• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚幼魚氧化應(yīng)激和能量代謝的影響

    2020-11-27 02:05:36侯懿玲苗藝馨莊淑婷曲憲成劉其根
    淡水漁業(yè) 2020年6期
    關(guān)鍵詞:氧化應(yīng)激

    齊 明,侯懿玲,劉 韜,苗藝馨,莊淑婷,曲憲成,劉其根

    (1.上海海洋大學(xué),水產(chǎn)科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心,上海 201306;2.上海海洋大學(xué),農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實驗室,上海 201306;3.上海海洋大學(xué),上海水產(chǎn)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心,上海 201306)

    溶氧(DO)是影響魚類生存的重要環(huán)境因子之一,生境中溶氧的含量影響其代謝、生長和繁育等生理活動[1]。水體中急性低氧一直是水產(chǎn)養(yǎng)殖中棘手的問題,除輔助人工增氧,更多的是依靠魚類的生理代謝進(jìn)行適應(yīng)性調(diào)節(jié)來緩解[2]。魚類在急性低氧生境中,易誘發(fā)機(jī)體的氧化應(yīng)激反應(yīng),尤其在低氧后的復(fù)氧過程中,氧化應(yīng)激會更加劇烈[3]。氧化應(yīng)激會產(chǎn)生過量的活性氧(ROS),擾亂機(jī)體內(nèi)ROS的動態(tài)平衡,損傷細(xì)胞內(nèi)的大分子物質(zhì)并引起代謝紊亂;同時生境中低氧也會造成魚體組織的缺氧,干擾正常的能量代謝[4]。

    青田田魚(Cyprinuscarpiovarqingtianensis)又稱甌江彩鯉、田魚,隸屬于鯉形目(Cypriniformes)鯉科(Cyprinidae)鯉屬(Cyprinus),是浙江青田、永嘉一帶一種特有的稻田養(yǎng)殖鯉[5]。稻田生境有別于傳統(tǒng)水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境,其顯著特征為DO晝夜變化幅度較大并存在長時間低氧期(6~10 h,DO<4 mg/L),同時存在干涸的風(fēng)險并且無法有效進(jìn)行人工輔助增氧[6]。青田田魚是如何適應(yīng)稻田生境,尚未有報道。本研究以青田田魚為研究對象,探討其在低氧脅迫和復(fù)氧過程中肝胰臟中氧化應(yīng)激、呼吸和能量代謝指標(biāo)的變化,了解青田田魚對溶氧變化的適應(yīng)性調(diào)節(jié)機(jī)制,為青田田魚對稻田水環(huán)境適應(yīng)性提供佐證,也為其他魚類在急性溶氧變化的生理調(diào)控機(jī)制研究提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    試驗用魚購自浙江省青田縣愚公生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司同一批次繁育的幼魚,選取活力好,健康無損傷,體長(17.12±0.59)cm和體質(zhì)量(84.55±7.25)g的幼魚運(yùn)送至上海海洋大學(xué)生態(tài)與漁業(yè)實驗室進(jìn)行2周暫養(yǎng)。

    1.2 試驗設(shè)計

    暫養(yǎng)時將63尾幼魚隨機(jī)平均分配在3個200 L實驗桶(養(yǎng)殖用水體積150 L)中,每日投喂鯉人工配合餌料1次(寧波天邦食品股份有限公司),每日8∶00和18∶00分別使用曝氣自來水換水一次,每次換水量約為養(yǎng)殖水體的1/2。暫養(yǎng)期間水中溶氧為(7.45±0.16)mg/L,水溫為(25.91±1.27)℃,氨氮為(0.19±0.02)mg/L。正式試驗前一天停止投食,但每日正常換水兩次。低氧脅迫實驗前,完成常氧組的取樣(每個實驗桶取3尾,同一實驗桶中3尾魚相同組織混樣),此時的溶氧含量為(7.13±0.28)mg/L,水溫為(25.17±0.41)℃。隨后往水中注入氮?dú)?,待水中溶氧下降?.5 mg/L左右后,調(diào)節(jié)氮?dú)夂涂諝獾淖⑷肓髁縼砜刂扑械娜苎酰謩e在第2,4和6 h時進(jìn)行幼魚樣本取樣,每桶取3尾,脅迫期間水中的溶氧含量為(0.46±0.19)mg/L,水溫為(25.37±0.95)℃。待低氧脅迫試驗取樣結(jié)束后,停止氮?dú)庾⑷氩⒃龃罂諝庾⑷肓?,待水中溶氧含量升? mg/L時,調(diào)節(jié)空氣注入量維持水中的溶氧含量,分別在第2,4 和6 h時進(jìn)行幼魚復(fù)氧恢復(fù)試驗樣本取樣,每桶取3尾,恢復(fù)期間水中的溶氧含量為(7.75±0.17)mg/L,水溫為(25.21±0.87)℃。整個試驗期間,每10 min使用多功能溶氧儀(YSIPro20,USA)監(jiān)測一次水中的溶氧變化。

