胡柚黃酮對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠模型腸道菌群的調(diào)節(jié)作用

王方杰，吳祖芳，翁佩芳，張 鑫，田 園

（寧波大學(xué)食品與藥學(xué)學(xué)院，浙江省動(dòng)物蛋白精深加工技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 寧波 315832）

肥胖是一種慢性代謝紊亂，能夠大幅增加罹患2型糖尿病、脂肪肝、高血壓、心肌梗塞和癌癥等疾病的風(fēng)險(xiǎn)，從而導(dǎo)致患者生活質(zhì)量下降和預(yù)期壽命縮短，故預(yù)防和治療肥胖已成為現(xiàn)代社會(huì)面臨的主要健康挑戰(zhàn)[1-2]。近年來(lái)，眾多的研究表明腸道微生物對(duì)人體健康起著至關(guān)重要的作用，能夠改善免疫系統(tǒng)、調(diào)節(jié)宿主代謝、平衡營(yíng)養(yǎng)素的吸收，菌群的多樣性與機(jī)體健康息息相關(guān)[3]。與正常個(gè)體相比，肥胖宿主的腸道菌群顯示出較低的基因豐度[4-5]，適當(dāng)?shù)娘嬍掣深A(yù)可以增強(qiáng)腸道菌群的基因豐度并促進(jìn)體質(zhì)量減輕[6]。腸道菌群與肥胖的關(guān)系已成為研究的熱點(diǎn)，且是治療肥胖的潛在有效靶點(diǎn)。

許多研究表明，植物活性物質(zhì)具有預(yù)防肥胖的作用，并可能通過調(diào)節(jié)腸道菌群來(lái)減輕體質(zhì)量[7-9]。胡柚為蕓香科植物柚與甜橙的雜交品種，是浙江省常山縣原產(chǎn)的地方柑橘品種，具有鎮(zhèn)咳化痰、消食舒胃等功效[10]。黃酮類化合物（flavonoids，F(xiàn)LS）是胡柚中重要的生物活性物質(zhì)，胡柚黃酮的主要成分為柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等[11]。研究表明，F(xiàn)LS能夠利用其抗氧化和抗炎特性在超重胰島素抵抗大鼠中發(fā)揮潛在的肥胖治療作用[12]，并降低血漿脂質(zhì)濃度，改善高碳水化合物、高脂肪飲食誘導(dǎo)的大鼠心血管功能障礙和肥胖[13]。在FLS發(fā)揮作用的機(jī)制中，腸道菌群被認(rèn)為起到核心作用，這不僅是因?yàn)橐恍〧LS具有抑菌作用，而且也特異性地促進(jìn)了部分細(xì)菌的增殖[14-15]。然而，胡柚黃酮與肥胖宿主腸道菌群間的相互作用并不清楚。本研究擬采用高脂肪飲食（high fat diet，HFD）誘導(dǎo)建立高脂肥胖小鼠模型，應(yīng)用16S rDNA測(cè)序技術(shù)，探究胡柚黃酮對(duì)HFD小鼠腸道菌群的影響及對(duì)肥胖的調(diào)控作用，為胡柚資源的深度開發(fā)和黃酮類化合物作為功能性成分的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用SPF級(jí)C57BL/6J小鼠（6 周齡，雄性，平均體質(zhì)量（20±2）g），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（浙）2013-0191，購(gòu)于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

胡柚黃酮為常山胡柚干燥粉末采用乙醇浸提法得到的粗提物，經(jīng)D101型大孔樹脂進(jìn)一步純化，所得提取物的總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為95%；標(biāo)準(zhǔn)飼料由寧波大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；高脂飼料購(gòu)自南通特洛菲飼料科技有限公司。

總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（highdensity lipoprotein cholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）試劑盒 南京建成生物工程研究所；蘇木精-伊紅染液 武漢谷歌生物科技有限公司；DNA提取試劑盒（E.Z.N.A.?Stool DNA Kit） 美國(guó)Omega Bio-Tek公司；DL2000 DNA Marker 日本寶生物工程（大連）有限公司；瓊脂糖（RA1011-Agarose LE-100G） 上海捷瑞生物工程有限公司；氯化鈉、異丙醇、無(wú)水乙醇、多聚甲醛 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

