進(jìn)境茶梅中山茶葉杯菌的檢疫鑒定

段維軍，段麗君，劉芳，呂燕，趙鵬，蔡磊

(1.寧波檢驗(yàn)檢疫科學(xué)技術(shù)研究院，浙江寧波 315012；2.中華人民共和國(guó)寧波海關(guān)，浙江寧波 315012；3.寧波中盛產(chǎn)品檢測(cè)有限公司，浙江寧波 315012；4.中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，北京 100101)

茶梅Camellia sasanqua是山茶科Camelliaceae山茶屬Camellia植物[1]，冬季和春季開(kāi)花，盛花期在冬季，是寒冬時(shí)期少有的開(kāi)花植物，具有較高觀賞價(jià)值[2]。茶梅既可與多種植物搭配作為綠色景觀使用，也可作為家裝植物，供室內(nèi)觀賞，用途廣泛[3]。近年來(lái)，由于國(guó)內(nèi)綠化美化產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，我國(guó)從日本進(jìn)口茶梅數(shù)量不斷增加，同時(shí)伴隨著攜帶有害生物入侵的隱患也日益加大，需高度重視。

山茶花腐病是山茶屬植物最嚴(yán)重的病害[4]。1919年，Hara將日本首次發(fā)現(xiàn)的山茶花腐病病原命名為山茶核盤(pán)菌Sclerotinia camelliaeHara，隸屬于核盤(pán)菌科Sclerotiniaceae[5]。1940年，美國(guó)加利福尼亞州多個(gè)山茶屬植物苗圃也報(bào)道了該病的發(fā)生，由于20世紀(jì)初期信息傳播受限，在不了解Hara所做工作的情況下，Hansen＆Thomas將該病病原命名為Sclerotinia camelliaeHansen＆Thomas[6]。但不久，Hansen＆Thomas發(fā)現(xiàn)他們所描述的山茶花腐病病原的子囊和子囊孢子比Hara所描述的種要小一些[7]。1945年，Whetzel將核盤(pán)菌科劃分為14個(gè)屬[8]，其中的葉杯菌屬Ciborinia的主要特點(diǎn)在于所產(chǎn)生的菌核與寄主組織部分或全部緊密結(jié)合在一起；而該科其它產(chǎn)菌核的真菌，如引起作物菌核病的核盤(pán)菌屬SclerotiniaFuckel，引起果樹(shù)葉、花和果實(shí)病害的鏈核盤(pán)菌屬M(fèi)oniliniaHoney，以及引起蔬菜和其它作物病害的葡萄孢盤(pán)菌屬BotryotiniaWhetzel，它們的菌核均單獨(dú)產(chǎn)生，不能與寄主組織緊密結(jié)合在一起[9]。1979年，Kohn比較Hara的模式標(biāo)本和從加利福尼亞新鮮采集的標(biāo)本，推斷它們是兩個(gè)不同的種類，并將加利福尼亞的標(biāo)本命名為Ciborinia camelliaeKohn[10]。但1984年，Kohn＆Nagasawa研究Sclerotinia camelliaeHara和Ciborinia camelliaeKohn的模式標(biāo)本后，提出這二種標(biāo)本為同物異名的觀點(diǎn)[11]。按照目前的分類系統(tǒng)，山茶葉杯菌隸屬于真菌界Fungi子囊菌門(mén)Ascomycota子囊菌綱Ascomycetes柔膜菌目Helotiales核盤(pán)菌科Sclerotiniaceae 葉杯菌屬Ciborinia[9，12]，應(yīng)采用Ciborinia camelliaeKohn一名。

山茶葉杯菌Ciborinia camelliaeKohn(異名Sclerotinia camelliaeHara)只侵染山茶花Camellia japonica、南山茶Camellia reticulata、茶梅等[4，11，13]山茶屬植物的花朵而不侵染其它部位。受其侵染，花朵變褐色，花期縮短并提前脫落[11]。山茶屬植物為觀花植物，主要價(jià)值在于花朵，因此該病害嚴(yán)重影響其觀賞和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。與其它觀花植物相比，山茶屬植物的病蟲(chóng)害相對(duì)較少[14-15]。山茶葉杯菌在侵染后期可形成抗逆性較強(qiáng)的菌核，化學(xué)藥劑難以防治，這對(duì)其寄主植物構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。鑒于其嚴(yán)重危害性，該病菌已被列入歐洲和地中海植物保護(hù)組織(European and Mediterranean Plant Protection Organization，EPPO)的A1類有害生物，也被列入我國(guó)進(jìn)境植物檢疫有害生物名錄，稱之為山茶花腐病菌，須密切防范其傳播擴(kuò)散。

