• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    蜂蜜多酚提取物對大鼠急性酒精性肝損傷的保護作用

    2020-11-27 10:47:28譚書明陳小敏宋長軍
    食品科學 2020年21期
    關鍵詞:脂質蜂蜜酒精

    黃 穎,譚書明,*,陳 萍,陳小敏,宋長軍

    (1.貴州大學釀酒與食品工程學院,貴州 貴陽 550025;2.貴州省農(nóng)畜產(chǎn)品貯藏與加工重點實驗室,貴州 貴陽 550025)

    酒精性肝損傷(alcoholic liver disease,ALD)是由于過量攝入酒精引起的,對全球肝病發(fā)病率和死亡率有重大影響,已成為世界關注的主要健康問題之一[1]。一次性過量飲酒容易引起急性ALD,進而發(fā)展為脂肪肝、肝纖維化以及肝硬化[2]。目前,我國預防和治療急性ALD大多采用藥物進行干預,但長期使用藥物會對身體產(chǎn)生較大的毒副作用,越來越受到人們的排斥。因此,尋找具有護肝功效的天然來源化合物已成為國內學者的研究熱點之一[3]。

    蜂蜜,又名石蜜,是蜜蜂將采集得到的花蜜與自身分泌物結合后制成的天然物質[4]。研究表明,蜂蜜中含有180多種物質,包括糖、多酚、維生素、礦物質、氨基酸等[5],具有解酒、抗氧化、抑菌以及抗癌等功效[6-8]。因此,蜂蜜被廣泛應用于食品和藥品領域。多酚作為蜂蜜中的主要活性成分之一[9],已有文獻報道其不僅能清除自由基,還能抑制促炎基因的表達,具有很強的體外抗氧化和抗炎特性[10]。Pan等[11]證實天然物質的抗氧化和抗炎功效可改善酒精引起的肝臟損傷。然而,目前國內還沒有蜂蜜多酚提取物能干預酒精誘導肝損傷的報道。因此,本研究通過建立急性ALD大鼠模型,初步探討蜂蜜多酚提取物對ALD的保護作用,為進一步開發(fā)護肝功能性食品提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 動物、材料與試劑

    雄性Sprague-Dawley大鼠,體質量180~200 g,由長沙市天勤生物技術有限公司提供。生產(chǎn)許可證號:SCXK(湘)2019-0014。將所有大鼠圈養(yǎng)在12 h光暗循環(huán)中,溫度保持在(22±2)℃,室內相對濕度為(55±5)%,飼料充足,飲水不限。

    冬蜂蜜 貴州涼都蜂業(yè)有限公司提供;體積分數(shù)56%二鍋頭 北京紅星股份有限公司;牡蠣粉 深圳市海王健康科技發(fā)展有限公司;谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase,CAT)、還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)試劑盒、蘇木精-伊紅染色液南京建成生物工程研究所;Amberlite XAD-2樹脂 美國西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司;TRIzol試劑盒 武漢賽維爾生物科技有限公司;cDNA合成試劑盒 美國Thermo公司。

    1.2 儀器與設備

    SpectraMax190連續(xù)波長多功能酶標儀 美國Molecular Devices公司;H1-16KR高速冷凍離心機湖南可成儀器設備有限公司;DY89-II電動玻璃勻漿機寧波新芝生物科技股份有限公司;YD-202組織切片機浙江金華益迪醫(yī)療設備廠;D M 3 0 0 0 熒光顯微鏡徠卡儀器(德國)有限公司;CTFD-12S真空冷凍干燥機青島永合創(chuàng)信電子科技有限公司;Stepone plus型熒光定量聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)儀美國ABI公司。

