• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討清瘟解熱合劑治療新型冠狀病毒肺炎的作用機(jī)制*

    2020-12-08 08:24:20朱波宇王洪武張翟軼崔換天廖家抱溫偉波
    關(guān)鍵詞:合劑靶點(diǎn)通路

    朱波宇,楊 璐,王洪武,張翟軼,李 欽,崔換天,廖家抱,溫偉波△

    (1.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津 301617;2.云南省中醫(yī)醫(yī)院,云南 昆明 650021;3.山東大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/山東省動(dòng)物細(xì)胞與發(fā)育生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東 青島 266237;4.嘉興市中醫(yī)醫(yī)院,浙江 嘉興 314033)

    今年初,湖北省武漢市出現(xiàn)了由新型冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的新型冠狀病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)。COVID-19 具有傳播迅速廣泛、傳染性強(qiáng)、各類人群普遍易感的特點(diǎn),目前臨床尚無特效藥[1]。中醫(yī)藥作為我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥,在納入新型冠狀病毒肺炎診治方案后,取得了突出的療效。COVID-19在我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)里屬于“疫病”的范疇,多為外邪侵入機(jī)體,體內(nèi)正氣不足導(dǎo)致。運(yùn)用中醫(yī)理論進(jìn)行辨證,病因?yàn)楦惺芤哽逯畾?,病位在肺,基本病機(jī)特點(diǎn)為“濕、熱、毒、瘀”[2-3]。

    清瘟解熱合劑(Qingwen Jiere Mixture)是立足于中醫(yī)對“瘟疫”的防治理論而研制的中藥復(fù)方制劑。主要成分有:藿香、柴胡、黃芩、連翹、法半夏、草果、茵陳、馬蹄香、滑石、甘草、白薇、炒神曲、炒厚樸。藿香具有芳香化濕、和胃止嘔的功效;柴胡可以疏散退熱、升舉陽氣;黃芩和連翹能清熱、瀉火解毒;半夏可燥濕化痰、降逆止咳、消痞散結(jié);草果能燥濕溫中、截瘧祛痰;茵陳可清利濕熱,利膽退黃;馬蹄香內(nèi)服消風(fēng)散氣解暑,利尿通淋去積;滑石為寒涼藥物,能清熱解暑,保護(hù)腸壁;甘草具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒和調(diào)和諸藥的功效,在驅(qū)邪的同時(shí)又扶助正氣;白薇能清熱涼、利尿通淋;厚樸歸肺經(jīng)、脾經(jīng),可以燥濕行氣、消痰平喘;神曲辛溫,歸脾胃經(jīng),具有消食和胃的功效。本方配伍用藥具有清熱化濕,芳香避穢,燥濕止瀉等功效;對于治療COVID-19感染輕中癥、疑似患者及時(shí)疫感冒癥見發(fā)熱身痛,咽痛咳嗽,腹脹痞滿,大便黏膩臭穢或便溏腹瀉,納差乏力等具有顯著療效。在我國新冠肺炎疫情暴發(fā)時(shí),清瘟解熱合劑用于云南省定點(diǎn)醫(yī)院及湖北省咸寧市部分受援單位,臨床療效顯著。清瘟解熱合劑用于老撾、緬甸等我國周邊國家及地區(qū),同樣取得了良好的臨床療效。

    網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是一種常見的研究中藥復(fù)方作用機(jī)制的方法,從中醫(yī)的整體觀念出發(fā),結(jié)合辨證論治的方法,多種學(xué)科交叉運(yùn)用,構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò),探求疾病和藥物的聯(lián)系[4],為解釋中藥復(fù)雜作用機(jī)制提供了方法。本文通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)檢索清瘟解熱合劑的活性成分和靶點(diǎn),進(jìn)一步推測其治療COVID-19的作用機(jī)制,為清瘟解熱合劑臨床用于新型冠狀病毒肺炎治療,提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 清瘟解熱合劑成分篩選 檢索中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和分析平臺(tái) TCMSP(http://ibts.hkbu.edu.hk/lsp/tcmsp.php)[5]以“藿香,柴胡,黃芩,連翹,法半夏,草果,茵陳,馬蹄香,甘草,滑石,厚樸,白薇,神曲”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行查詢。中藥復(fù)方通常以口服為主,口服生物利用度(oral bioavailability,OB)是藥物吸收、分布、代謝、排泄(ADME)中重要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)之一,表示口服藥物的有效成分或活性基被吸收到達(dá)體循環(huán)并吸收的速度與程度,OB值越高通常表示藥物的生物活性越好[6]。類藥性(drug-like,DL)是指化合物與已知藥物的相似性,是化合物能夠成為藥物的評價(jià)指標(biāo)[7],通常以O(shè)B≥30%,DL≥0.18作為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選得到清瘟解熱合劑的活性成分。