AY-120型電子精密天平 日本Shimadzu公司；LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器、無(wú)菌硬質(zhì)糞便收集袋 上海申安醫(yī)療器械廠；Spectramax190全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀 美國(guó)Molecular Devices有限公司；5418R小型高速冷凍離心機(jī)、5804R高速冷凍離心機(jī)德國(guó)Eppendorf 公司；MX-S/M X-F 型漩渦混合器 大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器北京有限公司；Cryotome E冰凍切片機(jī) 賽默飛世爾科技中國(guó)有限公司；ECLIPSE CI正置光學(xué)顯微鏡 日本尼康公司；L96G梯度型聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 杭州朗基科學(xué)儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物分組和處理

小鼠購(gòu)得后經(jīng)外包裝滅菌處理立即轉(zhuǎn)入寧波大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，SPF級(jí)屏障系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行飼養(yǎng)，溫度和相對(duì)濕度分別控制在（22±2）℃和（50±10）%，12 h光照和12 h黑暗交替循環(huán)，小鼠自由飲食飲水。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，所有涉及動(dòng)物的程序均嚴(yán)格按照中國(guó)有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的相關(guān)飼養(yǎng)規(guī)范和法律規(guī)定進(jìn)行。

小鼠經(jīng)過1 周的適應(yīng)性飼養(yǎng)，每組6 只，隨機(jī)分為3 組：正常對(duì)照組（CONT組）、高脂肥胖組（HFD組）、胡柚黃酮組（FLS組），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具體分組情況見表1。稱取一定量的胡柚黃酮溶解于無(wú)菌水中，避光保存，采用灌胃的方式按100 mg/（kgmb·d）的劑量對(duì)FLS組小鼠進(jìn)行干預(yù)，每日1 次，CONT組和HFD組灌胃等體積無(wú)菌水（在此劑量下小鼠精神正常，無(wú)任何異?，F(xiàn)象，無(wú)一例死亡）。實(shí)驗(yàn)以第一天灌胃為第0周，共持續(xù)8 周，每周3 次記錄小鼠的體質(zhì)量和攝食量并計(jì)算平均值，同時(shí)在第0、2、4、8周（分別為FLS 0、FLS 2、FLS 4、FLS 8組）收集每組小鼠的新鮮糞便樣本，液氮速凍后置于-80 ℃冰箱中保存，用于腸道菌群分析。第8周末，所有小鼠禁食過夜，通過頸椎脫臼處死小鼠，立即收集血液樣本，并在4 ℃下3 500×g離心10 min，取上層血清用于生化測(cè)定。迅速解剖小鼠，分離肝臟組織用于病理學(xué)檢測(cè)。

表1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組Table 1 Animal grouping

1.3.2 血清生化指標(biāo)測(cè)定

小鼠血清中TC、TG、HDL-C和LDL-C含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的測(cè)試盒進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定方法嚴(yán)格按照測(cè)試盒說(shuō)明進(jìn)行。

1.3.3 肝臟組織病理學(xué)檢測(cè)

將新鮮肝臟組織在4%多聚甲醛溶液中固定24 h后，用OTC包埋劑進(jìn)行包埋。快速冷凍后切下組織切片（8～10 μm），并用油紅O染色，在光學(xué)顯微鏡200×放大倍數(shù)下觀察肝臟脂肪變性程度。

1.3.4 糞便細(xì)菌DNA提取和16S rDNA測(cè)序分析

參考文獻(xiàn)[16]報(bào)道的方法，采用E.Z.N.A.?Stool DNA Kit提取小鼠糞便中細(xì)菌的總DNA，并對(duì)提取的DNA樣本進(jìn)行質(zhì)檢，檢驗(yàn)合格的樣本用于后續(xù)分析。以16S rDNA高變區(qū)中的V3+V4區(qū)為目標(biāo)測(cè)序片段，采用帶Barcode的特異引物338F（5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’）和806R（5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）對(duì)目標(biāo)片段進(jìn)行PCR擴(kuò)增，每個(gè)樣品進(jìn)行3 次重復(fù)。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)目標(biāo)片段進(jìn)行回收、純化。對(duì)純化后的PCR產(chǎn)物采用Quant-iT PicoGreen dsDNA檢測(cè)試劑盒在Qbit熒光定量系統(tǒng)上對(duì)文庫(kù)進(jìn)行定量，將合格的文庫(kù)在Illumina MiSeq平臺(tái)上對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)序。