    1.3 方法

    1.3.1 蜂蜜多酚提取物的制備

    參考梁馨文等[10]的方法并略有修改。稱取一定量的蜂蜜,以1∶9(m/V)的比例加入醋酸溶液,攪拌溶解后超聲提取40 min,離心過濾,收集濾液待用。將純化后的Amberlite XAD-2大孔樹脂填充到玻璃柱中,以1 mL/min的流速加入濾液,并用蒸餾水和醋酸溶液洗滌,以保留濾液中的多酚物質并除去蜂蜜中的糖和其他極性化合物,再用體積分數(shù)70%的乙醇溶液洗脫多酚并收集洗脫液,經(jīng)旋轉蒸發(fā)去除乙醇后,于-50 ℃真空冷凍干燥,得到蜂蜜多酚提取物(honey polyphenol extract,HPE)。采用Folin-Ciocalteu法[12]測得HPE中多酚質量分數(shù)為71.45%。

    1.3.2 動物分組與處理

    適應性喂養(yǎng)1 周后,將50 只大鼠隨機分為空白對照組、模型組、藥物對照組、HPE低劑量組和HPE高劑量組,每組10 只。低、高劑量組分別按100、200 mg/(kg mb·d)的劑量灌胃,藥物對照組每天灌胃100 mg/(kg mb·d)的牡蠣粉,空白對照組和模型組給予同體積生理鹽水灌胃,連續(xù)30 d。于末次給藥30 min后,除空白對照組給予生理鹽水外,其他4 組均給予15 mL/kg mb體積分數(shù)56%白酒。12 h后,各組大鼠摘眼球取血,4 ℃、3 000 r/min離心15 min后分離血清,待測。脫頸處死大鼠后,迅速解剖取出肝臟,剪下肝左葉用于組織病理學觀察,其余肝組織加入9 倍體積的生理鹽水并研磨成漿,離心后取上清液待測。

    1.3.3 生化指標測定

    參照試劑盒說明書,分別檢測肝損傷指標(ALT、AST活力)、抗氧化指標(SOD、GSH-Px、CAT、GSH、MDA水平)、炎癥指標(TNF-α質量濃度)。

    1.3.4 肝臟病理學檢查

    將肝臟左葉樣品保存在體積分數(shù)10%福爾馬林溶液中固定,經(jīng)過乙醇脫水和石蠟包埋后,每片肝組織制成5 μm的超薄切片,用蘇木精和伊紅染色樣品。最后,通過光學顯微鏡觀察肝臟中央的圖像。

    1.3.5 實時定量聚合酶鏈式反應

    采用TRIzol試劑提取各組大鼠肝組織的RNA,并檢測其濃度。按照cDNA試劑盒說明書操作合成cDNA后,PCR擴增基因,具體反應條件如下進行:94 ℃預變性10 min;95 ℃變性15 s,60 ℃退火60 s,72 ℃延伸15 s,40 個循環(huán)。使用ΔΔCt方法計算mRNA相對表達量。檢測的目的基因及引物序列見表1。

    表1 目的基因的引物序列Table 1 Primer sequences used for PCR amplification of target genes

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

    實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學顯著性檢驗,多組間比較用單因素方差分析法,兩兩比較采用最小顯著性差異法檢驗,結果以平均值±標準差表示,P<0.05表示差異顯著。

    2 結果與分析

    2.1 HPE對急性肝損傷大鼠血清ALT和AST活力的影響

    表2 HPE對大鼠血清ALT和AST活力的影響(n= 10)Table 2 Effect of HPE on ALT and AST activities in serum of rats (n= 10)

    由表2可知,模型組大鼠血清中ALT和AST活力均顯著高于空白對照組(P<0.05),表明一次過量飲酒會導致肝功能出現(xiàn)異常。而相比于模型組,HPE各劑量組和藥物對照組大鼠血清ALT及AST的活力均顯著下降(P<0.05),其中,HPE高劑量組大鼠血清ALT和AST活力下降到藥物對照組水平,表明給予蜂蜜多酚可以有效減輕酒精對肝臟造成的損害。

    2.2 HPE對急性肝損傷大鼠肝臟SOD、GSH-Px、CAT活力和GSH、MDA水平的影響

    表3 HPE對大鼠肝臟SOD、GSH-Px、CAT活力和GSH、MDA含量的影響(n=10)Table 3 Effect of HPE on SOD, GSH-Px and CAT activities, and GSH and MDA levels in liver tissues of rats (n= 10)

