地塞米松在慢性硬膜下血腫作用機制研究

陳旭，張永安，龔紹慧，詹劍

（上饒市人民醫(yī)院 神經(jīng)外科，江西 上饒 334000）

0 引言

慢性硬膜下血腫是一類常見的顱內(nèi)出血性疾病，占顱內(nèi)出血的10%，多見于老年人及6個月以下的嬰兒[1-2]。目前，臨床上治療慢性硬膜下血腫首選方式為鉆孔引流術(shù)，但臨床研究發(fā)現(xiàn)，鉆孔引流術(shù)治療后，復(fù)發(fā)率達4.3%-31.0%[3]。同時，對于顱內(nèi)血腫量少、臨床癥狀輕、服用抗凝藥物、合并嚴重心血管疾病而無法耐受手術(shù)或術(shù)后復(fù)發(fā)的患者，藥物治療就顯得尤為重要[4]。在2005年，Sun等人使用前瞻性研究方法研究了地塞米松在慢性硬膜下血腫中的治療作用，發(fā)現(xiàn)地塞米松可以明顯降低患者的復(fù)發(fā)率[5]。Berghauser等人在2012年研究了496名慢性硬膜下血腫患者復(fù)發(fā)因素，發(fā)現(xiàn)長時程使用激索能夠明顯降低患者的復(fù)發(fā)率[6]。基于此，本研究通過探討地塞米松在慢性硬膜下血腫作用機制，旨在了解激素治療慢性硬膜下血腫的分子生物學(xué)機制，為激素治療慢性硬膜下血腫的治療提供更多依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑。新西蘭白兔，體重2.5-3.0 kg；地塞米松磷酸鈉注射液（貴州天地藥業(yè)有限責(zé)任公司，國藥準字：H52020477）；3%戊巴比妥、4%多聚甲醛（北京中杉金橋公司）；VEGFElisa試劑盒（上海碧云天生物科技有限公司）。M-51653型動物腦立體定向儀、高速磨鉆STRONG204（美國Stoelting公司）；倒置熒光相差顯微鏡（日本奧林巴斯）；3.0核磁共振（美國GE公司）。

1.2 建模。新西蘭兔使用硬膜下少量多次注血法進行模型制備。3%戊巴比妥（30 mg/kg）靜脈麻醉，俯臥位固定，縱行切開頭皮暴露右側(cè)顱骨。于頂部冠狀縫后方、矢狀縫外側(cè)用磨鉆磨開顱骨，形成約3 mm×7 mm骨窗，保留骨瓣并在其后部打一小孔，軟管（麻醉用硬膜外導(dǎo)管）一端穿過小孔并用線捆法固定于骨瓣上，于硬膜上刺一小孔，顯微鏡下直視將軟管置于硬膜下腔，同時骨瓣復(fù)位，逐層縫合顱頂肌層以固定骨瓣。耳緣靜脈取自體非抗凝血0.5 mL，經(jīng)由軟管緩慢注入硬膜下腔。之后分別于術(shù)后第3、6、9、12、1 d重復(fù)注血操作，均為0.5 mL/次。通過核磁共振觀察到兔大腦皮質(zhì)與骨質(zhì)內(nèi)板之間低信號血腫即為建模成功。

1.3 干預(yù)處理。在建模成功6 h后，地塞米松組給予腹腔注射地塞米松（30 mg/kg）干預(yù)，生理鹽水組給予腹腔注射生理鹽水（30 mg/kg）干預(yù)。

1.4 觀察指標。于干預(yù)1、3、5 d時采用核磁共振觀察血腫體積變化。隨后立即處死實驗動物，抽取外周血。剝離血腫外膜置于4%多聚甲醛固定液中固定。常規(guī)梯度脫水、透明、浸蠟、包埋、石蠟塊作縱向間斷連續(xù)切片，厚度為4μm，采用Elisa法檢測外周血VEGF表達水平。

1.5 統(tǒng)計分析。采用SPSS 22.0進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料用例數(shù)和百分數(shù)表示，計量數(shù)據(jù)用“”表示，兩組獨立，正態(tài)，方差齊資料組間比較采用t檢驗。P<0.05時差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血腫體積比較。結(jié)果顯示，干預(yù)第一天時，兩組血腫體積比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；干預(yù)第3和5天，兩組血腫體積均有所減小，且同一時間地塞米松組血腫體積顯著小于生理鹽水組（P<0.05），見表1。

表1 兩組血腫體積比較（ ，μL）

表1 兩組血腫體積比較（ ，μL）

組別 干預(yù)第1 d 干預(yù)第3 d 干預(yù)第5 d生理鹽水組 447.21±38.54 394.35±35.67 342.68±39.17地塞米松組 451.68±40.22 304.49±35.52 188.56±34.78 t 0.139 3.092 5.096 P 0.896 0.037 0.007

2.2 兩組VEGF水平比較。結(jié)果顯示，干預(yù)第一天時，兩組VEGF比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）；干預(yù)第3和5天，兩組VEGF水平有所降低，且同一時間地塞米松組VEGF水平顯著小于生理鹽水組（P<0.05），見表2。

表2 兩組VEGF水平比較（ ，ng/L）

組別 干預(yù)第1 d 干預(yù)第3 d 干預(yù)第5 d生理鹽水組 204.56±22.54 167.17±17.24 125.94±18.87地塞米松 208.69±24.68 112.48±21.33 49.97±13.25 t 0.214 3.454 5.707 P 0.841 0.026 0.005

3 討論

研究表明，血腫體積的增加與顱內(nèi)壓升高、凝血功能障礙、靜脈張力增高以及腦萎縮等存在密切聯(lián)系。血管內(nèi)側(cè)主要為膠原纖維，而外側(cè)則含有大量的毛細血管網(wǎng)。研究發(fā)現(xiàn)，血腫外膜有大量的嗜酸粒細胞浸潤，而且在細胞分裂過程中有脫?，F(xiàn)象，而這一類顆?；|(zhì)內(nèi)含有纖維蛋白溶解酶原，可溶解纖維蛋白，抑制血小板的聚集，進而導(dǎo)致出血。而顱內(nèi)壓上升則為慢性硬膜下血腫的主要臨床表現(xiàn)[7]。

地塞米松為人工合成的腎上腺皮質(zhì)激素，其作用的主要機制為通過對炎性細胞在炎性部位聚集過程產(chǎn)生抑制作用，進而抑制溶酶體酶的釋放及炎性介質(zhì)的表達，降低炎性反應(yīng)，因此其可有效抑制血腫外膜嗜酸粒細胞作用，從而減少溶解酶原的表達，控制慢性出血。同時地塞米松還具有降低顱內(nèi)壓作用。本研究結(jié)果顯示，通過地塞米松干預(yù)慢性硬膜下血腫模型，可顯著降低血腫體積[8-9]。

VEGF為一類重要的血管生成因子，其具有促進血管生成、增加血管通透性等作用。研究發(fā)現(xiàn)，VEGF可促進內(nèi)皮細胞組織型纖溶酶原激活物的活性，進而激活纖溶系統(tǒng)，加重出血，增加血腫程度。本研究結(jié)果顯示地塞米松干預(yù)慢性硬膜下血腫可顯著降低外周血VEGF表達。

綜上所述，地塞米松可抑制VEGF的表達，促進血腫吸收加快。