高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)蔬菜中矮壯素檢測(cè)方法的優(yōu)化

□ 姜 亮 山東中正食品科技檢測(cè)有限公司

《GB/T 20769—2008》中矮壯素方法檢出限太低，基質(zhì)復(fù)雜，試驗(yàn)難度大。經(jīng)過(guò)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，矮壯素易溶于水，極性較強(qiáng)，前處理過(guò)程中提取效率極差，反相C18柱對(duì)其基本不保留，溶劑效應(yīng)較強(qiáng)，所以如何解決回收率低，基質(zhì)效應(yīng)強(qiáng)的問(wèn)題是該實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn)。本文通過(guò)加標(biāo)樣品，用液相色譜—質(zhì)譜法進(jìn)行定量實(shí)驗(yàn)，對(duì)樣品前處理方法和液相色譜條件進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化，以期在保證靈敏度和準(zhǔn)確度的前提下，節(jié)約成本，提高效率。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

矮 壯 素（標(biāo) 準(zhǔn) 品，100 μg/mL，CAS 號(hào)：999—81—5）：農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所；甲醇（HPLC）、乙腈（HPLC）：瑞典歐普森化工有限公司；甲酸（分析純，含量≥88%，配制成0.1%水溶液）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；試驗(yàn)用水為符合GB/T 6682—2008 規(guī)定的一級(jí)水。

蔬菜樣品均為平時(shí)檢測(cè)的陰性樣品。

1.2 儀器與設(shè)備

TSQ Quantum Ultraemr 液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀，配有Thermo FisherU3000 液相色譜儀、電噴霧離子源及Thermo LC quan 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：美國(guó)Thermo Fisher 科技公司；XY1000—2C 電子分析天平：常州市幸運(yùn)電子設(shè)備有限公司。

1.3 方法

1.3.1 試樣制備

蔬菜的取樣量按照GB/T 8855—2008 的規(guī)定，抽取蔬菜樣品可食部分切碎，混勻，密封，作為試樣，表明標(biāo)記，樣品取樣部位按照GB/T 2763—2019 的規(guī)定執(zhí)行[1]。

1.3.2 試樣保存

將試樣置于0 ～4 ℃條件下冷藏保存。

1.3.3 樣品前處理

稱取經(jīng)均漿處理的樣品10 g（精確至0.01 g）于50 mL 聚丙烯離心管內(nèi)，加入20 mL 甲醇∶水=1 ∶1，用高速勻漿機(jī)在15 000 r/min 勻漿提取1 min，在8 000 r/min 離心5 min，取上清液10 mL，經(jīng)QuEChERS 固相萃取柱凈化，在8 000 r/min 離心5 min，吸取1.5 mL 過(guò)0.22 μm 濾膜，供高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

1.4 空白試驗(yàn)

除不加試料外，按上述步驟的規(guī)定進(jìn)行平行操作。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.1.1 提取液的優(yōu)化

由于矮壯素易溶于水，極性較強(qiáng)，前處理過(guò)程中提取效率極差，通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，含水量大的農(nóng)產(chǎn)品回收率要大于含水量少的，所以在前處理過(guò)程中加入一定量的水，有助于回收率的提高。提取液選取乙腈∶水=1 ∶1和甲醇∶水1 ∶1 作為基礎(chǔ)提取液，經(jīng)前處理及儀器分析發(fā)現(xiàn)甲醇∶水=1 ∶1 對(duì)于含水量大的農(nóng)產(chǎn)品的回收率要高于乙腈∶水=1 ∶1，含水量少的回收率差別不大，所以選用甲醇+水=1 ∶1[2]。

2.1.2 凈化條件的優(yōu)化

QuEChERS 固相萃取柱能有效凈化樣品，但目標(biāo)物矮壯素有一部分會(huì)被吸附，所以本實(shí)驗(yàn)只采用0.22 μmPTFE 濾膜過(guò)濾，用于液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀分析。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將矮壯素標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇適當(dāng)稀釋后，用空白樣品提取液分別配成矮壯素濃度為5.0 、10.0、25.0、50.0 ng/mL與100.0 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。線性方程為Y=25 718x+54 292.1，在5.0 ～100.0 ng/mL 線性范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)為0.995 3。空白基質(zhì)提取液校準(zhǔn)曲線有效降低了基質(zhì)效應(yīng)的影響，提高了回收率。

2.3 回收率和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)CV

選取矮壯素呈陰性的白蘿卜，添加最低可接受濃度的矮壯素標(biāo)準(zhǔn)溶液，按試驗(yàn)方法制備樣品溶液，在最佳色譜條件下平行測(cè)定10 次，計(jì)算回收率和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)CV。矮壯素的加標(biāo)回收率在57.9%～62.6%，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)CV 為0.49，回收率和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)CV 良好。

3 結(jié)論

本文在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《GBT 20769—2008 水果和蔬菜中 450 種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法》的基礎(chǔ)上，建立了蔬菜中矮壯素的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。探究了溶劑對(duì)目標(biāo)物質(zhì)提取率的影響，確定了最佳的溶劑比例；改進(jìn)了凈化方法，保證了矮壯素的檢測(cè)質(zhì)量。