以羥丙基-β-環(huán)糊精作為手性流動(dòng)相添加劑拆分鹽酸依替福林對(duì)映體

翟明翚，許 芮，郝東宇，王 穎，蘇立強(qiáng)

(齊齊哈爾大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

手性藥物對(duì)映體因其藥理作用的差異，可能會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生毒副作用或代謝負(fù)擔(dān)[1]。對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分研究，是藥學(xué)領(lǐng)域最熱門的課題之一。鹽酸依替福林(Etilefrine hydrochloride)能升高血壓[2]，升壓作用維持時(shí)間較長(zhǎng)，是治療低血壓的常用藥。鹽酸依替福林有一個(gè)手性中心，結(jié)構(gòu)式見圖1。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，其R 對(duì)映體具有較強(qiáng)的藥理活性，而S 對(duì)映體的活性較弱[3]，如果消旋體給藥，會(huì)增大藥劑量，給人體帶來代謝負(fù)擔(dān)。為了確保用藥更有效、更安全，有必要對(duì)鹽酸依替福林對(duì)映體進(jìn)行拆分研究。

圖1 鹽酸依替福林分子結(jié)構(gòu)式Fig.1 Chemical structure of Etilefrine hydrochloride

HP-β-CD 沒有毒性，水溶性好，具有較好的立體選擇性和較強(qiáng)的手性識(shí)別能力。藥物對(duì)映體進(jìn)入其空腔與之作用，可以形成色譜行為差異較大的非對(duì)映體包合物[4]，實(shí)現(xiàn)藥物對(duì)映體的分離。本文以HP-β-CD 作為手性流動(dòng)相添加劑，采用高效液相色譜手性流動(dòng)相添加劑法，對(duì)鹽酸依替福林進(jìn)行了拆分，在最佳色譜條件下，鹽酸依替福林對(duì)映體能夠良好分離。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

P200 Ⅱ高效液相色譜系統(tǒng)，TM-1901 紫外可見分光光度計(jì)，AS3120 超聲波清洗器，GM 隔膜真空泵。

乙腈（色譜純）、超純水（實(shí)驗(yàn)室制備）、羥丙基-β-環(huán)糊精、鹽酸依替福林。

1.2 樣品溶液的配制

稱取0.0250g 的鹽酸依替福林藥品溶解于水中，定容至50mL 容量瓶中，備用。使用前經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，超聲脫氣。

1.3 紫外檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

準(zhǔn)確稱取一定量的鹽酸依替福林，將其溶于50mL 超純水中，用超純水作為參比溶液，使用紫外可見分光光度計(jì)對(duì)樣品進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)試，確定最佳紫外檢測(cè)波長(zhǎng)。

1.4 流動(dòng)相的配制

準(zhǔn)確稱取一定量的HP-β-CD，將其溶解在100mL 一定配比的乙腈-水中，經(jīng)0.45μm 微孔濾膜進(jìn)行過濾，并超聲脫氣。

2 結(jié)果與討論

2.1 手性添加劑濃度對(duì)分離度的影響

手性流動(dòng)相添加劑法拆分藥物對(duì)映體，主要依賴于流動(dòng)相中手性添加劑與對(duì)映體之間作用力的強(qiáng)弱，因此，手性添加劑的濃度是一個(gè)很重要的參數(shù)。

本文對(duì)HP-β-CD 的濃度進(jìn)行了優(yōu)化選擇，考察范圍為9～35mmol·L-1。隨著HP-β-CD 濃度增加，其與對(duì)映體相互作用的機(jī)會(huì)增多，手性識(shí)別能力增強(qiáng)，形成對(duì)映體的色譜行為差異大，分離度增大。由圖2 可知，HP-β-CD 濃度由9mmol·L-1逐漸增加到26mmol·L-1，分離度逐漸增大；濃度增加到35mmol·L-1時(shí)，分離度又略有下降。這是因?yàn)镠P-β-CD 濃度過高時(shí)，沒有形成包合物的HP-β-CD，會(huì)與包合物競(jìng)爭(zhēng)硅膠上的作用點(diǎn)，使得對(duì)映體的分離度降低。結(jié)果表明，HP-β-CD 的最佳濃度為26mmol·L-1。

