中草藥制劑對(duì)禽流感H5亞型免疫抗體水平的影響試驗(yàn)

張俊文，姚學(xué)梅，金淑霞，王烈花，楊生娟，韓慶彥

（1.永靖縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，甘肅臨夏731600；2.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，蘭州730030）

高致病性禽流感是危害養(yǎng)雞業(yè)的主要傳染病之一，發(fā)病急，死亡率高，國(guó)際獸疫局將其列為A 類疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病，是我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)危害最大、經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的傳染病。中草藥制劑具有直接殺滅或抑制細(xì)菌和增強(qiáng)免疫力的功能，具有長(zhǎng)期使用而無藥物殘留、無抗藥性和無毒副作用的特點(diǎn)。為了證實(shí)中草藥制劑對(duì)免疫禽流感血清抗體水平影響，評(píng)價(jià)中草藥制劑的使用價(jià)值，篩選最佳中草藥制劑，保證禽流感抗體能夠達(dá)到一個(gè)較高的水平，對(duì)預(yù)防禽流感的發(fā)生具有很重要的作用，在永靖縣幸源養(yǎng)殖有限公司開展本試驗(yàn)。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)藥物：中草藥復(fù)方制劑I 號(hào)，有效成分為：板藍(lán)根30g、大青葉20、甘草5g、防風(fēng)5g、柴胡5g、枳殼5g、桔梗5g、茯苓5g、虎杖5g、薄荷5g、荊芥5g、忍冬藤3g、牛角絲2g 等；中草藥復(fù)方制劑Ⅱ號(hào)，有效成分為金銀花50g、連翹15g、薄荷15g、荊芥10g、淡豆豉10g 等。

1.2 疫苗：重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活苗（H5N1Re-11 株+Re-12 株，H7N9H7-Re2 株），由肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為01924198；禽流感標(biāo)準(zhǔn)抗原、陽性血清（哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為20200504、20200408）。

2 試驗(yàn)方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組：選用110日齡海蘭褐雞2400 只，隨機(jī)分為3 組（Ⅰ號(hào)制劑組、Ⅱ號(hào)制劑組、空白對(duì)照組），每組800 只。

2.2 免疫方法：該批蛋雞在45日齡用重組禽流感滅活三價(jià)苗（H5N1Re-11 株+Re-12 株+H7N9、H7-Re2 株）進(jìn)行了首次免疫；在試驗(yàn)開始時(shí)（即110日齡時(shí)），再次用重組禽流感滅活三價(jià)苗（H5N1Re-11 株+Re-12 株+H7N9、H7-Re2 株）頸部皮下免疫注射，注射后14d、40d 和70d 采集血液進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。

2.3 抗體效價(jià)檢測(cè)：按《中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)－ 高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB／T18936－2003）進(jìn)行，血凝抑制滴度以血清稀釋倍數(shù)倒數(shù)的對(duì)數(shù)（log2）表示。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 試驗(yàn)組H5N1 Re-11 株抗體檢測(cè)結(jié)果與Re-12 株抗體檢測(cè)結(jié)果相近，在此僅介紹Re-11株檢測(cè)結(jié)果。注射疫苗14d、40d 和70d 后，不同組H5N1 Re-11 株抗體檢測(cè)結(jié)果分別見表1、表2和表3。

3.2 從表1中看出，注射禽流感疫苗14d 后，Ⅰ號(hào)制劑組抗體效價(jià)在7～9 之間，平均8.73；Ⅱ號(hào)制劑組抗體效價(jià)在8～9 之間，平均8.6；空白對(duì)照組抗體效價(jià)在6～7 之間，平均7.33。平均抗體效價(jià)Ⅰ號(hào)制劑組＞Ⅱ號(hào)制劑組＞空白對(duì)照組，試驗(yàn)組之間抗體效價(jià)滴度檢驗(yàn)差異不顯著（P＞0.05）； 試驗(yàn)組與對(duì)照組抗體效價(jià)差異均顯著（P＜0.05）。

表1 注射疫苗后14d 抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 注射疫苗后40d 抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 注射疫苗后70d 抗體檢測(cè)結(jié)果

3.3 從表2中看出，注射禽流感疫苗40d 后，Ⅰ號(hào)、Ⅱ號(hào)制劑組抗體效價(jià)仍在7～9 之間，平均分別為8.22 和8.2。平均抗體效價(jià)Ⅰ號(hào)制劑組＞Ⅱ號(hào)制劑組＞空白對(duì)照組，試驗(yàn)組之間抗體效價(jià)差異不顯著，說明試驗(yàn)各組抗體效價(jià)水平基本一致。

3.4 從表3中看出，注射禽流感疫苗70d 后，Ⅰ號(hào)制劑組抗體效價(jià)在7～9 之間，平均8；Ⅱ號(hào)制劑組抗體效價(jià)在8～9 之間，平均7.8；空白對(duì)照組抗體效價(jià)在6～9 之間，平均7.07。平均抗體效價(jià)Ⅰ號(hào)制劑組＞Ⅱ號(hào)制劑組＞空白對(duì)照組，各組抗體效價(jià)滴度均比注苗后14d 明顯下降，尤其是對(duì)照組離散度較大。

4 討論分析

4.1 中草藥添加劑作為天然添加劑參與機(jī)體代謝，在對(duì)疾病的抵抗方面，可作為維持保護(hù)屏障，使免疫系統(tǒng)發(fā)揮最佳功能。在飼料中添加不同組方中草藥均對(duì)雞群免疫效果均有明顯促進(jìn)作用，14d 抗體水平達(dá)到峰值，試驗(yàn)組40d、70d 測(cè)定結(jié)果雖有下降趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比較，仍高于對(duì)照組，并且抗體效價(jià)離散度較低。

4.2 采用復(fù)方中藥對(duì)禽流感抗體水平的提高作用，主要是通過改善雞體狀況，增強(qiáng)免疫器官的的機(jī)能來實(shí)現(xiàn)。復(fù)方中藥可以明顯提高抗禽流感抗體水平，在禽流感的免疫防治中，可以作為免疫增強(qiáng)劑，如果在養(yǎng)雞生產(chǎn)中合理應(yīng)用，既可以提高免疫效果，提高疫苗的保護(hù)率，延長(zhǎng)免疫期，又因?yàn)樵陔u內(nèi)無副作用，無殘留等優(yōu)點(diǎn)，符合綠色環(huán)保的要求，對(duì)人的健康不會(huì)產(chǎn)生不良影響，符合市場(chǎng)的需求，有著廣闊的應(yīng)用前景。