HPLC法測定甲磺酸培氟沙星膠囊的含量及有關(guān)物質(zhì)

朱曉璐，胡幸

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院，重慶 401121）

0 引言

甲磺酸培氟沙星是喹諾酮類第三代抗菌藥物，主要作用于細(xì)菌細(xì)胞的DNA旋轉(zhuǎn)酶，干擾細(xì)菌DNA的合成，使細(xì)菌死亡[1]。其合成工藝系由諾氟沙星與甲醛、甲酸進(jìn)行甲基化反應(yīng)生成培氟沙星，再與甲磺酸在乙醇溶液中進(jìn)行成鹽反應(yīng)[2-3]。甲磺酸培氟沙星膠囊收載于《中國藥典》2015年版，甲磺酸培氟沙星原料藥收載于EP9.0，USP及JP均未收載該品種。有關(guān)物質(zhì)是評價藥物安全性的一個重要指標(biāo)，也是評價藥品質(zhì)量的重要指標(biāo)[4]。本文參照EP9.0[5]建立了甲磺酸培氟沙星膠囊含量及有關(guān)物質(zhì)的測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器。Agilent1100高效液相色譜儀（紫外檢測器和DAD檢測器），色譜柱：SHISEIDO（資生堂）MG5μm C18 4.6 mml.d.×250 mm。

1.2 試藥與藥品。乙腈、N，N，N-三甲基1-十六烷基溴化銨、硼酸均為國產(chǎn)分析純，硫二甘醇為Johnson Mathey Company提供。甲磺酸培氟沙星膠囊（A廠，規(guī)格：0.2 g；B廠，規(guī)格：0.2 g）各三批。

2 色譜條件

流動相：乙腈-N，N，N-三甲基1-十六烷基溴化銨（2.70g/L）與硼酸溶液（6.18 g/L）的混合溶液（用1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至8.30）-硫二甘醇（28:72:0.2）；流速：1.0 mL/L；柱溫為30℃；檢測波長273 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

3 方法學(xué)考察

3.1 專屬性試驗(yàn)

3.1.1 破壞試驗(yàn)：取樣品分別進(jìn)行熱破壞（60℃下放置10天）、酸破壞（加入1 mol/L鹽酸）、堿破壞（加入1 mol/L氫氧化鈉溶液）、光照破壞（裸置于強(qiáng)光下48小時）、紫外光破壞（裸置于紫外光下48小時）以及氧化破壞（加入30%雙氧水1 mL），采用“2”的色譜條件進(jìn)行雜質(zhì)分離度的考察。結(jié)果顯示主峰與各雜質(zhì)均能較好的分離，且輔料對測定無干擾。分別精密吸取上述供試品溶液20 ul注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1。

3.1.2 峰純度檢測：將“3.1.1”的破壞試驗(yàn)樣品溶液用DAD檢測器進(jìn)行純度檢測，結(jié)果主峰純度均大于990，結(jié)果表明，本品在酸、堿、高溫、光照、紫外及氧化條件下均有新的雜質(zhì)產(chǎn)生，但均與主峰有良好的分離度，表明本方法具有較好的專屬性，能滿足本品有關(guān)物質(zhì)檢查的要求[6-8]。

圖1 峰純度檢測

3.2 檢測限及定量限。取培氟沙星對照品約25 mg，用流動相溶解并稀釋制成每1 mL中含培氟沙星0.2 mg的溶液，再稀釋500倍，采用“2”的色譜條件進(jìn)樣，測得培氟沙星檢測限為0.01989 ng（信噪比=3），定量限為0.08517 ng（信噪比=10）。

3.3 溶液穩(wěn)定性。取培氟沙星對照品約25 mg，用流動相溶解并稀釋至每1 mL中含培氟沙星0.2 mg的溶液，采用“2”的色譜條件分別在1小時、2小時、4小時、8小時、10小時進(jìn)樣，結(jié)果表明，溶液在室溫條件下10小時內(nèi)雜質(zhì)含量基本未變，提示本品溶液能夠在10小時內(nèi)保持穩(wěn)定。

3.4 回收率考察。對兩個生產(chǎn)廠家的樣品進(jìn)行樣品加標(biāo)回收率試驗(yàn)。取培氟沙星對照品約25 mg，用流動相溶解并稀釋至每1 mL中含培氟沙星0.2 mg的溶液，作為對照品溶液；取樣品適量，用流動相溶解并稀釋至對照品溶液相同濃度，作為供試品溶液。另分別配制相當(dāng)于含量測定濃度80%、100%和120%的加標(biāo)供試品溶液各三份，采用“2”的色譜條件測定其含量，扣除本底，計(jì)算回收率，并計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)差（RSD），結(jié)果見表1。

結(jié)果表明，2個生產(chǎn)廠家的樣品平均回收率分別為100.40%、100.59%，RSD分別為0.79%和0.77%，該方法測定含量準(zhǔn)確可靠。

4 結(jié)果檢測

按擬訂的方法進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)和含量檢測，雜質(zhì)峰出峰時間均在主峰前。結(jié)果顯示，三個生產(chǎn)廠家9批樣品采用自身對照法，單個雜質(zhì)在0.10%-0.31%，均小于0.5%，總雜質(zhì)在0.25%-0.52%，均小于1.0%。9批樣品含量為95.2%-98.4%。

5 討論

在277 nm和273 nm波長處，甲磺酸培氟沙星峰的響應(yīng)值比較接近，在258 nm波長處，峰的響應(yīng)值較低。經(jīng)紫外掃描，原料及各種處方的制劑主峰最大吸收均在273 nm處，輔料在273 nm波長處幾乎無吸收；經(jīng)破壞試驗(yàn)結(jié)果可知，除了酸破壞，其余強(qiáng)制破壞樣品均未在主峰后檢出雜質(zhì)峰，而EP9.0的檢測方法中，258 nm波長處主要檢測主峰以后出峰的雜質(zhì)[9-11]。為了便于含量和有關(guān)物質(zhì)檢測方法操作的簡便和一致性，最終確定檢測波長為273 nm。

表1 回收率試驗(yàn)

甲磺酸培氟沙星對光較敏感，穩(wěn)定性較差，在長時間強(qiáng)光和紫外光照射下，會產(chǎn)生較多雜質(zhì)。因此在實(shí)驗(yàn)時可采取避光操作以降低環(huán)境因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。