    1.3 樣品采集與制備

    將各時間點(diǎn)每個試驗組的9尾幼魚置于MS-222的水溶液(200 mg/L)中快速麻醉后,用濾紙擦凈幼魚體表水分后尾部靜脈取血1.5 mL。將抽取的血液保存在含有0.05mL肝素鈉溶液(濃度為1.5%)的2 mL離心管中,4 ℃靜置保存 6 h后離心(4 ℃,3 000 r/min,10 min)取血漿,收集的血漿保存于-20 ℃用于血液指標(biāo)的測定。

    取血后的幼魚置于冰板上進(jìn)行解剖,取下肝胰臟,用濾紙吸干表面血液后置于2 mL離心管中,經(jīng)過液氮預(yù)冷后放置在-80 ℃冰箱保存。后期肝胰臟組織在液氮條件下研磨成粉,置于離心管中進(jìn)行準(zhǔn)確稱重。根據(jù)指標(biāo)測定需要,往離心管中加入9倍(質(zhì)量體積比)的0.9%的預(yù)冷生理鹽水或5~9倍預(yù)冷提取液,渦旋振蕩后離心(4 ℃,3 000 r/min,15 min)取上清液,進(jìn)行相關(guān)生化指標(biāo)的測定。

    1.4 樣品測定

    肝胰臟和血液生化指標(biāo)均使用全波長酶標(biāo)儀(800TS,BIOTEK,美國)和分光光度計(TU-1900,PERSEE,北京)配合南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測定。肝胰臟的氧化應(yīng)激指標(biāo)包括過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)活力,丙二醛(MDA)、總谷胱甘肽(T-GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)和還原型谷胱甘肽(GSH)含量。呼吸代謝指標(biāo)包括己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)、檸檬酸合酶(CS)和乳酸脫氫酶(LDH)活力。能量代謝指標(biāo)包括肝胰臟中糖原(Gn)和乳酸(LD)含量,血糖(B-Glu)和血乳酸(B-LD)含量。具體檢測方法詳見試劑盒說明。

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    利用SPSS22.0統(tǒng)計分析軟件對試驗所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(One-way,ANOVA),運(yùn)用鄧肯(Duncan)多重比較對均值進(jìn)行差異顯著性檢驗,顯著水平設(shè)為P<0.05。試驗所得數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

    急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚肝胰臟中酶促型氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響見表1。在低氧脅迫階段,脅迫6 h后SOD活力顯著高于常氧組,脅迫2、4和6 h時GST活力均顯著高于常氧組。在復(fù)氧恢復(fù)過程中,CAT活力在恢復(fù)2 h到4 h顯著降低,但各恢復(fù)組與常氧組和脅迫6 h組相比無顯著差異;SOD活力在恢復(fù)到6 h顯著降低,恢復(fù)6 h時 SOD活力顯著低于脅迫6 h,但與常氧組無顯著差異;GST活力在恢復(fù)2 h顯著升高且在各處理組中最高,隨恢復(fù)時間的延長其活力顯著降低,其活力在恢復(fù)6 h和脅迫6 h時無顯著差異,但GST活力在恢復(fù)6 h顯著高于常氧組。

    急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚肝胰臟中非酶促型氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響見表2。MDA含量隨脅迫時間的延長逐步降低且在6 h時其含量顯著低于常氧組;T-GSH含量和GSH/GSSG比例隨脅迫時間的延長先升高后降低,T-GSH含量在脅迫2 h時顯著高于常氧組而脅迫4 h時顯著低于常氧組,GSH/GSSG比例在脅迫2 h和4 h時顯著高于常氧組而脅迫6 h時顯著低于常氧組。在復(fù)氧恢復(fù)過程中MDA含量先升后降且在4 h其含量為各處理組中最高,恢復(fù)6 h時其含量與脅迫6 h時相比無顯著差異;T-GSH含量隨著恢復(fù)時間的延長顯著升高,與脅迫6 h和常氧組相比,恢復(fù)6 h時其含量無顯著差異;GSH/GSSG比例隨恢復(fù)時間的延長升高,恢復(fù)6 h其比例顯著低于脅迫6 h和常氧組。