盡管山茶花腐病早在1919年于日本發(fā)現(xiàn)[5]，但在20世紀(jì)70年代中期之前并沒(méi)有被廣泛傳播[16]。目前，山茶葉杯菌主要分布于北美洲的美國(guó)，歐洲多國(guó)，大洋州的新西蘭以及亞洲的日本[17-22]。迄今為止，我國(guó)未見(jiàn)該病害的報(bào)道。

2019年初，寧波口岸對(duì)自日本進(jìn)境的6株茶梅樹(shù)種苗進(jìn)行口岸檢疫時(shí)，發(fā)現(xiàn)茶梅樹(shù)上攜帶有帶菌核茶梅花，隨即將茶梅花樣品送至實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。通過(guò)對(duì)該批樣品分離培養(yǎng)，獲得1株疑似山茶葉杯菌CM-2菌株，筆者對(duì)其開(kāi)展生物學(xué)特性研究、DNA序列測(cè)定分析和致病性測(cè)定，準(zhǔn)確鑒定該菌株的分類地位，以期為口岸檢疫、疫情防控及相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株 采用常規(guī)PDA平板分離法從日本進(jìn)境的茶梅花朵樣品攜帶的多個(gè)菌核中，分離培養(yǎng)獲得1株疑似山茶葉杯菌的菌株。菌株經(jīng)切取培養(yǎng)中菌絲尖端后得到純化菌株CM-2，接種在PDA斜面，于4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)菌落形態(tài)的影響 選用馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar，PDA)、燕麥瓊脂(oatmeal agar，OA)、麥芽汁瓊脂(malt extract agar，MEA)[23]和茶梅花水瓊脂(camellia water agar，CWA)4種培養(yǎng)基進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。CWA培養(yǎng)基制備方法為茶梅花20 g，加水，打碎勻漿過(guò)濾后，加瓊脂粉20 g，加蒸餾水定容至1 000 mL，滅菌后備用。將供試菌株CM-2分別接種于不同培養(yǎng)基平板中央，在18℃條件下連續(xù)暗培養(yǎng)10 d，觀察記錄菌落正反面的顏色和氣生菌絲的疏密程度。用解剖針自4種平板上挑取供試菌，制臨時(shí)水玻片后在Imager Z1自動(dòng)正立照相顯微鏡(德國(guó)Zeiss公司)下觀察有性繁殖結(jié)構(gòu)有無(wú)和無(wú)性繁殖結(jié)構(gòu)微觀形態(tài)特征，并利用顯微數(shù)碼測(cè)量系統(tǒng)測(cè)量微觀形態(tài)特征并記錄。

1.2.2 基因組DNA提取 用滅菌槍頭刮取PDA平板上培養(yǎng)10 d的CM-2的菌絲體，按照Labserv Plant DNA Kit核酸提取試劑盒(美國(guó)Thermo Fisher公司)使用說(shuō)明書(shū)，在Kingfisher核酸自動(dòng)化提取儀(美國(guó)Thermo Fisher公司)上提取基因組DNA。提取后DNA經(jīng)Thermo Scientific Multiskan GO生物分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo Fisher公司)檢測(cè)濃度后，凍存于-20℃冰箱備用。

1.2.3 序列測(cè)定 采用White等[24]設(shè)計(jì)的引物ITS1和ITS4進(jìn)行ITS片段擴(kuò)增，采用Vilgalys[25]設(shè)計(jì)的引物L(fēng)R0R和LR5R進(jìn)行28S片段擴(kuò)增，采用引物TUB2Fd/TUB4Rd擴(kuò)增β-tubulin(TUB)片段[26]，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，使用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行拍照，按照DNA片段純化試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行純化。純化產(chǎn)物送北京六合華大基因科技有限公司進(jìn)行雙向測(cè)序。