    由表3可知,與空白對照組相比,模型組大鼠肝臟SOD、GSH-Px、CAT活力和GSH含量均顯著降低(P<0.05),MDA含量顯著升高(P<0.05),表明酒精暴露引起大鼠肝臟抗氧化能力下降,脂質水平增加,誘導氧化應激產(chǎn)生。與模型組相比,HPE低、高劑量組SOD和GSH-Px活力顯著升高(P<0.05),MDA含量顯著降低(P<0.05);此外,HPE各劑量組還增加了CAT活力和GSH含量,盡管僅在高劑量組中顯示出統(tǒng)計學差異(P<0.05)。結果表明HPE能提高肝臟的抗氧化能力,降低脂質過氧化水平,有效預防氧化應激的發(fā)生。

    2.3 HPE對急性肝損傷大鼠肝臟TNF-α水平的影響

    圖1 HPE對大鼠肝臟TNF-α質量濃度的影響Fig. 1 Effect of HPE on TNF-α level in liver of rats

    如圖1所示,與空白對照組相比,模型組大鼠肝臟TNF-α水平顯著上升(P<0.05),表明急性酒精攝入會引起肝臟發(fā)生嚴重的炎癥反應。與模型組相比,HPE低、高劑量組以及藥物對照組TNF-α水平均顯著降低(P<0.05),且HPE高劑量組TNF-α水平低于藥物對照組,表明HPE能改善酒精引起的肝臟炎癥。

    2.4 HPE對急性肝損傷大鼠ERK、JNK和p38 mRNA相對表達量的影響

    圖2 HPE對大鼠ERK、JNK和p38 mRNA相對表達量的影響Fig. 2 Effect of HPE on mRNA expression of ERK, JNK and p38 in rats

    如圖2 所示,與空白對照組相比,模型組大鼠肝臟ERK、JNK、p38 mRNA相對表達量均顯著上調(P<0.05),表明酒精激活了MAPK信號通路。與模型組相比,低劑量HPE能顯著下調JNK mRNA相對表達量(P<0.05),但對ERK、p38 mRNA表達無顯著影響(P>0.05);高劑量HPE處理后能顯著下調ERK、JNK、p38 mRNA相對表達量(P<0.05),表明HPE能抑制MAPK通路的激活,尤其以高劑量HPE效果最為顯著。

    2.5 HPE對急性肝損傷大鼠肝臟的組織病理學影響

    由圖3可知,空白對照組肝細胞排列整齊,胞漿內無脂質液泡分布,肝組織無異常改變;而模型組中觀察到肝細胞有明顯的結構紊亂,并且胞漿內有大量的脂質液泡出現(xiàn),表明急性酒精暴露對肝組織造成明顯的損傷;在藥物對照組中,觀察到肝細胞較完整,胞漿內的脂質液泡明顯減少;HPE低劑量組肝細胞結構基本完整,胞漿內有部分脂質液泡出現(xiàn),但明顯少于模型組;高劑量組肝細胞結構排列整齊,肝細胞內僅有極少的脂質液泡,肝損傷明顯減輕。

    圖3 大鼠肝臟組織病理學變化(200×)Fig. 3 Histopathological changes of rat liver tissues (200 ×)

    3 討 論

    肝臟不僅是乙醇代謝的主要器官,也是乙醇毒性的目標,短時間內過量飲酒通常會導致急性ALD[13]。ALD的發(fā)病機制復雜,包括氧化應激、脂質代謝紊亂、炎癥等因素[14],其中,氧化應激和炎癥反應在ALD中的作用日益受到重視[15]。大量研究表明,乙醇代謝產(chǎn)生的活性氧(reactive oxygen species,ROS)及炎癥細胞因子能夠引起肝細胞的變性和壞死,進而出現(xiàn)肝功能損害的臨床表現(xiàn)[16]。Qu Linlin等[17]研究發(fā)現(xiàn),具有抗氧化和抗炎作用的生物活性物質能夠降低ROS和炎癥細胞因子的水平,從而有效預防酒精所致肝損傷。因此,本研究以HPE為干預物,探討其對急性ALD的保護作用及其可能機制。