采用FLASH（v1.2.8）軟件將序列拼接成高質(zhì)量Tags，并將序列建庫(kù)引入的Barcode和引物序列去除，然后采用Vsearch（v2.3.4）軟件過濾嵌合體。將序列相似度大于97%的clean tags聚類為操作分類單元（operational taxonomic unit，OTU）。使用QIIME（v1.8.0）軟件計(jì)算樣本的Alpha多樣性，對(duì)樣本進(jìn)行物種多樣性分析。通過主坐標(biāo)分析計(jì)算Beta多樣性，用于評(píng)估樣本在物種多樣性中的差異。使用BLAST進(jìn)行序列比對(duì)，將OTU代表序列與核糖體數(shù)據(jù)庫(kù)以及NCBI-16S數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)比，對(duì)每個(gè)代表性序列進(jìn)行物種注釋，獲得分類學(xué)信息，在門、科、屬水平上統(tǒng)計(jì)樣本的群落結(jié)構(gòu)組成并進(jìn)行分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有實(shí)驗(yàn)均進(jìn)行3 次平行實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)采用Duncan’s多重比較檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05則認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 FLS對(duì)高脂肥胖小鼠攝食量和體質(zhì)量的影響

圖1 FLS灌胃期間小鼠日攝食量變化Fig. 1 Changes in daily food intake of mice during administration of FLS

各組小鼠的日均攝食量在實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)基本穩(wěn)定，由圖1可看出，CONT組、HFD組和FLS組小鼠的攝食量無(wú)顯著性差異（P＞0.05），表明對(duì)高脂肥胖小鼠喂食FLS不會(huì)引起小鼠的食欲下降。

圖2 FLS灌胃期間小鼠體質(zhì)量變化Fig. 2 Changes in body mass of mice during administration of FLS

對(duì)8 周實(shí)驗(yàn)過程中各組小鼠的平均體質(zhì)量進(jìn)行比較。第0周時(shí)，3 組小鼠具有相似的初始體質(zhì)量。從圖2 A 中可以看出，經(jīng)過8 周的高脂飲食誘導(dǎo)，HFD組小鼠體質(zhì)量與CONT組相比具有顯著性差異（P＜0.05）；隨著胡柚黃酮樣品的灌胃處理，從第4周起，F(xiàn)LS組的平均體質(zhì)量顯著低于HFD組（P＜0.05），第7周起具有極顯著差異（P＜0.01）。第8周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)（圖2B），F(xiàn)LS組的平均體質(zhì)量為（28.20±0.85）g，與食物攝入量相同的HFD組平均體質(zhì)量（（31.23±0.80）g）相比極顯著降低（P＜0.01）。表明FLS顯著緩解了高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠的體質(zhì)量增加。

2.2 FLS對(duì)高脂肥胖小鼠血清生化指標(biāo)的影響

圖3 FLS灌胃對(duì)小鼠血清生化指標(biāo)的影響Fig. 3 Effect of FLS on serum biochemical parameters in mice

由圖3可知，與CONT組相比，HFD小鼠的TC、TG和LDL-C濃度顯著升高，HDL-C濃度顯著下降（P＜0.05），出現(xiàn)高血脂癥狀，證明高脂肥胖小鼠模型誘導(dǎo)成功。經(jīng)過胡柚黃酮干預(yù)后，同樣喂食高脂飼料的FLS組與HFD組相比較TC、TG和LDL-C濃度則顯著降低，HDL-C濃度顯著升高（P＜0.05），其中LDL-C濃度基本恢復(fù)至正常水平。

