一例長毛兔病毒性出血癥的診斷與防制

吳鳳筍，羅 琴，張桂云

(河南牧業(yè)經(jīng)濟(jì)學(xué)院，河南 鄭州 450046)

兔病毒性出血癥(Rabbit viral hamorrhagic disease,RHD)俗稱“兔瘟”，是由兔病毒性出血癥病毒(Rabbit viral hamorrhagic disease virus，RHDV)感染引起的急性烈性傳染病[1]，對(duì)易感兔感染性強(qiáng)，潛伏期短，傳播速度快，以感染兔全身多個(gè)器官淤血、出血、壞死為主要病理變化，發(fā)病率和死亡率都很高[2]。該病一年四季均可發(fā)生，但寒冷季節(jié)高發(fā)，3月齡以上的青年兔和成年兔易感性最強(qiáng)。各品種家兔均可感染該病，長毛兔易感性最高[3]。一旦兔群內(nèi)出現(xiàn)感染發(fā)病，帶毒兔的排泄物、分泌物和尸體就會(huì)大量散播病毒，引起新的個(gè)體發(fā)病。目前，該病無有效治療藥物，常常引起發(fā)病兔大量死亡，給兔場造成重大經(jīng)濟(jì)損失，是危害養(yǎng)兔業(yè)的重大傳染病之一。

近年來，兔病毒性出血癥疫苗的廣泛接種使該病的發(fā)生明顯減少。但由于免疫程序不當(dāng)、疫苗質(zhì)量不合格或者免疫注射不規(guī)范等原因，在養(yǎng)兔集中地區(qū)仍呈零星散發(fā)態(tài)勢[5]。2020年10月，焦作市某長毛兔養(yǎng)殖場出現(xiàn)不明原因的連續(xù)死亡，送病兔、死兔到我校病理室診斷。通過了解發(fā)病情況、分析臨床癥狀、病理剖檢、實(shí)驗(yàn)室檢查，確診為兔病毒性出血癥。現(xiàn)將該病的診斷及防制情況報(bào)告如下。

1 發(fā)病概況

該養(yǎng)殖場存欄有500多只長毛兔，其中幼兔100多只。10月3日有長毛兔突然死亡，連續(xù)5 天共死亡25只，多為成年兔；死前未見腹瀉和鼻炎等癥狀，使用磺胺類藥和青鏈霉素注射治療，效果不佳。陸續(xù)還有兔出現(xiàn)精神沉郁、食欲下降和死亡，病情有擴(kuò)大的趨勢。

2 臨床癥狀及剖檢病變

2.1 臨床癥狀

發(fā)病長毛兔主要表現(xiàn)：高熱(40 ℃以上)，食欲不振，呼吸急促，可視黏膜、皮膚發(fā)紺，部分病兔出現(xiàn)咳嗽，排出帶有淡黃色粘液的糞球。多在發(fā)病后幾個(gè)小時(shí)至2天內(nèi)死亡，臨死前尖叫、身體抽搐、角弓反張、四肢劃水樣。5只病死兔口鼻有鮮紅色泡沫樣血液流出。

2.2 剖檢病變

對(duì)送檢的病死兔進(jìn)行病理剖檢，主要病理變化：肝臟腫大，呈土黃色，質(zhì)脆易碎；膽囊腫大，膽汁稀?。晃竷?nèi)充滿食物，胃黏膜壞死脫落，黏膜下有綠豆大小的暗紅色出血點(diǎn)散在分布，腸系膜淋巴結(jié)腫大，結(jié)腸內(nèi)糞球表面有黃色膠凍樣黏液；脾臟體積增大，呈暗紅色；肺臟淤血腫大，表面散在有大量出血斑點(diǎn)，切面流出泡沫樣液體，氣管黏膜呈深紅色，氣管腔內(nèi)充滿白色泡沫樣液體；心包液略有增多，心臟柔軟，體積增大，心外膜血管擴(kuò)張充血，心房及右心室內(nèi)充滿凝固不全的血液；腎臟體積增大、淤血，切面外翻，皮髓質(zhì)分界不清，膀胱高度充盈，內(nèi)含大量淡黃色尿液。

3 實(shí)驗(yàn)室檢查

3.1 細(xì)菌學(xué)檢查

無菌取脾臟、肝臟組織接種到鮮血瓊脂培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察培養(yǎng)基上無細(xì)菌生長。同時(shí)取肝臟、脾臟觸片，革蘭氏染色鏡檢，涂片均未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌。

3.2 血凝和血凝抑制試驗(yàn)

將采集的肝臟稱重，剪碎，按1:10比例加入滅菌的PBS液，搗碎成勻漿，在4 ℃冰箱浸制30 min，3 000 rpm離心20 min，取上清液備用。

血凝試驗(yàn)：第一步，96孔微量反應(yīng)板的第1～12孔每孔各加入50 μL PBS液；第二步，第1孔加入50 μL 肝臟研磨上清液，混勻后取出50 μL加入第2孔，混勻后再取出50 μL加入第3孔，依次做2倍系列稀釋到第11孔，混勻后取出50 μL棄去，第12孔設(shè)PBS液作陰性對(duì)照；第三步，每孔加入50 μL 1%人O 型血紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，放入濕盒置37 ℃溫箱靜置35 min后觀察結(jié)果[4]。

依據(jù)血凝試驗(yàn)結(jié)果配制出4個(gè)血凝單位(4HA)肝臟研磨上清液，進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)。