圖2 HP-β-CD 濃度對(duì)分離度的影響Fig.2 Effect of different concentrations of HP-β-CD

2.2 有機(jī)修飾劑含量對(duì)分離度的影響

如表1 所示，當(dāng)乙腈比例在10%～25%之間時(shí)，隨著乙腈比例增加，流動(dòng)相的極性由強(qiáng)變?nèi)?，保留時(shí)間縮短，選擇性系數(shù)和分離度逐漸增大。繼續(xù)增加乙腈比例到30%，選擇性系數(shù)和分離度逐漸下降，這可能是因?yàn)橐译媾c對(duì)映體分子競(jìng)爭(zhēng)HP-β-CD 的空腔，降低了鹽酸依替福林與HP-β-CD 的疏水作用[5]，使得HP-β-CD 對(duì)鹽酸依替福林的立體選擇性降低。結(jié)果表明，當(dāng)流動(dòng)相為乙腈∶水=25∶75（V/V）時(shí)，分離效果最佳。

表1 流動(dòng)相配比對(duì)分離度的影響Table 1 Effect of organic modifier on the resolution

2.3 流速對(duì)分離度的影響

本文考察了流速對(duì)拆分效果的影響。如圖3 所示，流速在0.10～1.00mL·min-1范圍內(nèi)，分離度呈先上升后下降的趨勢(shì)。這是由于低流速主要影響的是柱內(nèi)動(dòng)力學(xué)中的分子擴(kuò)散項(xiàng)，當(dāng)流速增加時(shí)，分子擴(kuò)散現(xiàn)象減弱，柱效增加，分離度增大；高流速時(shí)，影響柱內(nèi)動(dòng)力學(xué)的主要因素為傳質(zhì)阻力項(xiàng)，流速增加，傳質(zhì)阻力項(xiàng)增加，柱效下降，分離度變小。當(dāng)流速為0.3mL·min-1時(shí)，分子擴(kuò)散項(xiàng)和傳質(zhì)阻力項(xiàng)的影響最小，柱效最高，分離度最大。

圖3 流速對(duì)分離度的影響Fig. 3 Effect of the flow rate on the resolution

圖4 pH 值對(duì)分離度的影響Fig .4 Effect of mobile phase pH on the resolution

2.4 pH 值對(duì)分離度的影響

本文考察了流動(dòng)相pH 值在3.0～6.0 范圍內(nèi)對(duì)鹽酸依替福林拆分的影響。如圖4 所示，分離度隨pH 值的增加呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢(shì)。pH 值較低時(shí)，羥丙基-環(huán)糊精的質(zhì)子化作用減小，它所帶的負(fù)電荷會(huì)大大減少，與鹽酸依替福林對(duì)映體之間的靜電作用下降，分離度也隨之變小。pH 值較高時(shí)，樣品分子解離的數(shù)量會(huì)變少，使得主客體之間的靜電作用減弱，分離度變小。pH 值為4.08 時(shí)，靜電作用最強(qiáng)，能形成較穩(wěn)定的包合物，分離效果最好。

3 結(jié)論

本文以羥丙基-β-環(huán)糊精作為手性添加劑，對(duì)鹽酸依替福林進(jìn)行了拆分，并優(yōu)化了色譜分離條件。當(dāng)流動(dòng)相為乙腈∶水=25∶75（V/V）、HP-β-CD 濃度為26mmol·L-1、流速為0.30 mL·min-1時(shí)，鹽酸依替福林對(duì)映體能良好分離，分離度為1.46。該方法操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，易于普及。