HBV酶免陰性核酸陽性無償獻(xiàn)血者結(jié)果分析及檢測(cè)模式研究

李燕，何燕琴，劉福發(fā)，周練，黃旭燕，何麗娜

（江西省贛州市中心血站，贛州 341000）

HBV通過輸血傳播，是威脅我國輸血安全的重要因素之一[1]。為保障血液檢測(cè)質(zhì)量，我國大都采用血清學(xué)酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)和實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行 HBV檢測(cè)，使輸血后感染HBV的風(fēng)險(xiǎn)大大降低。然而HBV在我國流行率較高，HBV感染窗口期及隱匿性HBV感染(OBI)的存在，輸血傳播 HBV的殘余風(fēng)險(xiǎn)仍然較高，因此對(duì)HBV的酶免檢測(cè)結(jié)果及核酸檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析，對(duì)評(píng)估核酸檢測(cè)的效果及優(yōu)化核酸檢測(cè)模式具有重要意義，此次分析報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源與處理 選取2017年1月至2019年12月贛州市中心血站采集的無償獻(xiàn)血者血液樣本186767例，酶免檢測(cè)采用含分離膠的促凝真空采血管，核酸檢測(cè)采用含惰性分離膠的EDTAK2抗凝真空采血管，并于采集4h內(nèi)在1800g條件下離心20min，2℃-8℃保存，72h內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑酶免檢測(cè)儀器 EVO150全自動(dòng)加樣儀、HamiltonSTAR全自動(dòng)加樣儀、FAME24/30全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀；核酸檢測(cè)儀器：Roche cobass 201核酸檢測(cè)系統(tǒng)包括Hamilton STAR全自動(dòng)混樣儀、COBASAmpilprep核酸提取儀及COBASTaqmen Analyzer核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀。上海浩源ChiTas BSS 1200自動(dòng)化核酸純化儀、ABI7500熒光PCR擴(kuò)增儀。酶免試劑由廈門新創(chuàng)和北京萬泰提供的HBsAg試劑盒。核酸試劑分別由瑞士羅氏和上海浩源提供的配套核酸檢測(cè)試劑盒。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 酶免檢測(cè)同時(shí)使用兩種不同廠家的試劑，按照試劑說明書要求進(jìn)行檢測(cè)。雙廠家反應(yīng)性判為陽性，單廠家反應(yīng)性以同一試驗(yàn)對(duì)原血樣做雙孔復(fù)試，如果雙孔復(fù)試結(jié)果均為無反應(yīng)性判為陰性，如果雙孔復(fù)試結(jié)果中任何1孔為反應(yīng)性，則判為陽性。

1.3.2 核酸檢測(cè)酶免HBV檢測(cè)陰性樣本進(jìn)行核酸檢測(cè)。羅氏核酸檢測(cè)系統(tǒng)采用6混樣，浩源核酸檢測(cè)系統(tǒng)采用8混樣進(jìn)行核酸檢測(cè)，結(jié)果為無反應(yīng)性的pool判定為核酸檢測(cè)陰性；檢測(cè)結(jié)果為反應(yīng)性的pool，對(duì)其進(jìn)行拆分檢測(cè)。拆分檢測(cè)結(jié)果為無反應(yīng)性的，判定為核酸檢測(cè)陰性；拆分檢測(cè)結(jié)果為反應(yīng)性的，判定為核酸檢測(cè)陽性。

1.3.3 選取酶免Cot off值在0.5≤S/CO＜1的樣本采用核酸單人份檢測(cè)模式，隨機(jī)在羅氏、浩源核酸檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)，反應(yīng)性判為陽性，非反應(yīng)性判為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 24.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以n（%）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2017-2019年酶免與核酸HBV檢測(cè)結(jié)果2017年-2019年HBV酶免共檢測(cè)186767例樣本，陽性1388例，陽性率0.74%，核酸檢測(cè)183409例，陽性507例，陽性率0.28%。見表1。

2.2 2017-2019年507例核酸檢測(cè)陽性樣本在酶免不同S/CO值組HBV核酸陽性檢出率比較 酶免檢測(cè)S/CO＜0.5組樣本182916例，檢測(cè)出核酸陽性362例，陽性率0.20%，0.5≤S/CO＜1組樣本493例檢測(cè)出核酸陽性145例，陽性率29.41%，顯著高于S/CO＜0.5組的陽性率，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＜0.05）。 見表 2。

表1 2017-2019年酶免與核酸HBV檢測(cè)結(jié)果[n（%）]