    1.2 有效成分靶點(diǎn)的預(yù)測和基因名的確定 采用TCMSP數(shù)據(jù)庫對清瘟解熱合劑的作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測,再利用 UniProt數(shù)據(jù)庫(https://www.uniprot.org/)[8]規(guī)范與活性成分相關(guān)的靶點(diǎn)蛋白,獲得靶點(diǎn)對應(yīng)的基因名。

    1.3 疾病靶點(diǎn)的篩選 以“corona virus disease 2019”和“novel coronavirus pneumonia”作為關(guān)鍵詞,在 OMIM 數(shù)據(jù)庫[9](http://omim.org/)和 Genecards數(shù)據(jù)庫[10(]https://www.genecards.org)中搜索疾病相關(guān)靶點(diǎn)。運(yùn)用Venny平臺(tái)(版本2.1,http://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)將清瘟解熱合劑作用靶點(diǎn)與COVID-19靶點(diǎn)取交集,得到清瘟解熱合劑治療COVID-19的相關(guān)靶點(diǎn)。

    1.4 蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)建立 將1.3得到的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入 String 數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org)[11],得到蛋白相互作用關(guān)系的網(wǎng)絡(luò)圖。蛋白間的連線越多,關(guān)聯(lián)度越大,成為核心靶點(diǎn)的概率越高。

    1.5 GO分析和KEGG分析 將篩選出來的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入 DAVID 數(shù)據(jù)庫[12](http://www.david.niaid.nih.gov)中進(jìn)行基因功能(gene oncology,GO)富集分析,運(yùn)用 KOBAS3.0 數(shù)據(jù)庫(http://kobas.cbi.pku.edu.cn)對核心靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)基因通路富集分析,以 p≤0.05、q≤0.05作為篩選指標(biāo),并對結(jié)果進(jìn)行可視化處理。

    1.6 藥物成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)的建立 在Cytoscape3.7.2[13]中導(dǎo)入預(yù)測藥物的活性成分、核心靶點(diǎn)以及相關(guān)聯(lián)的通路,構(gòu)建藥物成分-靶點(diǎn)-通路相互作用網(wǎng)絡(luò),通過網(wǎng)絡(luò)對其相互作用機(jī)制進(jìn)行闡述。

    1.7 清瘟解熱合劑藥材-歸經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的建立 方中飲片的歸經(jīng)信息從2015年版《中國藥典》中獲取,通過查取歸經(jīng)信息構(gòu)建清瘟解熱合劑的藥材-歸經(jīng)網(wǎng)絡(luò)。

    2 結(jié)果

    2.1 清瘟解熱合劑成分篩選結(jié)果 清瘟解熱合劑活性成分篩選共得到1 357種,其中甘草280種、法半夏116種、藿香94種、茵陳53種、草果59種、連翹150種、黃芩58種、柴胡288種、馬蹄香3種、滑石1種、白薇81種、炒厚樸139種、炒神曲35種。以O(shè)B≥30%,DL≥0.18,篩選后共有264種成分符合條件,見圖 1、表 1。

    表1 清瘟解熱合劑包含化學(xué)成分的對應(yīng)靶標(biāo)數(shù)

    圖1 清瘟解熱合劑各味藥物主要有效成分?jǐn)?shù)量

    2.2 有效成分靶點(diǎn)收集結(jié)果 在TCMSP中查詢到510個(gè)有效成分靶點(diǎn),將有效成分靶點(diǎn)名稱導(dǎo)入U(xiǎn)niProt數(shù)據(jù)庫,得到靶點(diǎn)對應(yīng)的基因名。