    本實驗采用體積分數(shù)56%白酒一次性灌胃建立大鼠急性ALD模型,通過測定血清生化指標和觀察肝組織病理學變化研究HPE對肝損傷的保護作用。ALT和AST是存在于肝細胞內的酶,當肝臟受到酒精損害時,肝細胞被破壞,ALT和AST就會分散到血液中[18]。因此,血清ALT和AST的活性常作為判斷肝損傷的指標[19]。肝臟組織病理學觀察是評價肝臟損傷程度的金標準,在各類動物肝損傷模型中廣泛應用[20]。實驗結果顯示,與空白對照組相比,模型組大鼠血清ALT和AST活力顯著升高,肝細胞結構損傷,胞漿脂質過度積累,表明急性酒精攝入引起大鼠肝細胞發(fā)生脂肪變性,肝細胞膜通透性增加,提示ALD模型建立成功;相比于模型組,補充不同劑量的HPE能顯著降低大鼠ALT和AST活力,有效改善肝組織病變情況,表明HPE對急性ALD具有一定的保護作用。

    研究表明氧化應激是導致ALD的主要機制之一[21]。酒精在肝臟中代謝會產(chǎn)生ROS并消耗抗氧化劑,破壞機體氧化-抗氧化平衡,從而產(chǎn)生氧化應激,促進ALD的發(fā)生[22]。GSH作為體內重要的抗氧化劑,可以清除大量自由基,對肝臟抗氧化系統(tǒng)具有重要意義[23]。除GSH外,抗氧化物酶如SOD、GSH-Px和CAT在肝臟抗氧化系統(tǒng)中也起著重要作用。SOD通過催化超氧陰離子轉化為氧和過氧化氫來清除ROS[24]。GSH-Px可以在GSH存在下減少脂肪酸氫過氧化物和過氧化氫[25]。CAT可催化過氧化氫分解為水和氧[26]。這些抗氧化劑均能保護肝臟免受氧化應激的損害,但很容易被脂質過氧化物清除[27]。MDA是脂質過氧化的最終產(chǎn)物,肝臟中MDA水平升高可干擾抗氧化防御并引起肝細胞損傷,使血液中ALT和AST活力升高[28]。實驗結果表明,酒精攝入會造成肝臟抗氧化劑水平降低,脂質過氧化物含量升高,引起肝細胞發(fā)生氧化損傷,進一步提示本實驗建模成功,這與Mir[29]和Kim[30]等的實驗結論一致。給藥HPE后,肝臟中SOD、GSH-Px、CAT和GSH水平較模型組均升高,MDA含量顯著降低,表明蜂蜜多酚具有抗氧化活性,可通過抑制氧化應激改善酒精對肝臟造成的損傷。

    除氧化應激外,炎癥反應也是引起ALD的重要原因[31]。酒精攝入會損傷腸道黏膜,導致腸道內大量有毒物質進入肝臟后激活MAPK信號通路,誘導細胞活化并釋放炎癥因子,引起肝臟炎癥[32]。TNF-α是機體內主要的炎癥因子,它的過量產(chǎn)生能夠刺激肝臟發(fā)生炎癥反應,進而導致ALD[33]。有研究顯示,巨噬細胞是產(chǎn)生TNF-α最主要的細胞,而MAPK通路影響著巨噬細胞的激活[34]。MAPK信號通路是近年來新發(fā)現(xiàn)的介導胞內信號傳導和防治ALD的重要通路,主要調節(jié)細胞的增殖、分化、凋亡、壞死等多種生理病理過程[35]。MAPK家族主要包括細胞外信號調節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK),c-Jun N端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38激酶(p38 kinase,p38),它們均能調節(jié)巨噬細胞活化并產(chǎn)生TNF-α,促進肝臟炎癥的發(fā)生[17]。Wang Xiaodong等[36]研究發(fā)現(xiàn),在酒精干預期間,抑制MAPK途徑可以降低TNF-α活性,有效保護ALD。本研究結果顯示,酒精處理顯著上調ERK、JNK和p38 mRNA的表達量,并增加TNF-α水平,促使肝臟發(fā)生炎癥反應;而給予不同劑量的HPE可不同程度地下調ERK、p38和JNK mRNA的表達,并明顯減少肝臟TNF-α的含量,說明HPE可通過抑制MAPK通路而降低TNF-α的水平,從而緩解肝臟炎癥反應。這些發(fā)現(xiàn)表明蜂蜜多酚具有很強的抗炎活性,可通過抑制肝臟發(fā)炎從而降低酒精對肝造成的損傷。