2.3 酶免檢測(cè)0.5≤S/CO＜1單試劑組與雙試劑組HBV核酸陽性檢出率比較 酶免檢測(cè)單試劑結(jié)果在0.5≤S/CO＜1區(qū)間的核酸檢測(cè)395例，陽性79例，陽性率20%，雙試劑結(jié)果都在0.5≤S/CO＜1區(qū)間核酸檢測(cè)98例，陽性66例，陽性率66.35%，雙試劑組核酸陽性檢出率顯著高于單試劑組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。 見表 3。

表2 核酸檢測(cè)陽性樣本酶免不同S/CO組HBV核酸陽性檢出率比較[n（%）]

2.4 酶免雙試劑0.5≤S/CO＜1樣本在兩種不同核酸檢測(cè)系統(tǒng)單人份檢測(cè)中核酸陽性檢出率的比較羅氏系統(tǒng)檢測(cè)21例，陽性15例，陽性率71.43%，浩源系統(tǒng)檢測(cè)15例，陽性10例，陽性率66.66%，χ2＝0.108，兩種檢測(cè)系統(tǒng)核酸單人份檢測(cè)核酸陽性檢出率無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

表3 酶免0.5≤S/CO＜1中單試劑組與雙試劑組HBV核酸陽性檢出率比較[n（%）]

3 討論

表4 酶免雙試劑0.5≤S/CO＜1樣本在兩種核酸檢測(cè)系統(tǒng)單人份檢測(cè)核酸陽性檢出率比較[n（%）]

眾所周知，HBV感染會(huì)導(dǎo)致肝功能衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌。HBV感染呈全球性流行，我國一般人群HBsAg攜帶率為5%-6%[2]，經(jīng)輸血傳播是主要傳播途徑之一。目前酶免檢測(cè)陰性的獻(xiàn)血者經(jīng)輸血傳播HBV的殘余風(fēng)險(xiǎn)依然存在，主要是隱匿性感染[3-5]，對(duì)輸血安全造成了較大威脅，因此加強(qiáng)HBV病毒篩查是當(dāng)前阻斷其經(jīng)輸血傳播的重點(diǎn)工作。

表1數(shù)據(jù)中顯示2017-2019年檢測(cè)贛南無償獻(xiàn)血者的186767例樣本中HBV酶免陽性1388例，陽性檢出率0.74%，明顯高于青島地區(qū)0.23%[6]北京地區(qū)0.28%[7]江蘇地區(qū)0.46%[8]，略低于廣州地區(qū)0.91%[9]。酶免陰性而核酸陽性507例，陽性檢出率0.28%，國內(nèi)高于貴州地區(qū)0.16%[10]、廣東惠州地區(qū)0.186%[11]，省內(nèi)也高于南昌地區(qū)0.121%[12]、新余地區(qū)0.15%[13]和撫州地區(qū)0.22%[14]，提示贛南地區(qū)處于HBV的高流行區(qū)，輸血傳播HBV的殘余風(fēng)險(xiǎn)較大，需引起警惕。從樣本數(shù)量、試劑成本考慮，目前血站對(duì)于酶免檢測(cè)陰性的樣本大都采取混樣分項(xiàng)目模式檢測(cè)，但對(duì)于有些窗口期或隱匿性感染等部病毒含量較低的樣本，混樣模式中的樣本被稀釋，其檢出率遠(yuǎn)低于單人份檢測(cè)模式檢出率[15]。為此，既要避免低含量病毒漏檢又要權(quán)衡成本效益的情況下，有必要將酶免檢測(cè)與核酸檢測(cè)進(jìn)行比較分析，探索更好的檢測(cè)模式，有效的使之互為補(bǔ)充。從表2表3數(shù)據(jù)看出，酶免0.5≤S/CO＜1樣本核酸陽性檢出率明顯高于S/CO＜0.5樣本，且其范圍內(nèi)雙試劑核酸陽性檢出率明顯高于單試劑。表4選取的36例酶免雙試劑0.5≤S/CO＜1樣本，在羅氏、浩源兩種不同的核酸檢測(cè)系統(tǒng)檢出率分別71.43%和66.66%，檢出率均較高且無明顯差異，表明此檢測(cè)模式在不同的核酸檢測(cè)系統(tǒng)均可使用。

綜上所述，筆者建議酶免雙試劑0.5≤S/CO＜1樣本核酸檢測(cè)可以直接進(jìn)入單人份檢測(cè)模式，此優(yōu)于先混樣后拆分的檢測(cè)模式，既可以縮短檢測(cè)時(shí)間，又節(jié)約試劑減少成本浪費(fèi)，更重要的是降低了低病毒含量的HBV漏檢，有效的降低經(jīng)輸血傳播疾病的殘余風(fēng)險(xiǎn)，保障血液安全。