2.3 FLS對(duì)高脂肥胖小鼠肝臟病理的影響

圖4 小鼠肝臟組織學(xué)觀察（×200）Fig. 4 Histological observation of liver tissue (× 200)

由圖4可知，CONT組小鼠肝臟組織油紅O染色面積較小，脂滴也很小，肝細(xì)胞形態(tài)正常；而HFD組肝臟組織中出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變性，脂滴數(shù)目明顯增多且呈堆積狀，融合為大塊的紅色脂滴；相比之下，F(xiàn)LS組肝臟切片紅色脂滴體積明顯減小，較為稀疏，呈小顆粒狀不均勻分布，肝細(xì)胞脂肪輕度變性。

2.4 FLS對(duì)高脂肥胖小鼠腸道菌群多樣性的影響

為了評(píng)價(jià)高脂飲食和FLS處理對(duì)腸道菌群多樣性的影響，利用Illumina MiSeq測(cè)序平臺(tái)對(duì)第0、2、4、8周小鼠糞便樣本進(jìn)行16S rDNA測(cè)序。利用顯示組間重疊部分的Venn圖可以直觀地理解各組之間共有和獨(dú)有的OTU。由圖5A可見，所有樣品中共享1 284 個(gè)OTU總豐富度中的219 個(gè)，灌胃FLS后觀察到的OTU＞17%，與實(shí)驗(yàn)初始時(shí)相同。

圖5 FLS對(duì)肥胖小鼠腸道菌群多樣性的影響Fig. 5 Effect of FLS on the diversity of gut microbiota in obese mice

表2 FLS對(duì)肥胖小鼠腸道菌群多樣性的影響Table 2 Effect of FLS on the diversity of gut microbiota in obese mice

Alpha多樣性主要反映物種豐富度和均勻度。由表2可知，隨著FLS的灌胃，與實(shí)驗(yàn)第0周相比，第8周FLS組的Observed species和Chao1指數(shù)顯著升高，表明第8周小鼠腸道菌群的物種數(shù)目顯著高于實(shí)驗(yàn)初期（P＜0.05）。Shannon和Simpson指數(shù)也隨著FLS處理時(shí)間的延長(zhǎng)分別發(fā)生了顯著升高和降低（P＜0.05），腸道菌群多樣性逐漸增加并在第8周達(dá)到最大值。結(jié)果表明，F(xiàn)LS能夠增加高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠腸道菌群的多樣性。

為了比較微生物群落之間的相似性程度，通過未加權(quán)的UniFrac計(jì)算Beta多樣性并進(jìn)行主坐標(biāo)分析。由圖5B可看出，雖然存在個(gè)體間差異，但經(jīng)過FLS干預(yù)的肥胖小鼠腸道菌群在不同時(shí)間點(diǎn)彼此分開聚集，表明在8 周時(shí)間內(nèi)FLS干預(yù)對(duì)腸道菌群組成有明顯影響。

2.5 FLS對(duì)高脂肥胖小鼠腸道菌群組成結(jié)構(gòu)的影響

圖6 FLS對(duì)肥胖小鼠腸道菌群組成結(jié)構(gòu)的影響Fig. 6 Effect of FLS on the composition of gut microbiota in obese mice

表3 擬桿菌門和厚壁菌門相對(duì)豐度變化Table 3 Changes in relative abundance of Bacteroidetes and Firmicutes