    表1 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚幼魚肝胰臟中酶促型氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響Tab.1 Effects of the oxidative index of enzymatic type in the hepatopancreas of juvenile C.carpio var qingtianensis during acute hypoxia and re-oxygenation U/mg prot

    表2 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚幼魚肝胰臟中非酶促型氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響Tab.2 Effects of oxidative index of nonenzymatic type in hepatopancreas of juvenile C.carpio var qingtianensis during acute hypoxia and re-oxygenation

    2.2 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚肝胰臟中呼吸代謝的影響

    由表3可見,脅迫2 h時CS活力顯著高于脅迫6 h;脅迫6 h時LDH活力顯著高于常氧組,其他各呼吸代謝指標(biāo)在各低氧脅迫處理時間點(diǎn)無顯著差異。經(jīng)過6 h的恢復(fù),各呼吸代謝指標(biāo)與脅迫6 h相比無顯著差異,但與常氧組相比,HK活力顯著升高,在恢復(fù)2 h時HK、PFK和PK活力為各實驗處理組中最低。

    2.3 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚的肝胰臟和血液中能量代謝的影響

    表3 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚肝胰臟中呼吸代謝的影響Tab.3 Effects of respiratory metabolism in hepatopancreas of juvenile C.carpio var qingtianensis during acute hypoxia and re-oxygenation

    根據(jù)表4可知,Gn含量在低氧脅迫過程中顯著降低且各脅迫組顯著低于常氧組;B-Glu含量先降低后升高且脅迫6 h時其含量與常氧組無顯著差異;LD和B-LD含量隨脅迫時間的延長逐步升高且脅迫6 h其含量顯著高于常氧組。

    在復(fù)氧恢復(fù)過程中,Gn、B-Glu、LD和B-LD含量無顯著變化,恢復(fù)6 h Gn和B-Glu含量與脅迫6 h時相比無顯著差異;而LD和B-LD含量在恢復(fù)6 h時顯著高于常氧組,但與脅迫6 h時無顯著變化。

    表4 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚的肝胰臟和血液中能量代謝的影響Tab.4 Effects of energy metabolism in hepatopancreas and blood of juvenile C.carpio var qingtianensis during acute hypoxia and reoxygenation

    3 討論

    3.1 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚氧化應(yīng)激指標(biāo)的影響

    青田田魚肝胰臟中MDA含量在低氧脅迫過程中持續(xù)減少,花鱸受到低氧脅迫時也有類似現(xiàn)象,有學(xué)者認(rèn)為ROS的主要來源之一為線粒體內(nèi)膜的呼吸鏈底物端,氧化應(yīng)激產(chǎn)生了過量的ROS抑制了脂質(zhì)氧化酶的活性,隨著低氧時間的延長造成組織功能性缺氧,限制了線粒體電子傳遞鏈給O2過程,減少了ROS的產(chǎn)生,脂質(zhì)氧化水平得到緩解[9,14,17]。肝胰臟中T-GSH含量和GSH/GSSG比例在這一過程都先升后降,不同的是在低氧脅迫2 h時T-GSH含量顯著高于其他各時間點(diǎn),但GSH/GSSG比例變化更加顯著,表明肝胰臟通過合成和轉(zhuǎn)化產(chǎn)生大量的GSH來清除ROS,后期GSH含量的減少也印證了ROS在低氧末期的產(chǎn)生受到抑制[18]。

    恢復(fù)初期,CAT、SOD和GST活力顯著升高,MDA含量也在此時顯著升高,而T-GSH含量和GSH/GSSG比例顯著降低,這是由于青田田魚再次增強(qiáng)抗氧化防御機(jī)制來應(yīng)對由復(fù)氧產(chǎn)生新一輪的氧化應(yīng)激,這與花鱸[14]和鯔(Mugilcephalus)[19]的結(jié)果十分相似,但是不同的是花鱸肝胰臟中SOD、CAT活力并未顯著變化,這可能是由于實驗設(shè)計中低氧濃度和復(fù)氧恢復(fù)時間有所差異?;謴?fù)6 h時,除GST顯著高于對照組外,其余氧化應(yīng)激指標(biāo)均恢復(fù)到常氧組水平,說明青田田魚肝胰臟組織中基本恢復(fù)了穩(wěn)態(tài)。