1.2.4 序列比對(duì)分析 測(cè)序獲得的序列首先運(yùn)用Bioedit ver.7.0.9[27]對(duì)正反向序列進(jìn)行手動(dòng)的拼接合成，同時(shí)在GenBank中下載葉杯菌屬及其近似種的ITS、28S和 TUB序列作為對(duì)照，用 Clustal X ver.1.8[28]對(duì)多個(gè)樣本的序列進(jìn)行比對(duì)，以大麗輪枝菌Verticillium dahliae的ITS序列(AJ970308和EU109532)為外群，分別運(yùn)用RAxML ver.7.2.6[29]和MrBayes ver.3.1.2[30]軟件采用最大似然法(Maximum likelihood，ML)和貝葉斯分析(Bayesian inferences)進(jìn)行ITS序列系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)的構(gòu)建。

1.2.5 致病性測(cè)定 選用市售本地盆栽茶梅品種“立寒”1株進(jìn)行接種試驗(yàn)。取接種菌株CM-2培養(yǎng)20 d的PDA平板，用直徑10 mm打孔器打取菌餅后，用解剖針在花朵基部扎成深度1 cm傷口，采用靠接法將菌餅接種茶梅花朵基部傷口位置，共接種4朵。以接種無(wú)菌PDA平板菌餅作為對(duì)照，設(shè)對(duì)照花朵4朵。接種后在接種部位放置濕潤(rùn)棉球，將茶梅花套上塑料袋保濕48 h后移除塑料袋。供試茶梅放置在20℃溫室條件下培養(yǎng)，接種后每天觀察并記錄發(fā)病情況。對(duì)發(fā)病花朵進(jìn)行病原菌再分離和TUB序列測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 癥狀觀察 送檢茶梅花瓣變褐壞死，但花的結(jié)構(gòu)保持良好，枯萎花朵擠壓后花瓣不脫落?；ㄉ先庋劭梢?jiàn)有黑色菌核產(chǎn)生，與花組織緊密結(jié)合在一起(圖1)。

成熟的菌核薄片狀、盤(pán)狀或淺杯狀，外部深褐色或黑色，菌核邊緣因?yàn)榕c花瓣寄主組織結(jié)合而呈褐色(圖2)，切開(kāi)后可見(jiàn)菌核內(nèi)部為白色或淺褐色。菌核多單獨(dú)產(chǎn)生，但在花朵基部，由于寄主花萼作用可將多個(gè)菌核粘連在一起。

圖2 山茶葉杯菌的菌核Fig.2 Sclerotia of Ciborinia camelliae

2.2 菌株CM-2的菌落性狀和形態(tài)特征 在MEA上，生長(zhǎng)十分緩慢，未見(jiàn)菌核(圖3A)。在PDA上，初期菌落呈白色，粗糙、質(zhì)地較硬、氈狀，菌落邊緣不規(guī)則，2周左右開(kāi)始產(chǎn)生菌核結(jié)構(gòu)，菌核產(chǎn)于培養(yǎng)基表面；菌核卵圓形或橢圓形，大小(1.86～12.30)mm×(1.37～8.20)mm；菌核單獨(dú)或聚集生長(zhǎng)，未成熟時(shí)白色，隨時(shí)間延長(zhǎng)，逐漸呈深褐色或黑色(圖3B)。在OA上，生長(zhǎng)速度較快，初期菌落呈白色，在培養(yǎng)基上產(chǎn)生淡黃褐色色素，氣生菌絲稀少，產(chǎn)生大量黑色菌核；菌核大小(2.10～14.50)mm×(2.50～10.83)mm，聚集或單獨(dú)產(chǎn)生(圖3C)。在CWA上，氣生菌絲稀少，不易觀察，但透光后可看到稀薄菌落，菌落生長(zhǎng)速度較慢，可產(chǎn)生菌核；菌核呈近似圓狀，大小(1.20～3.00)mm×(1.37～4.10)mm，產(chǎn)于培養(yǎng)基底部，單生分布于菌落邊緣(圖3D，H)。以O(shè)A上產(chǎn)生菌核最大，其次為PDA，CWA上產(chǎn)生菌核最小。

圖3 菌株CM－2在MEA，PDA，OA和CWA培養(yǎng)基上培養(yǎng)10 d后的菌落和形態(tài)特征Fig.3 Colony and morphological characteristics of strain CM －2 on MEA，PDA，OA and CWA media after 10 days