    綜上所述,一次過量攝入酒精會導致大鼠肝臟受損,而補充HPE能明顯降低大鼠血清ALT和AST活力,改善肝組織病變情況,通過提高肝臟中SOD、GSH-Px、CAT活力和GSH水平并降低MDA含量緩解酒精所致氧化應激損傷,并通過抑制MAPK信號通路的激活降低TNF-α水平調節(jié)炎癥反應,最終改善酒精誘導的急性ALD。因此,HPE可以作為功能保健食品在急性ALD的治療中具有重要的意義。

    猜你喜歡
    脂質蜂蜜酒精
    75%醫(yī)用酒精
    愛是一捧濃濃的蜂蜜
    學生天地(2019年28期)2019-08-25 08:50:44
    蜂蜜,你真的了解嗎
    “蜂蜜”CP
    復方一枝蒿提取物固體脂質納米粒的制備
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:36
    蜂蜜哪里去了
    白楊素固體脂質納米粒的制備及其藥動學行為
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:19:53
    跟蹤導練(一)(2)
    酒精除臭
    馬錢子堿固體脂質納米粒在小鼠體內的組織分布
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:26
    午夜福利一区二区在线看| 黄片大片在线免费观看| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲av电影在线进入| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲精品一二三| 久久人人精品亚洲av| 亚洲全国av大片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一区二区三区激情视频| 国产99白浆流出| 一级黄色大片毛片| 97人妻天天添夜夜摸| 激情在线观看视频在线高清| 老司机深夜福利视频在线观看| 黑人操中国人逼视频| √禁漫天堂资源中文www| av网站在线播放免费| 国产片内射在线| 日韩欧美在线二视频| 国产激情久久老熟女| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 国产高清激情床上av| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产av在哪里看| 国产男靠女视频免费网站| 欧美日本亚洲视频在线播放| 精品久久久久久,| 婷婷六月久久综合丁香| 在线观看一区二区三区激情| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲国产精品sss在线观看 | 在线观看免费视频日本深夜| 日韩精品中文字幕看吧| 久久久久久久久中文| 成人精品一区二区免费| 黑人操中国人逼视频| 超碰成人久久| 欧美性长视频在线观看| 9热在线视频观看99| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 999精品在线视频| 韩国精品一区二区三区| 啦啦啦免费观看视频1| 日韩欧美一区视频在线观看| 午夜a级毛片| 午夜免费观看网址| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品九九99| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 嫩草影视91久久| 一a级毛片在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 88av欧美| 国产精品一区二区三区四区久久 | 在线观看免费日韩欧美大片| 国产精华一区二区三区| 精品熟女少妇八av免费久了| 桃色一区二区三区在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 91大片在线观看| 91精品国产国语对白视频| 91九色精品人成在线观看| 高清欧美精品videossex| 精品福利观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 999久久久精品免费观看国产| 国产深夜福利视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 两个人免费观看高清视频| 一进一出好大好爽视频| 成年人免费黄色播放视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 高清黄色对白视频在线免费看| 午夜免费激情av| 黄色片一级片一级黄色片| 91麻豆av在线| 中文字幕最新亚洲高清| 午夜日韩欧美国产| 水蜜桃什么品种好| 超碰97精品在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 午夜福利欧美成人| 欧美黄色片欧美黄色片| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 久久午夜综合久久蜜桃| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 欧美成人午夜精品| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产一区在线观看成人免费| 深夜精品福利| 大陆偷拍与自拍| 免费搜索国产男女视频| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 99久久精品国产亚洲精品| 美女 人体艺术 gogo| 精品福利永久在线观看| 脱女人内裤的视频| 亚洲成人免费av在线播放| 国产亚洲精品久久久久5区| 精品午夜福利视频在线观看一区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 久久久国产成人免费| 亚洲免费av在线视频| 久久国产精品人妻蜜桃| av电影中文网址| 国产99白浆流出| 免费少妇av软件| 99国产精品免费福利视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美精品一区二区免费开放| 十分钟在线观看高清视频www| 搡老乐熟女国产| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 黄色成人免费大全| 97碰自拍视频| a级片在线免费高清观看视频| 国产成人精品在线电影| 在线观看午夜福利视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲男人的天堂狠狠| 韩国av一区二区三区四区| 