    3.2 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚呼吸代謝的影響

    魚類在低氧壓力下會更加依賴碳水化合物代謝供能,同時低氧使魚類無法通過呼吸獲得正常需氧量,造成局部組織的缺氧,進(jìn)而改變呼吸代謝方式[20]。糖原是魚體葡萄糖的主要存儲形式,相較于肌糖原,肝Gn的葡萄糖單位含量更高,有研究表明糖原與魚類的耐低氧能力有關(guān)[21]。LD既是無氧呼吸產(chǎn)物,也可作為供能代謝的底物[22,23]。HK、PFK、PK、CS和LDH是葡萄糖代謝過程中重要的調(diào)控酶,其活力的變化直觀反映組織細(xì)胞的呼吸代謝方式[24,25]。同時LD含量和LDH活力也常用來評估魚類的低氧耐受能力[26]。

    本試驗中低氧脅迫初期肝胰臟中Gn含量急劇下降,LD含量略微下降,表明Gn分解成葡萄糖,一部分進(jìn)行肝臟供能代謝,另一部分經(jīng)過葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白輸出補(bǔ)充血糖濃度,保障整個機(jī)體其他組織的供能代謝[14,27]。HK、PFK、PK、CS和LDH活力均升高,表明青田田魚在感受到外界溶氧變化后,增強(qiáng)能量代謝進(jìn)行適應(yīng)性調(diào)整,這與瓦氏黃顙魚(Pelteobagrusvachelli)[28]和雜交黃顙魚(P.vachelii♂×P.fulvidraco♀)[26]的研究結(jié)果相類似。LD含量無顯著變化,這是由于低氧脅迫初期青田田魚肝胰臟組織以高效的有氧呼吸供能為主。隨著脅迫時間的延長,LD含量和LDH活力顯著升高,HK、PFK、PK活力和Gn含量無顯著變化,而CS活力略微降低,這表明肝胰臟組織缺氧狀況加重,加強(qiáng)了無氧呼吸供能,削弱了有氧呼吸代謝[25,29]。

    復(fù)氧初期,LDH活力會略微降低而CS活力略微回升,同時PFK、HK、PK活力顯著降低,Gn含量無顯著變化,這是由于隨著溶氧的恢復(fù),組織缺氧狀況得到緩解,無氧呼吸開始削弱,有氧呼吸代謝方式加強(qiáng)。低氧脅迫階段肝胰臟中積累大量的LD,可以異生為葡萄糖進(jìn)行Gn回補(bǔ)和供能代謝,也可以轉(zhuǎn)化丙酮酸進(jìn)入TCA循環(huán)[23]。隨著恢復(fù)時間的延長,Gn含量和HK、CS活力略微升高,而LDH活力和LD含量降低,這是由于組織缺氧狀況得到進(jìn)一步的緩解,青田田魚機(jī)體有氧呼吸作用得到加強(qiáng),而無氧呼吸作用相對減弱。復(fù)氧末期,LDH、HK活力升高,CS活力略微升高,LD含量逐步降低,Gn含量逐步升高,表明肝胰臟仍然以LD為底物進(jìn)行糖異生和代謝供能為主,同時加強(qiáng)了糖酵解作用,有氧呼吸開始加強(qiáng)[30]。同時Gn含量恢復(fù)到正常水平也說明機(jī)體逐步趨于穩(wěn)態(tài)[31]。張國松[28]在瓦氏黃顙魚的研究中,復(fù)氧1.5 h其肝胰臟中的CS活力顯著升高而后降低,但在本研究中并未出現(xiàn)這一現(xiàn)象,這可能是青田田魚長期生活在稻田環(huán)境中,對急性溶氧變化產(chǎn)生了一定的適應(yīng)性。