    2.3 疾病靶點(diǎn)篩選結(jié)果 在OMIM數(shù)據(jù)庫和Genecards數(shù)據(jù)庫中共收集到752個(gè)COVID-19相關(guān)靶點(diǎn),其中OMIM數(shù)據(jù)庫中有493個(gè)靶點(diǎn),Genecards數(shù)據(jù)庫中有259個(gè)靶點(diǎn)。將疾病靶點(diǎn)和藥物成分靶點(diǎn),取交集最終得到32個(gè)清瘟解熱合劑治療COVID-19的潛在靶點(diǎn),見圖2。

    圖2 藥物靶點(diǎn)-疾病靶點(diǎn)韋恩圖

    2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 構(gòu)建的PPI網(wǎng)絡(luò)中有30個(gè)作用節(jié)點(diǎn),共231條相互作用連線。其中白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL6)、腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)、趨化因子(C-C motif ligand 2,CCL2)和絲裂原活化蛋白激酶 1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)的連通度較高,是核心靶點(diǎn),見圖3、表2。

    表2 靶點(diǎn)連通度

    2.5 靶點(diǎn)通路分析 GO功能富集分析得到GO條目共283條,其中生物過程(BP)條目226個(gè),細(xì)胞組成(CC)條目 26個(gè),分子功能(MF)條目 31個(gè),分別占80%、9%、11%。我們根據(jù)P值將生物過程(BP)、細(xì)胞組成(CC)、分子功能(MF)中的各前 15名列出,見表3。

    圖3 靶點(diǎn)相互作用網(wǎng)絡(luò)

    表3 清瘟解熱合劑GO生物功能富集分析

    KEGG通路富集分析共得到232條通路,根據(jù)p值篩選出與COVID-19有關(guān)的前10條通路,包括IL-17信號通路(IL-17 signaling pathway)、Th17細(xì)胞分化(Th17 cell differentiation)、腫瘤壞死因子信號通路(TNF signaling pathway)等通路,見表4。

    2.6 成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將篩選出來靠前的30條通路和藥物預(yù)測有效成分和疾病潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2,通過構(gòu)建成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)來闡釋其復(fù)雜的作用機(jī)制,不同節(jié)點(diǎn)分別代表、成分、靶點(diǎn)、通路。紅色三角代表-靶點(diǎn),藍(lán)色四邊代表-信號通路,綠色四邊代表-活性成分,連線代表-各點(diǎn)之間的相互關(guān)系,見圖4。

    2.7 清瘟解熱合劑藥材-歸經(jīng)網(wǎng)絡(luò) 根據(jù)清瘟解熱合劑的歸經(jīng)信息,構(gòu)建藥材-歸經(jīng)網(wǎng)絡(luò),圖中黃色方塊表示藥材,綠色圓表示歸經(jīng)。途中連接最密切的三個(gè)節(jié)點(diǎn)是肺 lung)、脾(spleen)和胃(stomach),連接度分別是8,8,8,說明大多數(shù)藥材的歸經(jīng)是肺經(jīng)、脾經(jīng)和胃經(jīng)。清瘟解熱合劑中13味中藥大部分中藥歸肺、脾、胃三經(jīng),說明可能對由“濕熱”導(dǎo)致的新型冠狀病毒肺炎具有很好的治療作用,見圖5。