国产精品免费视频内射| av中文乱码字幕在线| 久久中文看片网| 国产伦人伦偷精品视频| 制服诱惑二区| 性欧美人与动物交配| 精品国产乱子伦一区二区三区| 9热在线视频观看99| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产亚洲精品第一综合不卡| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久99一区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 正在播放国产对白刺激| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 亚洲成人久久性| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久久国产一区二区| 可以在线观看毛片的网站| 在线观看66精品国产| 欧美日韩精品网址| 色哟哟哟哟哟哟| 国产精品1区2区在线观看.| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品一区二区三区四区久久 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久精品国产综合久久久| 精品国产亚洲在线| 国产成人系列免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲国产欧美一区二区综合| 热99re8久久精品国产| 9色porny在线观看| 亚洲一区中文字幕在线| 国产av在哪里看| 天堂√8在线中文| 一级片免费观看大全| aaaaa片日本免费| 人人澡人人妻人| 午夜激情av网站| 亚洲少妇的诱惑av| 男女床上黄色一级片免费看| 日韩av在线大香蕉| 十分钟在线观看高清视频www| 搡老乐熟女国产| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 一区二区日韩欧美中文字幕| 99国产综合亚洲精品| av福利片在线| 欧美中文综合在线视频| 国产1区2区3区精品| 国产精品免费视频内射| 色在线成人网| 一区二区日韩欧美中文字幕| 嫩草影院精品99| 国产av又大| 国产高清videossex| 在线十欧美十亚洲十日本专区| ponron亚洲| 午夜福利,免费看| 交换朋友夫妻互换小说| 在线观看免费午夜福利视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美乱码精品一区二区三区| 不卡一级毛片| 婷婷六月久久综合丁香| 叶爱在线成人免费视频播放| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品一区二区免费欧美| 老司机亚洲免费影院| 好男人电影高清在线观看| 亚洲久久久国产精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 欧美中文日本在线观看视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 一级黄色大片毛片| 国产主播在线观看一区二区| 日本a在线网址| 精品国产一区二区久久| 国产精品一区二区免费欧美| 欧美激情久久久久久爽电影 | 在线观看www视频免费| 国产在线观看jvid| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品 欧美亚洲| 热99国产精品久久久久久7| 欧美+亚洲+日韩+国产| www.999成人在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 91麻豆av在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲av美国av| a级毛片在线看网站| 亚洲avbb在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 一本综合久久免费| av中文乱码字幕在线| 91成年电影在线观看| 99香蕉大伊视频| 欧美大码av| 国产视频一区二区在线看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久精品欧美日韩精品| av超薄肉色丝袜交足视频| 日韩欧美在线二视频| a级毛片黄视频| avwww免费| 一级片免费观看大全| 国产高清videossex| 久久国产精品影院| av欧美777| 又大又爽又粗| 国产人伦9x9x在线观看| av免费在线观看网站| 婷婷六月久久综合丁香| 午夜福利在线观看吧| 老司机福利观看| 老司机亚洲免费影院| 一级a爱片免费观看的视频| 天天添夜夜摸| 老鸭窝网址在线观看| 欧美中文综合在线视频| 97人妻天天添夜夜摸| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲七黄色美女视频| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品一区二区精品视频观看| 午夜福利一区二区在线看| 国产有黄有色有爽视频| 99久久精品国产亚洲精品| 久久精品国产综合久久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 免费高清在线观看日韩| 老司机午夜十八禁免费视频| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久人人精品亚洲av| 日韩欧美免费精品| www国产在线视频色| av网站在线播放免费| 亚洲精品久久午夜乱码| 男人舔女人的私密视频| 嫩草影院精品99| 精品久久蜜臀av无| 色综合婷婷激情| 色在线成人网| 69av精品久久久久久| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久香蕉精品热| 国产成年人精品一区二区 | 国产精品亚洲一级av第二区| 18禁国产床啪视频网站| 中文欧美无线码| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 色哟哟哟哟哟哟| 色综合站精品国产| 日本vs欧美在线观看视频| 午夜91福利影院| 亚洲成人精品中文字幕电影 | 少妇的丰满在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 在线观看一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲精品美女久久av网站| 久久香蕉激情| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产精品二区激情视频| 