    3.3 急性低氧脅迫和復(fù)氧恢復(fù)對青田田魚血糖和血乳酸的影響

    血糖是機(jī)體內(nèi)葡萄糖主要運(yùn)輸形式,乳酸為葡萄糖厭氧代謝產(chǎn)物,兩者通過血液循環(huán)完成組織間能量的再分配[32]。在本試驗中低氧脅迫初中期,血糖含量顯著降低,這是由于低氧帶來的氧化應(yīng)激壓力,各組織加強(qiáng)對葡萄糖的利用,這與低氧脅迫4 h團(tuán)頭魴(Megalobramaamblycephala)的實驗結(jié)果一致[33]。低氧脅迫后期血糖和乳酸含量顯著升高,這是由于高血糖可以有效地維持機(jī)體的能量供給,同時組織缺氧增強(qiáng)了厭氧代謝,造成血乳酸含量的升高,這與黃帶擬鲹(Pseudocaranxdentex)無氧運(yùn)動后出現(xiàn)高血糖反應(yīng)和血乳酸含量升高的結(jié)果相類似[34]。在復(fù)氧過程中,血液中血糖和乳酸含量逐步降低,這是由于在復(fù)氧過程中,組織缺氧狀況得到恢復(fù),乳酸異生為葡萄糖進(jìn)行能量代謝底物的補(bǔ)充,血糖回補(bǔ)臟器組織進(jìn)行糖原合成和供能代謝,促進(jìn)機(jī)體穩(wěn)態(tài)[23,35]。

    綜上所述急性低氧脅迫與復(fù)氧對青田田魚生理代謝產(chǎn)生了顯著的影響。在這一過程中青田田魚通過增強(qiáng)氧化應(yīng)激防御機(jī)制,調(diào)整有氧和無氧呼吸的供能方式,保障機(jī)體能量供給等手段來適應(yīng)急性溶氧變化。經(jīng)過6 h復(fù)氧恢復(fù)后,抗氧化酶活力和糖原基本恢復(fù)到常氧組水平,說明青田田魚生理代謝趨于穩(wěn)態(tài),同時對高含量乳酸的耐受,表明青田田魚有很強(qiáng)的低氧耐受能力和恢復(fù)能力。