為了進(jìn)一步分析FLS對(duì)腸道菌群組成結(jié)構(gòu)的影響，對(duì)不同分類水平上優(yōu)勢(shì)菌的相對(duì)豐度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。門水平的聚類柱狀圖（圖6A）顯示，小鼠腸道中的優(yōu)勢(shì)菌群為擬桿菌門（Bacteroidetes）、厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（Proteobacteria）。隨著FLS的干預(yù)，從第0周（FLS 0）到第8周（FLS 8），小鼠腸道菌群的結(jié)構(gòu)逐漸改變，Bacteroidetes的相對(duì)豐度增加，F(xiàn)irmicutes的相對(duì)豐度減少。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，F(xiàn)irmicutes/Bacteroidetes（F/B）的比值可能反映腸道微生態(tài)的平衡狀態(tài)，被視為生物體健康狀況的典型參數(shù)[4]。對(duì)3 組小鼠腸道菌群第0周和第8周Bacteroidetes和Firmicutes的相對(duì)豐度變化進(jìn)行統(tǒng)計(jì)（表3）發(fā)現(xiàn)，HFD組小鼠的Bacteroidetes顯著降低，F(xiàn)irmicutes顯著增加，F(xiàn)/B比值相應(yīng)增加（P＜0.05），反映出肥胖小鼠腸道微生態(tài)的失調(diào)。而隨著FLS處理時(shí)間的延長(zhǎng)，F(xiàn)LS組的F/B比值從0.81逐漸下降到0.48。表明FLS能夠調(diào)節(jié)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠腸道菌群在門水平上的組成。

科水平上小鼠腸道菌群相對(duì)豐度的前2 0 名如圖6 B 所示，可以看出，擬桿菌門的普雷沃氏菌科（Prevotellaceae）、擬桿菌科（Bacteroidaceae）、紫單胞菌科（Porphyromonadaceae）以及厚壁菌門的毛螺菌科（Lachnospiraceae）等為主要優(yōu)勢(shì)菌科。灌胃FLS后，與實(shí)驗(yàn)初期（FLS 0）相比，Prevotellaceae、Bacteroidaceae、Porphyromonadaceae的相對(duì)豐度增加，Lachnospiraceae、Ruminococcaceae的相對(duì)豐度逐漸減少。表明FLS能夠調(diào)節(jié)肥胖小鼠腸道菌群在科水平上的組成結(jié)構(gòu)。

用熱圖來(lái)比較屬水平上各個(gè)菌屬的相對(duì)豐度變化，由圖6C可知，隨著FLS干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng)，普雷沃菌屬（Prevotella）、擬桿菌屬（Bacteroides）、布勞特氏菌屬（Blautia）、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）、艾克曼菌屬（Akkermansia）等相對(duì)豐度明顯增加，而瘤胃球菌屬（Ruminococcus）、毛螺菌屬（Lachnoclostridium）、嗜膽菌屬（Bilophila）等相對(duì)豐度逐漸下降，這與科水平上的菌群變化趨勢(shì)一致。

3 討 論

與肥胖相關(guān)的血脂水平異常，尤其是較高水平的TC、TG和LDL-C是心血管疾病的主要決定因素[17]。本研究表明，高脂肥胖小鼠經(jīng)胡柚黃酮灌胃后，與HFD組相比FLS組小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)，血清TC、TG和LDL-C的含量顯著降低，HDL-C的含量顯著升高，肝臟組織的脂質(zhì)積累程度也得到了緩解。胡柚黃酮體現(xiàn)的這些效果與相關(guān)文獻(xiàn)所報(bào)道血脂水平TC、TG和LDL-C指標(biāo)相關(guān)結(jié)果一致[18-20]。此外，血清中的HDL-C水平可作為判斷動(dòng)脈硬化性心血管疾病發(fā)展程度的指標(biāo)[21]。胡柚黃酮能降低血清TC、TG和LDL-C水平，使血脂組成向高密度脂蛋白轉(zhuǎn)變，在一定程度上調(diào)節(jié)高脂肥胖小鼠的體內(nèi)血脂水平，降低肥胖和動(dòng)脈粥樣硬化等疾病的風(fēng)險(xiǎn)。肝臟是機(jī)體內(nèi)脂類代謝的主要器官，攝入脂肪過多時(shí)，肝細(xì)胞會(huì)大量積累脂肪，甚至可能發(fā)生病變，形成脂肪肝[22-23]。實(shí)驗(yàn)表明，HFD組小鼠肝臟細(xì)胞脂質(zhì)沉積嚴(yán)重，而胡柚黃酮能夠明顯地抑制高脂飲食導(dǎo)致的肝臟組織脂質(zhì)積累，改善肝臟脂肪變性程度，防止脂肪肝等肝臟病變的發(fā)生。