在4種培養(yǎng)基上均未見(jiàn)有性階段和大型分生孢子。在PDA或OA培養(yǎng)基上可觀察到無(wú)性繁殖結(jié)構(gòu)。分生孢子梗瓶梗狀，透明至淺褐色，在分生孢子梗頂端產(chǎn)生小型分生孢子。小型分生孢子圓形至卵圓形，單核，直徑2.3～4.2 μm，含一個(gè)油球；有些孢子可連接成短鏈(圖4)。

圖4 山茶葉杯菌菌株CM－2在PDA上的微觀形態(tài)Fig.4 Micromorphological characteristics of Ciborinia camelliae isolate CM－2 on PDA

2.3 DNA序列分析 經(jīng)真菌ITS、28S和TUB序列相關(guān)引物擴(kuò)增后，分別獲得長(zhǎng)度為513、1157和476 bp的基因片段。經(jīng)在GenBank中BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)搜索和比對(duì)分析，供試菌株CM-2的ITS序列與GenBank中山茶葉杯菌ITS序列(AB516659、FJ959095～FJ959098)的同源性為99%，28S序列與GenBank中山茶葉杯菌的28S序列(KF590160)同源性為99%，TUB序列與 GenBank中山茶葉杯菌的 TUB序列(GQ181121、GQ181122)同源性達(dá)100%。最大似然法和貝葉斯分析的樹(shù)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)一致，供試菌株CM-2的ITS序列與山茶葉杯菌菌株EFA-2和EFA-4的ITS序列聚在同一個(gè)分支(Bootstrap值為0.93/94)(圖5)，28S序列與TUB序列系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果也表明CM-2與山茶葉杯菌聚在同一個(gè)分支。形態(tài)學(xué)觀察初步明確該菌具有侵染茶梅花朵、與寄主花瓣緊密結(jié)合形成薄片狀、盤(pán)狀或淺杯狀菌核等形態(tài)特征，為山茶葉杯菌的特有特征。由于該菌為我國(guó)進(jìn)境檢疫性有害生物，獲取模式菌株的難度較大，但結(jié)合分子及形態(tài)依據(jù)，可以確認(rèn)該菌為山茶葉杯菌。

圖5 基于ITS基因序列構(gòu)建山茶葉杯菌菌株CM－2及其相關(guān)菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.5 Phylogenetic tree generated from ITS sequences of Ciborinia camelliae strain CM－2 and related species

2.4 致病性 接種菌株CM-2茶梅花朵早期癥狀不明顯。接種50 d后，將花倒置，可見(jiàn)花瓣基部有白色毛毯狀近似環(huán)狀的菌絲體。被侵染的花在脫落后仍能保持其形狀和硬度，干枯花瓣有質(zhì)地較硬塊狀物，外部有菌絲產(chǎn)生，后期可見(jiàn)菌核(圖6A)，與寄主組織緊密結(jié)合在一起。除接種花朵外，未觀察到花朵之間相互傳染。接種無(wú)病菌PDA平板的對(duì)照茶梅花上沒(méi)有產(chǎn)生上述癥狀(圖6B)。經(jīng)茶梅花葉部再分離、培養(yǎng)并測(cè)序獲得了與原病菌形態(tài)和TUB序列一致的菌株。

圖6 山茶葉杯菌菌株CM－2接種茶梅花瓣后所致癥狀及對(duì)照Fig.6 Symptoms of Ciborinia camelliae isolate CM－2 on flower of Camellia sasanqua

3 結(jié)論與討論

根據(jù)形態(tài)學(xué)特征觀察、序列比對(duì)分析以及致病性測(cè)定的結(jié)果，將從日本進(jìn)境的茶梅花朵上截獲的菌核病菌鑒定為山茶葉杯菌，這是我國(guó)首次截獲山茶葉杯菌這一進(jìn)境檢疫性有害生物。該結(jié)果可為該病菌的疫情檢測(cè)、監(jiān)測(cè)和防控提供依據(jù)。

葉杯菌屬可以寄生在草本植物的莖、球莖、匍匐莖、葉柄、花總枝、花瓣和萼片上，以及木本植物的葉和花上[9]，目前已報(bào)道種類24種，寄生茶梅的僅有一種[9，12]。葉杯菌屬與核盤(pán)菌屬的主要區(qū)別在于菌核部分或全部埋生于寄主組織或培養(yǎng)基中，髓部含有未經(jīng)消化的寄主組織。該屬真菌在我國(guó)研究較少，目前我國(guó)僅報(bào)道有3種，蔥葉杯菌Ciborinia allii[31]、半球葉杯菌Ciborinia hemisphaerica和井岡山葉杯菌Ciborinia jinggangensis[32]。國(guó)際上，該屬真菌分子生物學(xué)相關(guān)研究較少，GenBank中該屬真菌僅有個(gè)別種類有少量DNA序列證據(jù)，如GenBank中山茶葉杯菌僅有2條TUB序列、5條ITS序列、2條28S序列。