    猜你喜歡
    氧化應(yīng)激
    熊果酸減輕Aβ25-35誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激和細(xì)胞凋亡
    中成藥(2021年5期)2021-07-21 08:39:04
    基于炎癥-氧化應(yīng)激角度探討中藥對新型冠狀病毒肺炎的干預(yù)作用
    戊己散對腹腔注射甲氨蝶呤大鼠氧化應(yīng)激及免疫狀態(tài)的影響
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:24
    基于氧化應(yīng)激探討參附注射液延緩ApoE-/-小鼠動脈粥樣硬化的作用及機(jī)制
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:43
    植物化學(xué)物質(zhì)通過Nrf2及其相關(guān)蛋白防護(hù)/修復(fù)氧化應(yīng)激損傷研究進(jìn)展
    氧化應(yīng)激與糖尿病視網(wǎng)膜病變
    尿酸對人肝細(xì)胞功能及氧化應(yīng)激的影響
    DNA雙加氧酶TET2在老年癡呆動物模型腦組織中的表達(dá)及其對氧化應(yīng)激中神經(jīng)元的保護(hù)作用
    從六經(jīng)辨證之三陰病干預(yù)糖調(diào)節(jié)受損大鼠氧化應(yīng)激的實驗研究
    乙肝病毒S蛋白對人精子氧化應(yīng)激的影響
    天堂网av新在线| 成人三级做爰电影| xxx96com| 国产精品99久久99久久久不卡| 成人国产一区最新在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一本一本综合久久| 最近最新中文字幕大全电影3| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 不卡一级毛片| 18禁国产床啪视频网站| 国产精品久久视频播放| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲真实伦在线观看| 美女黄网站色视频| 中亚洲国语对白在线视频| 91麻豆av在线| 国产精品国产高清国产av| 午夜影院日韩av| 90打野战视频偷拍视频| 桃色一区二区三区在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 怎么达到女性高潮| 国产精品99久久99久久久不卡| 人妻夜夜爽99麻豆av| 88av欧美| 成人性生交大片免费视频hd| 看免费av毛片| 此物有八面人人有两片| av在线天堂中文字幕| 美女 人体艺术 gogo| 久久热在线av| 欧美乱色亚洲激情| 久久九九热精品免费| 99国产综合亚洲精品| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲九九香蕉| 亚洲九九香蕉| 欧美在线一区亚洲| 最近在线观看免费完整版| 国产视频内射| 国产久久久一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 99国产精品99久久久久| 国产免费男女视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 人人妻人人澡欧美一区二区| 俄罗斯特黄特色一大片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲色图av天堂| 亚洲片人在线观看| 麻豆av在线久日| 日本在线视频免费播放| 国内精品美女久久久久久| 亚洲精品色激情综合| 禁无遮挡网站| 色综合婷婷激情| 国产三级中文精品| 国产黄色小视频在线观看| 女警被强在线播放| 午夜免费激情av| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 成人永久免费在线观看视频| 岛国在线观看网站| svipshipincom国产片| 特大巨黑吊av在线直播| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲人成伊人成综合网2020| 特大巨黑吊av在线直播| 99久久成人亚洲精品观看| 国产1区2区3区精品| 亚洲中文日韩欧美视频| 亚洲午夜理论影院| 欧美日韩精品网址| 少妇的逼水好多| 在线播放国产精品三级| 欧美精品啪啪一区二区三区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产精品久久久久久久电影 | 色综合婷婷激情| 我的老师免费观看完整版| 国产欧美日韩一区二区三| 午夜亚洲福利在线播放| 久久午夜亚洲精品久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美高清成人免费视频www| 全区人妻精品视频| 丁香欧美五月| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久久久国内视频| 99久久综合精品五月天人人| 国产av麻豆久久久久久久| 黄色日韩在线| 亚洲乱码一区二区免费版| 丰满人妻一区二区三区视频av | 宅男免费午夜| 日韩欧美免费精品| 亚洲人成电影免费在线| 伦理电影免费视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 免费在线观看影片大全网站| 草草在线视频免费看| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日韩高清综合在线| 国产成人欧美在线观看| 国产探花在线观看一区二区| h日本视频在线播放| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品,欧美在线| 18禁美女被吸乳视频| 国产淫片久久久久久久久 | 免费看a级黄色片| 国产av不卡久久| a级毛片在线看网站| 校园春色视频在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲成人久久性| 草草在线视频免费看| av在线天堂中文字幕| 青草久久国产| 国产久久久一区二区三区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲 国产 在线| avwww免费| 成在线人永久免费视频| 99在线视频只有这里精品首页| 伦理电影免费视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| ponron亚洲| 日韩欧美三级三区| 国产成人精品无人区| 国产日本99.免费观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲熟女毛片儿| 精品电影一区二区在线| 亚洲专区中文字幕在线| 波多野结衣高清无吗| 久久精品国产清高在天天线| 免费看美女性在线毛片视频| 男人的好看免费观看在线视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 97碰自拍视频| 国产主播在线观看一区二区| 久久久久久国产a免费观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 最新美女视频免费是黄的| 国产午夜精品论理片| 黄色 视频免费看| 一a级毛片在线观看| 叶爱在线成人免费视频播放| 成人av在线播放网站| 久久国产精品人妻蜜桃| 欧美不卡视频在线免费观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久天堂一区二区三区四区| 国产成人精品久久二区二区91| 热99re8久久精品国产| 国产综合懂色| 精品福利观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 97超视频在线观看视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产成人av教育| 国产 一区 欧美 日韩| 曰老女人黄片| 亚洲 国产 在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲欧美一区二区三区黑人| xxxwww97欧美| 99久久精品一区二区三区| 免费高清视频大片| 成在线人永久免费视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲国产精品久久男人天堂| 少妇的逼水好多| 国产极品精品免费视频能看的| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 后天国语完整版免费观看| 国产综合懂色| www日本在线高清视频| 日本与韩国留学比较| 色综合站精品国产| 毛片女人毛片| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产av在哪里看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产欧美日韩一区二区精品| 怎么达到女性高潮| 国产精品久久久久久久电影 | 免费av毛片视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 成年女人毛片免费观看观看9| 99久久99久久久精品蜜桃| ponron亚洲| 亚洲国产欧美人成| 男人和女人高潮做爰伦理| www.