    表4 KEGG富集通路分析結(jié)果

    圖4 清瘟解熱合劑治療新型冠狀病毒肺炎“成分-靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖

    圖5 清瘟解熱合劑藥材-歸經(jīng)網(wǎng)絡(luò)圖

    3 討論

    自新型冠狀病毒肺炎爆發(fā)以來,全國疫情防控阻擊戰(zhàn)取得重大戰(zhàn)略成果,然而世界范圍內(nèi),情況依然不容樂觀。針對新型冠狀病毒肺炎,目前臨床還沒有特效藥。雖然有報(bào)道稱已經(jīng)篩選了部分藥物用于臨床,但其是否有確切的治療作用尚不明確,部分藥物還處于試驗(yàn)階段,不能廣泛運(yùn)用于治療中。中醫(yī)藥作為我國的傳統(tǒng)醫(yī)藥,在疫病的防治上具有獨(dú)特的見解。2003年,中醫(yī)藥用于重癥急性呼吸綜合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)治療的有效性和安全性得到了廣泛的認(rèn)可[14]。吳鞠通的《溫病條辨》云:“溫疫者,厲氣流行,多兼穢濁,家家如是,若役使然也?!盵4]新型冠狀病毒肺炎中醫(yī)范疇屬于“疫病”,致病原因多為外感疫毒邪氣,入里化熱,在臨床上以“急則治標(biāo),緩則治本,標(biāo)本兼治”作為治療原則,祛邪外出的同時(shí)兼顧扶助正氣。最新發(fā)布的《新型冠狀病毒肺炎診治方案(試行第七版)》[15]指出,患者以發(fā)熱、干咳、乏力為主要表現(xiàn),少數(shù)患者伴有鼻塞、流涕、咽痛、肌痛和腹瀉等癥狀。從中醫(yī)的角度分析,其病位在肺,兼在脾胃,病因?yàn)椤皾穸疽摺?,因邪氣侵肺,耗傷衛(wèi)氣而出現(xiàn)發(fā)熱、咽痛咳嗽;濕邪困脾而導(dǎo)致大便黏膩臭穢或便溏腹瀉。根據(jù)中醫(yī)理論分析,清瘟解熱合劑中的藥物多歸肺脾胃經(jīng),主要治療邪犯肺衛(wèi)、濕邪困脾。半夏、藿香辛溫歸脾胃肺經(jīng),能化濕止嘔;茵陳清利濕熱;草果燥濕溫中,截瘧祛痰;連翹、黃芩苦寒,清熱解毒、疏散風(fēng)熱、燥濕;柴胡疏散退熱,升舉陽氣;甘草補(bǔ)脾益氣,抵抗病邪;馬蹄香、滑石、白薇能利尿通淋;厚樸燥濕行氣、消痰平喘;神曲能消食和胃。使用此方能清熱化濕,芳香避穢,燥濕止瀉,在臨床治療患者具有良好的療效。

    基于臨床治療結(jié)果,部分SARS-CoV-2感染者后期病癥加重,甚至出現(xiàn)死亡的情況,可能與“炎癥風(fēng)暴”有關(guān),而“炎癥風(fēng)暴”的本質(zhì)是細(xì)胞因子風(fēng)暴(cytokine storm)。細(xì)胞因子在人體中有著重要的作用,調(diào)控細(xì)胞增殖和分化、血管發(fā)生、免疫和炎癥反應(yīng)等。當(dāng)患者感染病毒后,血清中的促炎因子會(huì)增加,從而導(dǎo)致肺部炎癥和相應(yīng)的肺組織損傷。過度的免疫反應(yīng)激活大量的免疫細(xì)胞,對肺泡上皮細(xì)胞和毛細(xì)血管造成彌漫性損傷,大量液體滲出到氣管中阻塞氣道,從而造成呼吸窘迫[16]。蛋白互作分析結(jié)果表明,IL6、TNF、CCL2、MAPK1等可能為清瘟解熱合劑治療COVID-19的核心靶點(diǎn)。此外,通過比較KEGG通路富集分析的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)這些核心靶點(diǎn)顯著富集在IL-17信號通路、Th17細(xì)胞分化、腫瘤壞死因子信號通路等通路上。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)是一種細(xì)胞中的重要信號傳導(dǎo)分子[17],在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用,MAPK激活后可促進(jìn)細(xì)胞癥因子表達(dá)[18-19]。與此同時(shí),一些促炎性因子如TNF-α、IL6等,都可以激活MAPK通路從而加劇炎癥反應(yīng)[17]。在炎癥反應(yīng)中,TNF-α是一種出現(xiàn)最早、最重要的炎性因子,主要由單核巨噬細(xì)胞以及其它免疫細(xì)胞產(chǎn)生。在機(jī)體感染病毒時(shí),TNF-α可通過激活 T細(xì)胞促進(jìn) IL-1、IL-6、IL-8和IL-12等細(xì)胞因子的產(chǎn)生及分泌,從而介導(dǎo)一系列炎性反應(yīng)[20]。CC趨化因子配體2(CCL2)是CC類趨化因子家族的成員,是人類發(fā)現(xiàn)最早的、有活性的趨化因子。當(dāng)CCL2與其相應(yīng)受體結(jié)合后可活化單核/巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和Th2細(xì)胞,并向炎癥部位聚集。有研究表明由支氣管上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的CCL2可能會(huì)加重氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性[21]。對肺炎患者血清中的細(xì)胞因子進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)重癥患者血清中的IL-6、TNF-α等明顯高于非重癥患者,這說明這些患者癥狀的加重與這些細(xì)胞因子的升高有關(guān)。Th17細(xì)胞是新型CD4+T細(xì)胞亞群,在免疫調(diào)節(jié)方面具有至關(guān)重要的作用,Th17細(xì)胞可以分泌IL-6、TNF-α和IL-17等多種效應(yīng)因子,并通過其來介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。IL-6可以調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的數(shù)目并誘導(dǎo)其發(fā)育[22]。因此,清瘟解熱合劑可能通過調(diào)控這些通路改善COVID-19患者的炎癥反應(yīng)。