山茶花腐病的主要癥狀是寄主植物花瓣變褐、花壞死，并能在短期內(nèi)迅速擴(kuò)展，造成茶梅花期縮短，花朵脫落，嚴(yán)重影響觀賞價(jià)值[21，33]。通常在早春階段由病原菌子囊孢子侵染花朵基部，形成棕色小斑點(diǎn)，斑點(diǎn)逐步擴(kuò)展后蔓延至整個(gè)花瓣，花瓣邊緣腐爛。嚴(yán)重時(shí)，花朵中部變黑，完全壞死，最終脫落，但花的結(jié)構(gòu)保持良好。在花被侵染的后期，將花倒置并移除萼片，可見(jiàn)圍繞花瓣基部出現(xiàn)白色至灰白色毛毯狀近似環(huán)狀的不育菌絲體，像寄主的組織，該環(huán)狀菌絲體是該病害的一個(gè)典型特征[13，34]。感染后2～4周，菌核開(kāi)始形成，最初由一層密集的灰白色菌絲覆蓋。成熟的菌核，黑色，較薄，近盤(pán)狀。用手指揉搓花瓣基部，可以檢測(cè)菌核為堅(jiān)硬平坦的結(jié)構(gòu)，菌核有助于病菌度過(guò)不良環(huán)境。菌核隨花朵脫落在泥土后，落花腐爛，菌核混入土壤中[20]。菌核在冬季結(jié)束時(shí)萌發(fā)產(chǎn)生子囊，釋放子囊孢子后，侵染新花，構(gòu)成侵染循環(huán)[22]。該病害藥劑防治難度較大，菌核具有較強(qiáng)抵御不利環(huán)境影響的能力，傳統(tǒng)藥劑防治方法難以奏效。

該病菌的檢疫工作，首先應(yīng)該觀察進(jìn)境茶梅等種苗花朵或介質(zhì)是否攜帶有菌核。通過(guò)比較可發(fā)現(xiàn)山茶葉杯菌菌核與一般菌核明顯不同，山茶葉杯菌菌核卵圓形或餅形，且與寄主花瓣緊密結(jié)合在一起。在口岸檢疫中另兩種能夠侵染茶梅且可產(chǎn)菌核的病菌，灰葡萄孢菌Botrytis cinerea和核盤(pán)菌Sclerotinia sclerotiorum所產(chǎn)生菌核均為球狀較厚菌核，且不與寄主組織相結(jié)合，這與扁平狀的山茶葉杯菌菌核明顯不同。同時(shí)，灰葡萄孢菌和核盤(pán)菌侵染的花瓣易碎，多提前掉落。菌核是否與寄主組織相結(jié)合是區(qū)分山茶葉杯菌的一個(gè)重要指征。在分離鑒定時(shí)，通過(guò)花瓣直接分離山茶葉杯菌的成功率較低，而通過(guò)菌核分離病菌的成功率較高。該菌在培養(yǎng)基上可供檢測(cè)鑒定的形態(tài)特征主要是菌核和小型分生孢子形態(tài)，但這些特征形態(tài)并不穩(wěn)定。如Hansen＆Thomas[6]報(bào)道該菌菌核直徑可達(dá)20 mm×30 mm，而Gill[35]報(bào)道菌核直徑為12～25 mm，本次在寧波口岸截獲的山茶葉杯菌菌核較上述報(bào)道均小。在有性態(tài)方面，Hansen＆Thomas[6]報(bào)道子囊孢子大小為(5.3～7.0)μm×(2.5～3.5)μm，小于 Kohn＆Nagasawa[11]所報(bào)道的，而Yoshimi[36]報(bào)道的子囊孢子大小為(12～13)μm×(6～8)μm。本研究中，菌株CM-2經(jīng)過(guò)培養(yǎng)僅產(chǎn)生小型分生孢子和菌核，實(shí)驗(yàn)室條件下未能觀察到大型分生孢子和有性態(tài)。ITS、28S和TUB序列測(cè)定表明該菌株與GenBank中山茶葉杯菌序列相似度較高，根據(jù)ITS、28S和TUB序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)也支持將分離物CM-2劃分在山茶葉杯菌分支，從分子水平進(jìn)一步確認(rèn)了形態(tài)學(xué)結(jié)果。致病性測(cè)定結(jié)果表明該菌株能夠侵染茶梅花朵，造成花朵枯死并形成菌核。以上證據(jù)支持將所截獲病菌鑒定為山茶葉杯菌。為了提高檢測(cè)效率，縮短通關(guān)時(shí)間，可以在測(cè)定山茶葉杯菌及其近似種多基因序列基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究其快速檢測(cè)方法，利用菌核提取DNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)等方法可加快實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程。

