毛脈酸模石油醚和乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究

常豐華

(吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院·吉林吉林·132101)

毛脈酸模（Rumex gmelini Turcz.）為蓼科酸模屬多年生草本植物，是我國黑龍江、吉林等省份長白山地區(qū)的常用藥用資源植物，自然資源蘊藏量豐富[1]。民間以根入藥，用于淋病、上呼吸道感染、癬病和瘡毒等疾病的治療[2]。毛脈酸模作為一味民間草藥，國內(nèi)外相關(guān)研究報道較少，通過藥理研究發(fā)現(xiàn)毛脈酸模具有良好的抗病原微生物、抗氧化、抗腫瘤、減輕急性肺損傷和降壓等作用[3-5]。此外，毛脈酸模乙酸乙酯部位對心肌細胞缺血性損傷具有顯著的保護作用，其機制可能與降低心肌耗氧、清除氧自由基、抗心肌脂質(zhì)過氧化等有關(guān)，但是具體有效物質(zhì)或有效成分尚不明確[6]。本實驗對毛脈酸模石油醚和乙酸乙酯部位的化學(xué)成分進行了系統(tǒng)的提取、分離及鑒定，為今后進行主要藥效學(xué)和藥代動力學(xué)的研究，及安全性的早期評價，并進一步闡明毛脈酸模乙酸乙酯部位保護心肌有效單體化合物奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)，從而為其新藥的研發(fā)和申報提供了重要的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

ZF-I型三用紫外分析儀；INOVA-600型超導(dǎo)核磁共振光譜儀；BRUKER AV-500MHz型超導(dǎo)核磁共振光譜儀；薄層層析硅膠、柱層析硅膠200～300目（青島海洋化工廠）；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠 （美國GE）；薄層色譜用硅膠板（TLC Silica gel 60 F254）、高效硅膠薄層層析板（HPTLC silica gel 60）（德國Merck公司產(chǎn)品）；HPLC采用的甲醇為色譜純，水為重蒸水；顯色劑為10%的H2SO4乙醇溶液。

毛脈酸模原藥材，采自吉林左家地區(qū)，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院中藥學(xué)院中草藥栽培與鑒定教研室鑒定為毛脈酸模(Rumex gmelini Turcz.)。

2 提取與分離

取干燥毛脈酸模根及根莖10kg，粉碎置回流提取器中，加8倍量50%乙醇溶液連續(xù)回流提取3次（分別為 3h，2h，1h），合并濾液，減壓濃縮后干燥至恒重，粉碎成干粉，所得粉末為毛脈酸模50%乙醇提取物。所得提取物加入60倍量蒸餾水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯系統(tǒng)溶劑萃取,分別得到石油醚和乙酸乙酯部位，將萃取部位濃縮至浸膏。取石油醚萃取部位7.5g，采用硅膠（200～300目）柱層析法，以石油醚-乙酸乙酯系統(tǒng)（100∶1）進行反復(fù)洗脫，得到化合物1。取乙酸乙酯萃取部位300g，采用硅膠（100～200目）柱層析法，以二氯甲烷-甲醇系統(tǒng)（50∶1、30∶1、15∶1、10∶1）進行梯度洗脫，TLC示蹤合并相同流分，得4個組分Fr.Ⅰ～Fr.Ⅳ。 Fr.Ⅰ、Fr.Ⅱ反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析(200～300目)分離和純化，得到化合物 2～4。 Fr.Ⅲ、Fr.Ⅳ再反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析 (200～300目)、Sephadex LH-20凝膠柱層析等進一步分離和純化，得到化合物5～7。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：黃色針狀結(jié)晶 （EtOAc），mp 164～166℃。 分子式為 C13H12O3。1H-NMR(CDCl3，600MHz)δ：7.47（1H，d，J=8.0Hz，H-6），7.06（1H，m，H-7），6.97（1H，s，H-5），6.84（1H，d，J=8.0Hz，H-8），2.75（3H，s，H-12）,2.64（3H，s，H-13）。 以上數(shù)據(jù)與文獻報道的酸模素[7]一致，確定為酸模素（nepodin）。

化合物 2：白色針狀晶體 (CHCl3)，mp 139.5～142℃，分子式為C29H50O。

1H-NMR (CDCl3，500MHz) δ：5.36 （1H，dd，J=1.8,3.6Hz，H-6），3.52（1H,m，H-3），2.29～1.05(29H,m)，0.94～0.68（3H×6，H-18，H-19，H-21，H-26，H-27，H-29）。13C-NMR（CDCl3，500Mz）給出 29 個 C 信號分別將其進行歸屬顯示，δ：140.9（C-5），121.8（C-6），77.3（C-3），77.1（C-14），76.9（C-17），71.9（C-9），56.9（C-4），56.2（C-13），50.3（C-12），46.0（C-24），42.5（C-1），39.9（C-10），37.4(C-20)，36.6(C-7)，36.3(C-16)，34.1（C-2），32.0（C-8），31.8（C-11），29.3（C-15），28.4（C-22），26.3（C-23），24.4（C-27），23.2（C-28），21.2（C-19），19.9（C-25），19.5（C-21），19.2（C-29），18.9（C-26），12.0（C-18）。 以上數(shù)據(jù)與文獻報道的 β-谷甾醇[8]一致，故確定化合物2為β-谷甾醇（β-sitosterol）。