电影成人av| 精品一区二区三区av网在线观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久久久久大精品| 国产精品亚洲av一区麻豆| 不卡av一区二区三区| 国产精品久久久人人做人人爽| 两性夫妻黄色片| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品久久久av美女十八| 国产精品久久视频播放| 精品久久久久久久久久免费视频 | 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 人人妻人人澡人人看| 香蕉久久夜色| 亚洲成人免费av在线播放| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久久热在线av| 神马国产精品三级电影在线观看 | 欧美成狂野欧美在线观看| 中文字幕高清在线视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 中国美女看黄片| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲美女黄片视频| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 亚洲国产精品sss在线观看 | 黄色丝袜av网址大全| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 久久中文字幕一级| 成人18禁在线播放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品av久久久久免费| 亚洲avbb在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 天堂中文最新版在线下载| 夫妻午夜视频| 色哟哟哟哟哟哟| 黄色视频,在线免费观看| 中出人妻视频一区二区| 在线观看免费视频日本深夜| 成人免费观看视频高清| 久久久久国产一级毛片高清牌| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲欧美激情综合另类| 午夜激情av网站| 国产精品九九99| 精品久久蜜臀av无| 亚洲中文字幕日韩| 久久久久久久午夜电影 | 91成人精品电影| a级毛片在线看网站| 脱女人内裤的视频| 亚洲国产精品999在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 午夜91福利影院| 另类亚洲欧美激情| 一级作爱视频免费观看| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲av美国av| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品1区2区在线观看.| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 男人舔女人的私密视频| 久久久久久久久久久久大奶| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久久国产欧美日韩av| 中文欧美无线码| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 身体一侧抽搐| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| av片东京热男人的天堂| 一二三四在线观看免费中文在| 久久香蕉国产精品| 校园春色视频在线观看| 超碰97精品在线观看| 99国产综合亚洲精品| 黑人欧美特级aaaaaa片| 美女大奶头视频| 久久久久九九精品影院| 9191精品国产免费久久| 国产成人系列免费观看| 国产精华一区二区三区| 咕卡用的链子| 国产精品免费一区二区三区在线| 在线观看免费午夜福利视频| 超碰成人久久| 天堂√8在线中文| 老司机午夜福利在线观看视频| 日本黄色视频三级网站网址| videosex国产| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 悠悠久久av| 香蕉丝袜av| 亚洲情色 制服丝袜| 国产三级在线视频| 久久久久九九精品影院| 免费高清在线观看日韩| 婷婷丁香在线五月| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲成人国产一区在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 夜夜看夜夜爽夜夜摸 | 99热国产这里只有精品6| 99国产精品一区二区三区| 国产一区二区三区综合在线观看| 成人国语在线视频| 亚洲熟女毛片儿| 欧美黑人欧美精品刺激| 两人在一起打扑克的视频| 热re99久久精品国产66热6| 性色av乱码一区二区三区2| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 波多野结衣高清无吗| 老鸭窝网址在线观看| 看片在线看免费视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| aaaaa片日本免费| 亚洲av五月六月丁香网| av在线天堂中文字幕 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲第一青青草原| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产一区二区三区视频了| 亚洲av熟女| 窝窝影院91人妻| 两个人免费观看高清视频| 日韩有码中文字幕| 亚洲专区国产一区二区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 色在线成人网| 久久久国产成人免费| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 中文字幕人妻丝袜制服| 精品一区二区三区av网在线观看| 日本欧美视频一区| www.www免费av| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 午夜福利免费观看在线| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲国产精品999在线| 日本一区二区免费在线视频| 成年版毛片免费区| 黄色视频,在线免费观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 波多野结衣av一区二区av| 99热国产这里只有精品6| 亚洲欧美激情在线| 中文字幕人妻丝袜制服| 日韩欧美在线二视频| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美性长视频在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美大码av| 免费看a级黄色片| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲熟女毛片儿| 精品福利永久在线观看| 亚洲av成人一区二区三| 99国产精品免费福利视频| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲国产看品久久| 很黄的视频免费| 成人av一区二区三区在线看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲久久久国产精品| www.