山茶葉杯菌侵染花朵的最適溫度是15～18℃，但也可在10～24℃快速侵染寄主植物花朵[37]。在更低溫度下病菌可侵染花朵但沒(méi)有明顯外部癥狀，若遇外部環(huán)境溫度升高，則病害癥狀將會(huì)顯現(xiàn)，這說(shuō)明病菌可能通過(guò)無(wú)肉眼可見(jiàn)癥狀的鮮切花進(jìn)行傳播[33]。根據(jù)英國(guó)皇家園藝學(xué)會(huì)推薦，應(yīng)該禁止從山茶葉杯菌發(fā)生國(guó)家或地區(qū)進(jìn)口帶有開(kāi)放花朵的茶梅切花[33]。同時(shí)，EPPO建議應(yīng)該充分考慮帶有土壤或介質(zhì)的植物攜帶菌核的風(fēng)險(xiǎn)，建議山茶花種植者對(duì)來(lái)自山茶葉杯菌發(fā)生國(guó)家進(jìn)口的任何植物仔細(xì)觀察18個(gè)月[38]。這表明從山茶葉杯菌發(fā)生疫區(qū)國(guó)進(jìn)口山茶屬植物具有很大風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)該進(jìn)一步慎重評(píng)估。

茶梅、山茶等山茶屬植物，作為一類優(yōu)良的景觀植物，在園林綠化中有廣闊的發(fā)展前景，該屬植物還有一定食用和藥用價(jià)值。目前山茶葉杯菌僅在觀賞類山茶花屬植物有所報(bào)道，對(duì)于該屬中其它一些種類，如廣泛種植并飲用的茶Camellia sinensis，產(chǎn)茶油的油茶Camellia oleifera等植物上能否致病，尚有待進(jìn)一步研究。日本種苗景觀植物品質(zhì)較高，近年來(lái)由于國(guó)內(nèi)市場(chǎng)旺盛需求，我國(guó)進(jìn)口了大量日本種苗，主要種類包括羅漢松Podocarpus macrophyllus、雞爪槭Acer palmatum、杜鵑Rhododendron simsii和茶梅等。對(duì)這些進(jìn)境植物產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格檢疫是保護(hù)我國(guó)農(nóng)林業(yè)生產(chǎn)發(fā)展的重要舉措，我國(guó)口岸檢疫部門(mén)已經(jīng)多次從來(lái)自日本種苗中截獲檢疫性真菌，如自羅漢松中截獲可可花癭病菌Albonectria rigidiuscula[39]、杜鵑中截獲杜鵑花枯萎病菌Ovulinia azaleae[40]和雞爪槭中截獲葡萄莖枯病菌Didymella glomerata[41]等。由于菌核能夠在沒(méi)有山茶屬植物存在情況下造成該病菌的傳播，因此單獨(dú)針對(duì)山茶屬植物的單一檢疫措施并不能有效阻斷該病菌的發(fā)生。此次截獲表明，從日本進(jìn)口茶梅等山茶屬植物種苗或介質(zhì)中具有攜帶山茶葉杯菌的較高風(fēng)險(xiǎn)，今后應(yīng)加強(qiáng)對(duì)該類產(chǎn)品上檢疫性病菌的檢疫工作，以防范其危害。同時(shí)，也應(yīng)盡快調(diào)查監(jiān)測(cè)我國(guó)山茶屬植物上是否存在該病菌，以阻止其傳播擴(kuò)散危害。

志謝:感謝中科院微生物研究所莊文穎研究員在病菌鑒定過(guò)程中提供的指導(dǎo)與幫助。