熟女人妻精品国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久精品欧美日韩精品| 精品熟女少妇八av免费久了| 久久午夜综合久久蜜桃| av天堂中文字幕网| 国产高清激情床上av| 成人午夜高清在线视频| 欧美一级毛片孕妇| 欧美日韩国产亚洲二区| 日本与韩国留学比较| av在线天堂中文字幕| 首页视频小说图片口味搜索| 在线观看舔阴道视频| 日韩精品青青久久久久久| 久久久国产精品麻豆| 在线观看日韩欧美| 在线国产一区二区在线| 国产三级中文精品| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久精品91蜜桃| 国产主播在线观看一区二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 香蕉久久夜色| 国产三级在线视频| 久久中文字幕人妻熟女| 首页视频小说图片口味搜索| 国产成+人综合+亚洲专区| 少妇人妻一区二区三区视频| 听说在线观看完整版免费高清| 99久久精品国产亚洲精品| 韩国av一区二区三区四区| 精品久久久久久,| 最近最新中文字幕大全免费视频| 精品日产1卡2卡| 免费av不卡在线播放| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 色视频www国产| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产成人系列免费观看| 91在线精品国自产拍蜜月 | www.熟女人妻精品国产| 动漫黄色视频在线观看| 天堂动漫精品| 热99re8久久精品国产| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 久久国产乱子伦精品免费另类| 男女之事视频高清在线观看| 老司机福利观看| 曰老女人黄片| 亚洲激情在线av| 成年人黄色毛片网站| 免费观看精品视频网站| 午夜福利高清视频| 亚洲精品美女久久av网站| 热99re8久久精品国产| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 国产三级在线视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 日本三级黄在线观看| 午夜两性在线视频| 国产午夜精品久久久久久| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| www日本黄色视频网| 在线观看午夜福利视频| xxx96com| 久久精品人妻少妇| 叶爱在线成人免费视频播放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 白带黄色成豆腐渣| 国产私拍福利视频在线观看| 最近在线观看免费完整版| 黑人操中国人逼视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 视频区欧美日本亚洲| 少妇的丰满在线观看| 手机成人av网站| 久久99热这里只有精品18| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| av欧美777| 免费观看的影片在线观看| 精品日产1卡2卡| 日韩欧美在线乱码| 国产一区在线观看成人免费| 在线观看午夜福利视频| 真人做人爱边吃奶动态| 国产av麻豆久久久久久久| 国产午夜福利久久久久久| 天天添夜夜摸| 老司机福利观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美性猛交黑人性爽| 成人亚洲精品av一区二区| av福利片在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲成a人片在线一区二区| 成人国产综合亚洲| 日本精品一区二区三区蜜桃| 三级毛片av免费| 曰老女人黄片| 国产成年人精品一区二区| 久久这里只有精品19| 黄色成人免费大全| 国产午夜精品久久久久久| 91麻豆av在线| 国产精品久久久久久久电影 | 偷拍熟女少妇极品色| 日本三级黄在线观看| 久久久久久人人人人人| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产av一区在线观看免费| 国产高清视频在线播放一区| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久精品国产欧美久久久| 不卡一级毛片| 99国产综合亚洲精品| av黄色大香蕉| 日本免费一区二区三区高清不卡| 精品免费久久久久久久清纯| 日韩欧美国产在线观看| www.自偷自拍.com| 母亲3免费完整高清在线观看| 看免费av毛片| 五月伊人婷婷丁香| 国模一区二区三区四区视频 | 国产精品九九99| 少妇的丰满在线观看| 小说图片视频综合网站| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久久国产成人精品二区| 黄色成人免费大全| 亚洲无线在线观看| 日本三级黄在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 国产成人精品久久二区二区91| 精品国内亚洲2022精品成人| 精华霜和精华液先用哪个| 国产真实乱freesex| www日本在线高清视频| 一二三四社区在线视频社区8| 中出人妻视频一区二区| 1000部很黄的大片| cao死你这个sao货| 国产伦精品一区二区三区四那| 少妇丰满av| 国产麻豆成人av免费视频| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久久大精品| av黄色大香蕉| 午夜免费成人在线视频| 成人无遮挡网站| 国产熟女xx| АⅤ资源中文在线天堂| 免费看日本二区| 午夜福利高清视频| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 男女视频在线观看网站免费| 国产精品野战在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 在线看三级毛片| 亚洲熟女毛片儿| 免费大片18禁| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲美女黄片视频| 欧美成人性av电影在线观看| 国产激情欧美一区二区| 在线永久观看黄色视频| 日本黄色片子视频| 亚洲成人久久性| a级毛片在线看网站| 欧美高清成人免费视频www| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产亚洲欧美98| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品 国内视频| 国产成人精品久久二区二区免费| 国产欧美日韩一区二区三| 欧美丝袜亚洲另类 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 欧美日韩综合久久久久久 | 日本免费a在线| 99热精品在线国产| 国产精品久久久人人做人人爽| x7x7x7水蜜桃| 亚洲熟女毛片儿| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 88av欧美| 99久国产av精品| 成人国产一区最新在线观看| www.www免费av| 国产亚洲精品一区二区www| 五月玫瑰六月丁香| 色av中文字幕| 男人舔奶头视频| 后天国语完整版免费观看| 白带黄色成豆腐渣| 天天添夜夜摸| 国内精品久久久久精免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产乱人视频| 禁无遮挡网站| 亚洲色图av天堂| 99国产综合亚洲精品| 啦啦啦韩国在线观看视频| 最新中文字幕久久久久 | 在线观看舔阴道视频| 99在线人妻在线中文字幕| 级片在线观看| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 精品欧美国产一区二区三| 在线a可以看的网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲av成人一区二区三| 深夜精品福利| www.