7%以上，而肝硬化就是及主要并發(fā)癥之一[8]。慢性乙型肝炎后肝硬化的臨床癥狀呈多樣性，輕者可出現(xiàn)輕度的營(yíng)養(yǎng)不良癥狀，例如貧血、食欲缺乏、腹水、黃疸、全身乏力等癥狀，長(zhǎng)期以往，則可能出現(xiàn)門靜脈高壓引起消化道出血，甚至死亡[9]。目前慢性乙型肝炎后肝硬化的治療原則就是預(yù)防乙型病毒性肝炎[10]。

目前所知，乙型肝炎病毒(HBV)發(fā)生感染并慢性病變的原因主要是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)降低，特別是細(xì)胞免疫功能下降導(dǎo)致機(jī)體不能對(duì)HBV進(jìn)行全面的清除[11，12]。而細(xì)胞免疫中最重要的免疫調(diào)控因子就是T細(xì)胞，該細(xì)胞的表達(dá)可有效反映機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)功能，并分為CD4+和CD8+兩個(gè)T細(xì)胞亞群[13]。有報(bào)道稱，若HBV處于急性感染期可通過(guò)激活體內(nèi)的細(xì)胞免疫系統(tǒng)，提高T細(xì)胞亞群表達(dá)量，并激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫防御；當(dāng)HBV處于慢性感染期則可能導(dǎo)致免疫細(xì)胞亞群CD3+數(shù)量大量減少，從而引起體內(nèi)免疫效力降低，若CD4+和CD8+細(xì)胞亞群表達(dá)同時(shí)降低，將加重免疫功能降低程度，從而造成肝硬化，甚至肝衰竭[14，15]。而在本研究中，健康對(duì)照組的T細(xì)胞亞群計(jì)數(shù)顯著高于CHB及乙型肝炎后肝硬化患者，這也有效的驗(yàn)證了上述研究。

單核細(xì)胞同樣也是免疫系統(tǒng)的不可或缺的一部分，當(dāng)單核細(xì)胞被激活將釋放大量的炎癥細(xì)胞因子，并參與真菌、病原體、細(xì)菌等所致的病變的免疫防御[16]。有相關(guān)研究顯示，單核細(xì)胞也具有功能及表達(dá)功能各不相同的亞群，其中最常見(jiàn)的就是促炎癥亞群CD16+[17]。CD16+單核細(xì)胞可產(chǎn)生大量促炎性因子例如白介素-6(IL-6)或腫瘤壞死因子等對(duì)免疫系統(tǒng)造成一定的影響[18]。CD16+單核細(xì)胞包括CD14+CD16+亞群和CD14++CD16-亞群[19]。研究證明，促炎癥亞群CD16+可有效維持炎癥因子水平[20]。而在本研究中可知，CHB及慢性乙型肝炎后肝硬化患者促炎癥亞群CD14+CD16+的表達(dá)明顯高于正常水平，且隨病情變化逐漸升高，而CD14+CD16-亞群的表達(dá)則與之相反，這在一定程度上說(shuō)明了CD14+CD16+亞群隨病變的程度逐漸上升，有效的促進(jìn)了肝硬化的產(chǎn)生。

本研究結(jié)合乙型肝炎后肝硬化患者的肝臟組織活檢并進(jìn)行Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，促炎性細(xì)胞CD14++CD16-/CD14+、外周血T細(xì)胞亞群的水平與肝炎病變程度呈負(fù)相關(guān)，而CD14+CD16+/CD14+與肝炎病變程度呈正相關(guān)，這有效的說(shuō)明了外周血T細(xì)胞及單核細(xì)胞亞群CD16+與乙型肝炎后肝硬化患者的病變過(guò)程具有重要聯(lián)系，此結(jié)論與楚玉蘭[21]、楊喆娟等[22]研究結(jié)果大致相同。

綜上所述，慢性乙型肝炎后肝硬化患者單核細(xì)胞亞群CD16+和外周血T細(xì)胞的表達(dá)與患者病情變化具有一定聯(lián)系，患者病情程度及免疫狀態(tài)均可通過(guò)上述細(xì)胞亞群有效的反映出來(lái)，在一定程度是上可作為臨床上對(duì)患者疾病程度診斷的重要依據(jù)。