化合物 3：黃色結(jié)晶(CHCl3)，mp 195～196℃，分子式為 C15H10O4。

1H-NMR(CDCl3，500MHz) δ：12.10（1H，s，H-1），12.00 （1H，s，H-8）,7.81 （1H，d，J=7.5Hz，H-5），7.68（1H，t，J=8.0Hz，H-6），7.65 （1H，d，J=1.5Hz，H-4），7.29 （1H，d，J=8.2Hz，H-7），7.09 （1H，d，J=1.5Hz，H-2），2.46（3H，s，CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的大黃酚[7]一致，故確定化合物3為大黃酚（chrysophanol）。

化合物 4：黃色針狀結(jié)晶(CHCl3)，mp 202～204℃，分子式為C16H12O5。

1H-NMR (CDCl3，500MHz) δ：7.62 （1H，d，J=2.2Hz，H-4），7.36 （1H，d，J=2.2Hz，H-2），7.08（1H，d，J=2.5Hz，H-5），6.68 （1H，d，J=2.5Hz，H-7），3.94（3H，s，OCH3），2.45（3H，s，CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的大黃素甲醚[7]一致，故確定化合物4為大黃素甲醚（physcion）。

化合物5： 桔紅色針狀結(jié)晶 （EtOAc），mp 255～257℃，分子式為 C15H10O5。

1H-NMR (DMSO，500MHz) δ：7.45 （1H，d，J=2.3Hz，H-4），7.17 （1H，d，J=2.0Hz，H-5），7.06（1H，d，J=2.3Hz，H-2），6.58 （1H，d，J=2.0Hz，H-7），2.39（3H，s，CH3）。13C-NMR（DMSO，500Mz）δ：189.6（C-9），181.2（C-10）；124.0（C-2），120.3（C-4），108.8（C-5），107.8（C-7），21.4（CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的大黃素[7]一致，故確定化合物5為大黃素（emodin）。

化合物6：白色針狀晶體 （CH3OH），mp 164～166℃，分子式為 C19H22O8。

1H-NMR （CD3OD，500MHZ）δ:7.43(1H，d，J=8.0Hz，H-4),7.37(1H，t，J=7.5，8.0Hz，H-3),7.33(1H，d，J=7.5Hz，H-2),7.15(1H，s，H-5),5.12(1H，d，J=8.0Hz，H-1′),3.43～3.95(6H，m，H-2′～6′),2.29(3H，s，H-12)，2.60(3H,s，H-13)。13C-NMR（CD3OD，500MHZ）δ:208.2（C-11），156.1（C-1），152.8（C-8），138.1（C-10），134.6（C-6），128.5（C-3），126.1（C-7），123.8（C-4），120.9（C-5），114.9（C-9），111.8（C-2），104.9（C-1′），62.5～78.8(C-2′～6′),32.3（C-12），19.8（C-13）。 以上數(shù)據(jù)與文獻報道的酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷[9]一致，故確定化合物6為酸模素-8-O-β-D-葡萄糖苷（nepodin-8-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物7：白色針狀結(jié)晶 （CH3OH），mp 256～257℃，分子式為C14H12O3。紫外燈（365nm）下顯藍紫色熒光。三氯化鐵—鐵氰化鉀反應(yīng)呈陽性。

1H-NMR (CD3OD，500MHz) δ：7.35 （2H，d，J=8.5Hz，H-2′，H-6′），6.93(1H，d，J=16.3Hz，乙烯 H-β），6.81 （1H，d，J=16.3Hz， 乙烯 H-α），6.75 （2H，d，J=8.5Hz，H-3′，H-5′），6.44（2H，d，J=2.0Hz，H-2，H-6），6.16 （1H，t，H-4）。13C-NMR（CD3OD，500Mz）δ：159.6（C-3，C-5），158.3（C-4′），141.3（C-1），129.4（C-1′）,128.7(C-2′，C-6′)，128.7 （C-β），127.0 （C-α），116.4（C-3′，C-5′），105.8 （C-2，C-6），102.6 （C-4）。結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)，將其數(shù)據(jù)與文獻報道的白藜蘆醇[10]的數(shù)據(jù)進行比較，發(fā)現(xiàn)二者基本一致，故確定化合物7為白藜蘆醇（resveratrol）。

4 討論

研究結(jié)果表明，毛脈酸模石油醚和乙酸乙酯部位主要包括蒽醌類、黃酮類、二苯乙烯類、萘類衍生物等多種類型化學(xué)成分。其中，酸模素、大黃酚、大黃素和白藜蘆醇的含量極高，可作為以上物質(zhì)的資源植物加以開發(fā)利用。在分離鑒定出的7個化合物中，化合物2,6均為首次從毛脈酸模植物中分離得到。