桶裝水中銅綠假單胞菌污染原因及檢測方法

楊豐旭

朝陽市檢驗檢測認(rèn)證中心 遼寧朝陽 122000

近年來，人們對桶裝飲用水的需求不斷增加，飲用水的安全問題引起了人們的廣泛關(guān)注。國標(biāo)限量值要求桶裝水中銅綠假單胞菌不得檢出，但近期隨著多地發(fā)生了桶裝水中銅綠假單胞菌超標(biāo)的問題，讓消費者不得不重新審視桶裝水的質(zhì)量問題。銅綠假單胞菌作為水源性致病菌的主要來源之一，是一種條件致病菌，它在各種水、空氣、人的皮膚、呼吸道和腸道等都能存活，一些免疫力低的人群喝了受其污染的水后可能會導(dǎo)致疾病的發(fā)生。

1 桶裝水銅綠假單胞菌產(chǎn)生的主要原因

1.1 水源水污染因素

水源水污染是桶裝水被污染的根本原因。桶裝水的主要原料是自來水、井水或來自河流和湖泊的泉水，這些年隨著經(jīng)濟的快速發(fā)展，大量沒有處理達標(biāo)的工業(yè)廢水和生活污水經(jīng)常污染水源水，若水源水受到污染且無法通過后續(xù)過程清除，則很可能會發(fā)生連續(xù)污染。例如一些桶裝礦泉水生產(chǎn)時為了保證礦物質(zhì)含量，沒有使用精濾裝置，就使得銅綠假單胞菌有機會透過。

1.2 企業(yè)衛(wèi)生意識不強，設(shè)備消毒不徹底

一些企業(yè)設(shè)備和生產(chǎn)工藝簡陋，控制銅綠假單胞菌污染的發(fā)生有一定難度。由于用于生產(chǎn)的儀器設(shè)備接口很多，在生產(chǎn)過程中容易發(fā)生交叉污染，使病菌進入最終產(chǎn)品。銅綠假單胞菌可粘附于管道、濾膜、貯水池及增壓泵中繁殖，簡單的沖洗無法徹底清除。同時，如果生產(chǎn)設(shè)備沒有定期消毒、消毒不徹底或消毒劑不合格，也容易引起銅綠假單胞菌污染。此外，傳統(tǒng)的消毒方式，如臭氧濃度低及短時間接觸沖洗無法完全殺滅，周而復(fù)始，污染不斷加劇[1]。

1.3 包裝材料清洗消毒不到位

通過對水源、生產(chǎn)過程、存儲容器和生產(chǎn)環(huán)境的分析，對桶的清潔和消毒被認(rèn)為是成品水污染的主要原因。目前多數(shù)桶裝水制造商普遍回收水桶，而水桶的特殊結(jié)構(gòu)不利于清潔消毒。銅綠假單胞菌屬于人類皮膚污染指示菌，一些小型企業(yè)生產(chǎn)技術(shù)相對落后，仍采用人工手動灌裝密封及清潔工作，導(dǎo)致了污染的發(fā)生。在灌裝前，如果消毒劑的濃度過低、消毒時間不足或消毒方法不當(dāng)，則無法有效殺死微生物，桶中的殘留物可能引起交叉污染。

1.4 缺乏自檢及運輸過程監(jiān)控

目前，大多生產(chǎn)企業(yè)缺少專業(yè)的檢測人員和設(shè)備，不能對產(chǎn)品進行有效的測試。在生產(chǎn)、儲存和運輸過程中，水蓋的質(zhì)量不達標(biāo)也會導(dǎo)致污染。例如桶的頂蓋被多次拉動，容易使頂蓋松動和泄漏而引起污染。如果對后期的運輸和銷售缺乏監(jiān)控，就會導(dǎo)致被污染的桶裝水進入市場[2]。

2 桶裝水銅綠假單胞菌檢測方法

2.1 國標(biāo)法

國標(biāo)規(guī)定用GB 8538-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 飲用天然礦泉水檢驗方法》來檢測桶裝水中銅綠假單胞菌。該方法是將250mL水樣用0.45μm濾膜過濾后移至CN瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)一定條件培養(yǎng)后能在CN上生長并產(chǎn)生綠膿菌素或氧化酶陽性、紫外光（360±20nm）照射下能發(fā)熒光、能夠利用乙酰胺產(chǎn)氨的革蘭氏陰性無芽孢桿菌則可判定為銅綠假單胞菌陽性。

2.2 實時熒光定量PCR法

實時熒光定量PCR法是根據(jù)銅綠假單胞菌外毒素 A 基因片段序列，設(shè)計特異性引物及TaqMan探針，對目標(biāo)靶序列進行特異性擴增來檢測銅綠假單胞菌的。該方法檢測快速、特異性和靈敏性良好，為銅綠假單胞菌的快速檢測奠定了基礎(chǔ)。

2.3 LAMP法

環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（LAMP）利用鏈置換DNA聚合酶在等溫條件下進行反應(yīng)，短時間內(nèi)可完成核酸擴增。該法與國標(biāo)法檢驗結(jié)果一致，但檢驗時間只需 2 h，并且可通過目測反應(yīng)體系濁度變化或顯色反應(yīng)對結(jié)果進行判斷。LAMP法成本低，省時且無需大型專業(yè)設(shè)備，擴增產(chǎn)物不需要繁瑣的電泳過程，快速靈敏、特異性強，尤其適合即時、現(xiàn)場、大量的初篩工作，易于應(yīng)用推廣[3]。

2.4 酶底物法

酶底物法（Pseudalert）是采用特異性固定底物技術(shù)，目標(biāo)細(xì)菌產(chǎn)生能夠分解 Pseudalert 底物特定的酶，產(chǎn)生熒光，在24 h內(nèi)即可得到結(jié)果，無需進行驗證試驗。該方法能夠較好地彌補傳統(tǒng)濾膜法在檢測工作中的不足，在美國和歐洲部分地區(qū)已經(jīng)被批準(zhǔn)為檢驗銅綠假單胞菌的標(biāo)準(zhǔn)方法。

2.5 其他儀器檢測方法

VITEK 2 Compact 全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)準(zhǔn)確率高，可以用于檢測銅綠假單胞菌。近年來，還發(fā)展出使用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜儀（MALDI-TOF-MS）來檢測銅綠假單胞菌的研究報道，可以為該菌的檢測工作提供有效的借鑒及輔助。

3 結(jié)語

銅綠假單胞菌存在范圍廣、適應(yīng)環(huán)境能力強、生長營養(yǎng)需求不高，能在許多污染物質(zhì)中存活并繁殖，對人們的身體健康存在一定的危害。近年來桶裝水中銅綠假單胞菌的污染問題逐漸增多，由此引發(fā)的食物中毒也時有發(fā)生，已成為公共衛(wèi)生的重大隱患。相關(guān)企業(yè)在日常生產(chǎn)過程中應(yīng)做好嚴(yán)格的消毒工作，必須采取果斷而有效的方法來確保水質(zhì)合格。另外，銅綠假單胞菌在利用水流甚至氣溶膠傳播時，比其他微生物種類有優(yōu)勢，故控制工藝中的污染時，空氣凈化也是重要環(huán)節(jié)。相信隨著生產(chǎn)企業(yè)檢測水平的不斷提升和安全意識的不斷增強以及檢測方法的快速發(fā)展，桶裝水中銅綠假單胞菌污染問題定能得到更加有效的解決，更好的保障人民群眾飲水安全。