    綜上所述,本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法對清瘟解熱合劑中有效成分治療新型冠狀病毒肺炎的作用進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,清瘟解熱合劑可能是通過多成分、多靶點(diǎn)、多通路來協(xié)同作用的。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是大數(shù)據(jù)時(shí)代下的新興的學(xué)科,通過虛擬篩選技術(shù)初探了清瘟解熱合劑對COVID-19的治療作用機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù),但由于研究方法本身具有局限性,需要在臨床中進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

    猜你喜歡
    合劑靶點(diǎn)通路
    維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點(diǎn)
    中老年保健(2021年3期)2021-12-03 02:32:25
    腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點(diǎn)
    石硫合劑熬制與保存
    河北果樹(2020年2期)2020-05-25 06:58:58
    HPLC法同時(shí)測定退銀合劑中6種成分
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:54
    HPLC法同時(shí)測定二陳合劑中8種成分
    中成藥(2017年7期)2017-11-22 07:33:11
    Kisspeptin/GPR54信號通路促使性早熟形成的作用觀察
    心力衰竭的分子重構(gòu)機(jī)制及其潛在的治療靶點(diǎn)
    proBDNF-p75NTR通路抑制C6細(xì)胞增殖
    通路快建林翰:對重模式應(yīng)有再認(rèn)識
    氯胺酮依賴腦內(nèi)作用靶點(diǎn)的可視化研究
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:16
    香蕉丝袜av| 高清av免费在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 欧美国产精品va在线观看不卡| 99久久人妻综合| 91成人精品电影| 欧美黑人欧美精品刺激| 日韩av在线免费看完整版不卡| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 国产av国产精品国产| 在线观看www视频免费| 国产真人三级小视频在线观看| 人体艺术视频欧美日本| 免费人妻精品一区二区三区视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av线在线观看网站| 欧美激情极品国产一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 久久久久精品国产欧美久久久 | 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 老司机靠b影院| 黄片小视频在线播放| 国产精品 国内视频| 在线av久久热| 午夜日韩欧美国产| 91字幕亚洲| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 一区在线观看完整版| 久久久久精品国产欧美久久久 | 国产爽快片一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一级,二级,三级黄色视频| 国产激情久久老熟女| a级毛片黄视频| 天天影视国产精品| 欧美激情高清一区二区三区| 性少妇av在线| 美女福利国产在线| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 91国产中文字幕| 青春草亚洲视频在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 日韩精品免费视频一区二区三区| 男女免费视频国产| 中文字幕色久视频| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲少妇的诱惑av| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 啦啦啦在线免费观看视频4| 飞空精品影院首页| 老汉色av国产亚洲站长工具| 中文欧美无线码| 在线观看国产h片| 99热全是精品| 亚洲av美国av| 中文欧美无线码| 高潮久久久久久久久久久不卡| 免费看av在线观看网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 秋霞在线观看毛片| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产黄色免费在线视频| 久久国产精品人妻蜜桃| 亚洲欧美一区二区三区国产| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日韩av不卡免费在线播放| 夫妻午夜视频| 久热爱精品视频在线9| 赤兔流量卡办理| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 成人影院久久| 在线观看www视频免费| 国产在线视频一区二区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国精品久久久久久国模美| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲成色77777| 性少妇av在线| 高清欧美精品videossex| 天天影视国产精品| 精品福利永久在线观看| 午夜久久久在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品国产av在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美精品一区二区免费开放| 狂野欧美激情性xxxx| 亚洲精品久久午夜乱码| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久国产精品影院| 老汉色∧v一级毛片| 精品一品国产午夜福利视频| 人体艺术视频欧美日本| 一区在线观看完整版| 国产精品欧美亚洲77777| 99九九在线精品视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 亚洲九九香蕉| 