腸道菌群可能是肥胖發(fā)展過程中最重要的可變因素[24-25]，其中的幾個(gè)特定種屬可以在宿主代謝和肥胖發(fā)展中發(fā)揮重要作用[26-27]。從FLS的干預(yù)對(duì)肥胖小鼠腸道菌群變化的影響結(jié)果可以看出，胡柚黃酮的干預(yù)顯著提高了肥胖小鼠腸道菌群的多樣性，對(duì)腸道菌群的組成結(jié)構(gòu)發(fā)揮了積極的調(diào)節(jié)作用，且具有一定的時(shí)間效應(yīng)。由2.5節(jié)結(jié)果可知，F(xiàn)LS能夠促進(jìn)Bifidobacterium、Blautia、Akkermansia等有益菌屬的增殖。Bifidobacterium能夠改善腸道環(huán)境、抑制腸道有害細(xì)菌的生長(zhǎng)、提高肌體免疫力、預(yù)防便秘等，對(duì)人體健康有重要作用[28]；另有研究報(bào)道，Bifidobacterium可通過調(diào)節(jié)腸道屏障、緩解炎癥等降低體質(zhì)量[27]，近幾年作為益生菌被廣泛用于針對(duì)肥胖、糖尿病等代謝疾病[29]。Blautia的相對(duì)豐度與機(jī)體腸道內(nèi)短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFAs）的含量呈正相關(guān)[30]，菌群代謝產(chǎn)物SCFAs對(duì)腸道屏障、菌群組成和肥胖控制有益[31]。研究證明，結(jié)腸中高濃度的丙酸和丁酸對(duì)于防止低膽固醇血癥和腫瘤的發(fā)生具有良好的效果[32]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)LS能夠顯著降低肥胖小鼠血清中LDL-C的含量，可能是通過提高腸道中Blautia等SCFAs產(chǎn)生菌屬的相對(duì)豐度來(lái)實(shí)現(xiàn)的。黏蛋白降解菌屬Akkermansia有助于改善肝功能異常和機(jī)體炎癥[27]，通過補(bǔ)充益生元增加肥胖小鼠體內(nèi)Akkermansia的豐度可以改善相關(guān)代謝特征，逆轉(zhuǎn)高脂飲食帶來(lái)的代謝紊亂[33]。FLS的干預(yù)使Akkermansia屬豐度提高，從而改善肥胖小鼠的代謝指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明FLS對(duì)肥胖小鼠腸道菌群的組成結(jié)構(gòu)具有積極的調(diào)節(jié)作用，能夠增加有益菌群的相對(duì)豐度，從而對(duì)肥胖宿主的代謝產(chǎn)生積極的影響。

4 結(jié) 論

通過研究胡柚黃酮對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠血清和肝臟病理學(xué)及腸道菌群的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果表明，攝入胡柚黃酮能夠明顯抑制體質(zhì)量增加，使肥胖小鼠的血脂水平和肝臟脂質(zhì)積累程度向正常化恢復(fù)，降低肥胖和脂肪肝等疾病的風(fēng)險(xiǎn)；能夠顯著提高肥胖小鼠腸道菌群的多樣性，在門水平上增加了Bacteroidetes的相對(duì)豐度，降低了Firmicutes的相對(duì)豐度，逆轉(zhuǎn)了菌群失調(diào)的肥胖小鼠F/B比值的升高，并通過增加特定的有益菌屬（如Bifidobacterium、Blautia、Akkermansia等）的相對(duì)豐度使肥胖小鼠的腸道菌群發(fā)生有利改變，促進(jìn)細(xì)菌生成SCFAs，調(diào)節(jié)腸道屏障，改善肥胖引起的代謝紊亂。因此，胡柚黃酮在腸道菌群的調(diào)節(jié)中呈現(xiàn)良好的益生作用，可作為功能性食品成分預(yù)防腸道微生態(tài)的失調(diào)，通過調(diào)節(jié)腸道菌群的結(jié)構(gòu)實(shí)現(xiàn)降脂減肥的目的。