熟女人妻精品国产| 亚洲第一av免费看| 老司机午夜十八禁免费视频| 妹子高潮喷水视频| 亚洲五月天丁香| 女性被躁到高潮视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 精品高清国产在线一区| 在线天堂中文资源库| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久国产成人精品二区 | av福利片在线| 成人特级黄色片久久久久久久| 电影成人av| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲av电影在线进入| 中文字幕高清在线视频| 日本黄色日本黄色录像| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 很黄的视频免费| 男人舔女人的私密视频| 久久久国产成人免费| 久久精品91蜜桃| 国产精品 国内视频| 女性被躁到高潮视频| 香蕉丝袜av| 咕卡用的链子| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产精品一区二区在线不卡| 黄色女人牲交| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产又色又爽无遮挡免费看| 在线av久久热| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 精品久久久久久电影网| 日韩精品青青久久久久久| 精品无人区乱码1区二区| 少妇粗大呻吟视频| 中文欧美无线码| 一边摸一边做爽爽视频免费| 久久人妻熟女aⅴ| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久中文字幕一级| 无限看片的www在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 免费观看人在逋| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲av电影在线进入| 怎么达到女性高潮| 99在线人妻在线中文字幕| 怎么达到女性高潮| 老汉色av国产亚洲站长工具| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产在线精品亚洲第一网站| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产成人av激情在线播放| 日韩欧美三级三区| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久久久久久免费视频了| 欧美黑人欧美精品刺激| 淫妇啪啪啪对白视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲情色 制服丝袜| 深夜精品福利| 精品国产乱子伦一区二区三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 可以在线观看毛片的网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 在线观看免费高清a一片| 女性生殖器流出的白浆| 午夜视频精品福利| 久久九九热精品免费| 老汉色∧v一级毛片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 嫩草影视91久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲精品一区av在线观看| 性欧美人与动物交配| 最好的美女福利视频网| 亚洲一区高清亚洲精品| 99国产极品粉嫩在线观看| 三级毛片av免费| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产国语露脸激情在线看| 男女午夜视频在线观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 国产片内射在线| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 成人精品一区二区免费| 99国产综合亚洲精品| 日韩国内少妇激情av| 在线看a的网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产黄色免费在线视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 嫁个100分男人电影在线观看| 色老头精品视频在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲人成电影免费在线| av中文乱码字幕在线| 婷婷丁香在线五月| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 美女福利国产在线| 大陆偷拍与自拍| 午夜福利影视在线免费观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 中文欧美无线码| 成人国产一区最新在线观看| 成人国语在线视频| 午夜福利欧美成人| 久久影院123| 久久久水蜜桃国产精品网| 咕卡用的链子| av网站免费在线观看视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 免费在线观看黄色视频的| 新久久久久国产一级毛片| 高清av免费在线| 1024香蕉在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美不卡视频在线免费观看 | 成人手机av| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 两人在一起打扑克的视频| 久久狼人影院| 人人澡人人妻人| 天天添夜夜摸|