亚洲美女黄色视频免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 美女福利国产在线| 丝袜在线中文字幕| 国产成人一区二区在线| a级毛片在线看网站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久久久精品国产欧美久久久 | 两个人看的免费小视频| 美国免费a级毛片| 晚上一个人看的免费电影| 国产伦理片在线播放av一区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 啦啦啦在线免费观看视频4| 成年av动漫网址| 波野结衣二区三区在线| 两人在一起打扑克的视频| 日本av手机在线免费观看| 亚洲熟女毛片儿| 熟女av电影| 国产精品 国内视频| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲一区中文字幕在线| 日本五十路高清| 亚洲成色77777| 亚洲av男天堂| 欧美性长视频在线观看| avwww免费| 日韩av在线免费看完整版不卡| 成人影院久久| 婷婷色av中文字幕| 岛国毛片在线播放| 午夜老司机福利片| 一区二区三区乱码不卡18| tube8黄色片| 老司机影院毛片| 日本色播在线视频| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产高清视频在线播放一区 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日本午夜av视频| 国产激情久久老熟女| 欧美亚洲日本最大视频资源| h视频一区二区三区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 国产成人av教育| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲三区欧美一区| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲欧洲国产日韩| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 激情五月婷婷亚洲| 水蜜桃什么品种好| av欧美777| 久久99一区二区三区| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美国产精品va在线观看不卡| 午夜影院在线不卡| 日韩一本色道免费dvd| 欧美久久黑人一区二区| 999久久久国产精品视频| 大陆偷拍与自拍| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 免费看十八禁软件| 国产视频首页在线观看| 精品福利观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产精品二区激情视频| 国产精品av久久久久免费| 最黄视频免费看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 美女大奶头黄色视频| 国产精品人妻久久久影院| 一级毛片我不卡| 99久久人妻综合| 亚洲成色77777| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 日日摸夜夜添夜夜爱| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 久久精品成人免费网站| 欧美另类一区| 色综合欧美亚洲国产小说| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 精品久久久精品久久久| 啦啦啦啦在线视频资源| 热99久久久久精品小说推荐| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产精品一区二区免费欧美 | 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 嫁个100分男人电影在线观看 | kizo精华| 超色免费av| 精品第一国产精品| 99热全是精品| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲九九香蕉| 伊人亚洲综合成人网| 99热国产这里只有精品6| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 午夜免费鲁丝| 欧美精品亚洲一区二区| 国产高清视频在线播放一区 | 女人久久www免费人成看片| 两个人免费观看高清视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 老司机在亚洲福利影院| 精品视频人人做人人爽| 99国产精品一区二区蜜桃av | 啦啦啦视频在线资源免费观看| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲天堂av无毛| 丁香六月欧美| www.自偷自拍.com| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产又爽黄色视频| av网站免费在线观看视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 一级黄色大片毛片| 蜜桃在线观看..| 成人手机av| av在线播放精品| 极品少妇高潮喷水抽搐| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲免费av在线视频| netflix在线观看网站| 另类精品久久| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产精品成人在线| 青青草视频在线视频观看| 国产成人欧美| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲免费av在线视频| www日本在线高清视频| 精品视频人人做人人爽| 中国美女看黄片| 91老司机精品| 久久久久久久国产电影| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产成人91sexporn| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 秋霞在线观看毛片| 成年人免费黄色播放视频| 黄色片一级片一级黄色片| 精品高清国产在线一区| 亚洲第一青青草原| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 午夜福利在线免费观看网站| 精品一区二区三区av网在线观看 | 一二三四在线观看免费中文在| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 天堂8中文在线网| 久久亚洲精品不卡| 