精华液| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲欧美激情综合另类| 国产高潮美女av| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 中文字幕熟女人妻在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产免费av片在线观看野外av| 人妻久久中文字幕网| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产真实乱freesex| 久久精品91蜜桃| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美不卡视频在线免费观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产成人欧美在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲av熟女| 搡老熟女国产l中国老女人| 视频区欧美日本亚洲| 中文字幕久久专区| 久久中文看片网| 成人18禁在线播放| 国产三级在线视频| 国产美女午夜福利| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 露出奶头的视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产精品九九99| 久久久久久久久免费视频了| av欧美777| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产激情偷乱视频一区二区| avwww免费| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日韩欧美国产一区二区入口| 男人的好看免费观看在线视频| 精品不卡国产一区二区三区| 日本 欧美在线| 成年版毛片免费区| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲无线观看免费| 精品久久久久久久毛片微露脸| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲熟妇熟女久久| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲,欧美精品.| 亚洲第一电影网av| 在线永久观看黄色视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲精品在线观看二区| 在线免费观看不下载黄p国产 | 精品乱码久久久久久99久播| 天堂影院成人在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 白带黄色成豆腐渣| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲专区字幕在线| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产亚洲欧美在线一区二区| 中文字幕久久专区| 亚洲熟妇熟女久久| 成人欧美大片| 99在线人妻在线中文字幕| 国产欧美日韩精品一区二区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲,欧美精品.| 国内精品久久久久精免费| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 深夜精品福利| 怎么达到女性高潮| 天堂动漫精品| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 在线播放国产精品三级| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产成人av教育| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 99久久精品国产亚洲精品| 男女午夜视频在线观看| 国产97色在线日韩免费| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩免费av在线播放| 国产成人aa在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| e午夜精品久久久久久久| 国产三级在线视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 色在线成人网| 人妻久久中文字幕网| 婷婷六月久久综合丁香| 久久久久精品国产欧美久久久| 一进一出好大好爽视频| 日韩欧美国产在线观看| 88av欧美| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产成人福利小说| 麻豆一二三区av精品| 舔av片在线| 国产精品亚洲美女久久久| 国产高清有码在线观看视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 欧美激情在线99| 亚洲专区国产一区二区| 久久久久九九精品影院| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲国产色片| 日韩人妻高清精品专区| 在线看三级毛片| av国产免费在线观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久热在线av| 久久久水蜜桃国产精品网| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲国产欧美人成| 91在线观看av| 日本免费a在线| 欧美不卡视频在线免费观看| 嫩草影院入口| 亚洲中文字幕日韩| 久久久国产成人免费| 神马国产精品三级电影在线观看| 两人在一起打扑克的视频| 搡老岳熟女国产| 国产精品永久免费网站| 在线免费观看的www视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产成人精品久久二区二区免费| 舔av片在线| 国产免费男女视频| 免费人成视频x8x8入口观看| 在线a可以看的网站| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲中文av在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| av在线天堂中文字幕| 一个人看视频在线观看www免费 | 日韩三级视频一区二区三区| 日本一本二区三区精品| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 精品国产三级普通话版| 国产高清videossex| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产探花在线观看一区二区| 嫩草影院精品99| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产成人影院久久av| 老熟妇仑乱视频hdxx| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 一a级毛片在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 香蕉久久夜色| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 我的老师免费观看完整版| 成年免费大片在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 男女那种视频在线观看| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一本综合久久免费| 免费搜索国产男女视频|