血凝抑制試驗(yàn)：第一步，在96孔反應(yīng)板上第1～11孔每孔各加入50 μL 滅菌的PBS液；第二步，第1孔加入已知RHD陽性血清50 μL，做2倍系列稀釋到第10孔，混勻后取出50 μL棄去；12孔加入RHD陽性血清50 μL作為對(duì)照；第三步，第1孔～11孔依次加入4HA 肝臟研磨上清液50 μL，震蕩混勻，37 ℃ 感作30 min后，每孔再加入50 μL 1%人 O 型血紅細(xì)胞懸液，震蕩混勻，放入濕盒置37 ℃溫箱靜置35 min，觀察結(jié)果。第11孔、12孔分別為4HA肝臟研磨上清液、RHD陽性血清對(duì)照孔。

血凝試驗(yàn)結(jié)果：第1孔至第6孔紅細(xì)胞被完全凝集，PBS液對(duì)照孔未出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，該肝臟組織的血凝效價(jià)為10×26；血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果第1孔至第5孔紅細(xì)胞沒有出現(xiàn)凝集，第6孔至第10孔出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集，4HA肝臟研磨上清液對(duì)照孔紅細(xì)胞完全凝集，RHD陽性血清對(duì)照孔未出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集。

血凝和血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果表明該肝臟研磨上清液能凝集人O 型血紅細(xì)胞，并且其血凝特性能被已知的RHD陽性血清所抑制，說明該肝臟組織中含有RHDV。

4 診斷結(jié)果

根據(jù)細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果，可以排除細(xì)菌感染性疾病。根據(jù)血凝和血凝抑制試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)合發(fā)病情況、臨床癥狀及病理剖檢變化，綜合判定該場此次發(fā)病為兔病毒性出血癥病毒(RHDV)感染引起的兔病毒性出血癥(RHD)。

5 防制措施

兔病毒性出血癥是兔病毒性出血癥病毒感染引起的烈性傳染病，目前尚無有效藥物治療。對(duì)本確診病例，要求養(yǎng)殖場對(duì)病情嚴(yán)重的兔立即撲殺，并對(duì)尸體及污染物進(jìn)行無害化處理；輕癥病兔及時(shí)隔離飼喂，并緊急注射兔瘟單價(jià)疫苗4 mL/只，同時(shí)肌注維生素C 2 mL/只，青霉素5萬單位/kg，以預(yù)防繼發(fā)感染；對(duì)全群健康兔用兔瘟單價(jià)苗進(jìn)行普防，劑量加倍，做到一兔一針頭，嚴(yán)格消毒；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，對(duì)圈舍進(jìn)行徹底清掃，每天用5%來蘇爾溶液對(duì)圈舍、用具及環(huán)境進(jìn)行消毒，地面、糞便用2%氫氧化鈉溶液消毒；隨時(shí)檢查兔群，發(fā)現(xiàn)可疑病兔及時(shí)挑出隔離；停止兔、兔毛買賣及無關(guān)人員進(jìn)出，兔舍用具固定使用。

通過采取以上措施，兔群死亡逐漸減少，5天后沒有再出現(xiàn)新的發(fā)病和死亡。

6 討論

本次疫情較典型的兔病毒性出血癥的發(fā)病率、死亡率低，與該場進(jìn)行過兔瘟免疫有關(guān)。送檢人員提供該場日常免疫程序如下：成年長毛兔每年免疫兔瘟三聯(lián)苗3次，分別安排在2月底、6月底及10月底，每次每只2 mL；幼兔30日齡免疫兔瘟三聯(lián)苗1次，每次每只1 mL，55日齡再加強(qiáng)免疫一次，以后按成年兔進(jìn)行免疫。所以，兔群中大部分個(gè)體具有一定的免疫保護(hù)能力，發(fā)病死亡的應(yīng)該是體內(nèi)兔瘟抗體水平低下，不能進(jìn)行有效保護(hù)的個(gè)體。

分析本次發(fā)病原因，傳染來源雖然無法準(zhǔn)確判斷，但其發(fā)病時(shí)間是在兩次免疫間隔的最后階段，兔群中有少部分兔由于個(gè)體免疫功能問題或上次免疫注射問題，抗體水平偏低，失去了抵抗病毒感染的能力；再者天氣逐漸轉(zhuǎn)涼，一旦有兔瘟強(qiáng)毒侵染兔群，免疫力較低的兔就會(huì)被感染發(fā)病甚至死亡。為了避免類似疫情再次發(fā)生，建議在養(yǎng)兔密集地區(qū)用兔瘟三聯(lián)疫苗進(jìn)行免疫接種，可以安排一年免疫4次。有條件的兔場可以進(jìn)行兔瘟抗體檢測，依據(jù)抗體水平制定合理的免疫程序。

兔病毒性出血癥病毒非常穩(wěn)定，對(duì)外界環(huán)境抵抗能力強(qiáng)，能在病死兔體內(nèi)存活3個(gè)月以上[5]，所以該病毒可能在養(yǎng)兔密集地區(qū)常年存在，養(yǎng)殖場不可掉以輕心。兔瘟病毒疫苗免疫效果很好，嚴(yán)格按照免疫程序及時(shí)免疫，可以避免感染發(fā)病。臨床實(shí)踐證明兔瘟單價(jià)苗免疫效果要優(yōu)于三價(jià)聯(lián)苗，在兔瘟常年存在的地區(qū)，可以考慮選用兔瘟單價(jià)疫苗免疫，同時(shí)增加免疫次數(shù)，避免因部分兔抗體水平低下被感染發(fā)病，使全群受到威脅，給養(yǎng)兔生產(chǎn)帶來重大損失。