两人在一起打扑克的视频| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产在视频线精品| 九草在线视频观看| 欧美久久黑人一区二区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美日韩亚洲高清精品| 麻豆av在线久日| 午夜福利影视在线免费观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 一级片免费观看大全| 亚洲男人天堂网一区| 久久99精品国语久久久| 看免费av毛片| 涩涩av久久男人的天堂| 免费观看人在逋| 成人影院久久| 日本五十路高清| 国产精品 国内视频| 国产免费视频播放在线视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 亚洲欧美精品自产自拍| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 妹子高潮喷水视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产片内射在线| 亚洲精品国产av蜜桃| 亚洲欧美精品自产自拍| 青春草亚洲视频在线观看| 黄色 视频免费看| 亚洲成色77777| 国产激情久久老熟女| 999精品在线视频| 五月开心婷婷网| 老汉色av国产亚洲站长工具| 久久久精品免费免费高清| 午夜福利免费观看在线| 欧美日韩视频精品一区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 少妇 在线观看| 人妻一区二区av| 制服诱惑二区| 亚洲成人手机| 亚洲第一av免费看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 高潮久久久久久久久久久不卡| 三上悠亚av全集在线观看| 丝袜美足系列| 免费在线观看黄色视频的| 伦理电影免费视频| 老汉色∧v一级毛片| 久久久国产精品麻豆| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产不卡av网站在线观看| 69精品国产乱码久久久| 国产成人精品久久二区二区免费| av在线老鸭窝| 美女大奶头黄色视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 自线自在国产av| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 美女视频免费永久观看网站| 欧美日韩av久久| 香蕉丝袜av| 国产免费一区二区三区四区乱码| 看十八女毛片水多多多| 国产1区2区3区精品| 啦啦啦 在线观看视频| 午夜免费鲁丝| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久综合国产亚洲精品| 国产伦理片在线播放av一区| 青春草亚洲视频在线观看| 免费看不卡的av| 一级毛片电影观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲国产看品久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 午夜福利视频在线观看免费| 成人国语在线视频| 少妇精品久久久久久久| 狂野欧美激情性xxxx| 丝袜喷水一区| 成人国语在线视频| 一个人免费看片子| 精品久久蜜臀av无| 国产xxxxx性猛交| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 成人国语在线视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 日韩大片免费观看网站| 91成人精品电影| 欧美黄色淫秽网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 狂野欧美激情性xxxx| 搡老岳熟女国产| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 国产xxxxx性猛交| 午夜激情久久久久久久| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品国产av在线观看| 欧美精品av麻豆av| 亚洲av美国av| 高潮久久久久久久久久久不卡| www.999成人在线观看| 久久青草综合色| 在线天堂中文资源库| 中文字幕av电影在线播放| 看十八女毛片水多多多| 午夜91福利影院| 国产精品av久久久久免费| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久人妻熟女aⅴ| 五月天丁香电影| 亚洲av欧美aⅴ国产| 下体分泌物呈黄色| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 久久久久国产精品人妻一区二区| 嫁个100分男人电影在线观看 | 一级毛片 在线播放| 丝袜喷水一区| 一边亲一边摸免费视频| 国产又色又爽无遮挡免| 久久综合国产亚洲精品| 国产欧美亚洲国产| 9191精品国产免费久久| 精品免费久久久久久久清纯 | 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 大香蕉久久成人网| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日本一区二区免费在线视频| av在线app专区| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美97在线视频| svipshipincom国产片| h视频一区二区三区| 久久ye,这里只有精品| 高清视频免费观看一区二区| 国精品久久久久久国模美| 免费高清在线观看日韩| 国产精品熟女久久久久浪| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲三区欧美一区| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲图色成人| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 午夜免费鲁丝| 免费高清在线观看日韩| 亚洲精品日本国产第一区| 一级,二级,三级黄色视频| 性色av一级| 免费在线观看黄色视频的| 新久久久久国产一级毛片| 成人三级做爰电影| 18禁国产床啪视频网站| 中文字幕av电影在线播放| 99国产综合亚洲精品| 亚洲一区中文字幕在线| 免费人妻精品一区二区三区视频| 三上悠亚av全集在线观看| 免费不卡黄色视频| 精品一品国产午夜福利视频| 久久久久久久久免费视频了| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 久久精品人人爽人人爽视色| 老司机深夜福利视频在线观看 | videosex国产| 99九九在线精品视频| 国产福利在线免费观看视频| 在线观看www视频免费| 少妇人妻 视频| 飞空精品影院首页| 免费观看a级毛片全部| 2021少妇久久久久久久久久久| 一区二区三区四区激情视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| bbb黄色大片| 中文字幕制服av| 在线观看免费日韩欧美大片| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产精品av久久久久免费| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久毛片免费看一区二区三区| 91麻豆av在线| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 免费av中文字幕在线| 男人添女人高潮全过程视频| 首页视频小说图片口味搜索 | 亚洲av男天堂| 日本五十路高清| 搡老乐熟女国产| 国产真人三级小视频在线观看| 中文字幕色久视频| 日本91视频免费播放| e午夜精品久久久久久久| 午夜免费成人在线视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 三上悠亚av全集在线观看| 69精品国产乱码久久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 大香蕉久久成人网| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 一级,二级,三级黄色视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 交换朋友夫妻互换小说| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲欧美精品自产自拍| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 中文字幕人妻丝袜制服| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产淫语在线视频| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美97在线视频| 日韩av免费高清视频| 久久天堂一区二区三区四区| 人人澡人人妻人| 国产精品九九99| 精品高清国产在线一区| 精品久久久久久久毛片微露脸 | 久久 成人 亚洲| 久久女婷五月综合色啪小说| netflix在线观看网站| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 青春草视频在线免费观看| √禁漫天堂资源中文www| 日韩视频在线欧美| √禁漫天堂资源中文www| 热99久久久久精品小说推荐| 久久久久精品国产欧美久久久 | 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | www.精华液| 精品视频人人做人人爽| 久久久国产一区二区| 日韩欧美一区视频在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久精品免费免费高清| 高清av免费在线| 精品人妻在线不人妻| 欧美大码av| 深夜精品福利| av在线播放精品| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | av在线老鸭窝| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久亚洲精品不卡| 欧美精品av麻豆av| 高清视频免费观看一区二区| 免费在线观看日本一区| 久久鲁丝午夜福利片| 美女福利国产在线| 成人亚洲精品一区在线观看| 大片免费播放器 马上看| 最近中文字幕2019免费版| 超碰成人久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品偷伦视频观看了| 飞空精品影院首页| 国产成人av教育| 十八禁高潮呻吟视频| 久久久久国产一级毛片高清牌| 在线观看免费视频网站a站| 欧美精品av麻豆av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 在线观看免费高清a一片| 99国产综合亚洲精品| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲国产精品国产精品| 制服人妻中文乱码| 黄频高清免费视频| 国产高清视频在线播放一区 | 一级a爱视频在线免费观看| 少妇人妻 视频| 1024香蕉在线观看| 国产精品久久久久成人av| 麻豆国产av国片精品| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲精品一区蜜桃| 人人澡人人妻人| 国产成人精品久久二区二区91| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 高清av免费在线| 国产精品一区二区在线观看99| 日韩一区二区三区影片| 日韩大片免费观看网站| 国产一区二区三区综合在线观看| 午夜激情av网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 老司机亚洲免费影院| 又大又黄又爽视频免费| 久久久欧美国产精品| 人妻人人澡人人爽人人| 男人操女人黄网站| 人妻 亚洲 视频| 一本久久精品| 免费观看a级毛片全部| 人妻 亚洲 视频| 亚洲精品国产av成人精品| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 一区二区三区精品91| 亚洲第一av免费看| 男男h啪啪无遮挡| 在线观看免费日韩欧美大片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 丁香六月欧美| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 搡老岳熟女国产| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品成人在线| h视频一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 婷婷色综合大香蕉| 国产午夜精品一二区理论片| 欧美人与性动交α欧美软件| 又大又黄又爽视频免费| 免费在线观看完整版高清| 手机成人av网站| 桃花免费在线播放| 成年人免费黄色播放视频| 一级黄片播放器| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产一区二区激情短视频 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 九色亚洲精品在线播放|