miRNA-124在自發(fā)性腦出血患者血清中表達及其臨床意義

王賀 趙長福

(北華大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 吉林 132001)

據(jù)推測，2030 年我國腦血管病事件發(fā)生率將比2010年升高約50%〔1〕。自發(fā)性腦出血(ICH)指非創(chuàng)傷性腦內(nèi)血管破裂，導(dǎo)致血液在腦實質(zhì)內(nèi)聚集，其在腦卒中各亞型中的發(fā)病率僅次于缺血性腦卒中位居第二。腦出血的發(fā)病率為(12～15)/10萬人年，在西方國家中，腦出血約占所有腦卒中的15%，占所有住院腦卒中患者的10%～30%，我國腦出血的比例更高，占腦卒中的18.8%～47.6%〔2〕。同時國內(nèi)ICH發(fā)病以老年人群相對較多，中青年發(fā)病率呈升高趨勢，且疾病致死率高，僅次于心血管疾病〔3〕。若在ICH發(fā)病后，得不到有效快速診療，往往預(yù)后較差。miRNA通過與靶基因的3′UTR結(jié)合來調(diào)節(jié)基因表達。miRNAs不僅參與宿主正常的生物學(xué)過程，包括細胞周期的調(diào)控、細胞分化、細胞凋亡、血管生成和代謝，還參與了氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、細胞增殖、遷移及表型轉(zhuǎn)換和基因表達的調(diào)控〔4〕。miRNA-124在腦組織中特異性高表達，是大腦中最豐富的miRNA〔5〕。miRNA-124在缺血性腦卒中診療上存在特異性表達〔6〕。目前有關(guān)ICH患者血漿miRNA-124的表達水平鮮有報道。本研究分析ICH患者血漿miRNA-124的表達水平。

1 資料與方法

1.1研究對象 選取2017年10月至2019年10月北華大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科收治的60例ICH患者為研究組。其中男35例，女25例；年齡56～76〔平均(61.27±12.35)〕歲。納入標準：所有患者符合中國腦出血診治指南(2014)診斷標準，患者發(fā)病時間<6 h，經(jīng)頭顱CT或磁共振成像(MRI)等影像學(xué)檢查證實，均為首次發(fā)病。排除標準：由于創(chuàng)傷性顱腦損傷、顱內(nèi)腫瘤、血管畸形、淀粉樣變性、抗凝藥物等引起的繼發(fā)性腦出血者，6 h內(nèi)繼發(fā)腦疝需急診手術(shù)者，合并心、肺、肝、腎、血液系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病者，近期(6個月內(nèi))有缺血性腦卒中、重大外傷、腦出血和手術(shù)史者。另選60例本院體檢證實的健康成年人為對照組，其中男35例，女25例；年齡52～74〔平均(60.13±11.56)〕歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本項目經(jīng)本院倫理委員會批準。

1.2顱內(nèi)血腫量估算 根據(jù)發(fā)病后的頭部CT或MRI計算血腫量，應(yīng)用多田式公式計算顱內(nèi)血腫量的估測，根據(jù)血腫量將患者分為小血腫組(<10 ml)、中血腫組(10～30 ml)、大血腫組(>30 ml)各20例。

1.3miRNA-124的檢測 所有患者在發(fā)病后6 h內(nèi)、健康者體檢時，分別采集靜脈血10 ml，在2 h內(nèi)作如下處理：4℃條件下3 000 r/min離心10 min，取上清液，在4℃ 3 000 r/min，進一步離心10 min，將所得的血清標本分裝于無RNA酶和DNA酶的凍存管中，-80℃保存，待集中檢測。采用 TRIzol法提取血漿總RNA。采用Takara公司的Mir-X miRNA First-Strand Synthesis Kit合成試劑盒進行逆轉(zhuǎn)錄。采用Takara公司的qRT-PCR試劑盒檢測說明書檢測miRNA-124。采用2-ΔΔCT法計算miRNA-124的相對表達量。

1.4統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS22.0軟件進行t檢驗、單因素方差分析、LSD比較法。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清中miRNA-124比較 對照組miRNA-124水平(4.76±0.59)明顯低于研究組(9.29±3.15，t=11.27，P=0.00)。

2.2不同血腫量血清miRNA-124比較 隨著血腫量增多ICH患者血清中miRNA-124升高(F=117.16，P<0.05)。ICH患者中miRNA-124隨著出血量的增多表達增高，呈正相關(guān)。見表1。

表1 ICH患者不同血腫量血清中miRNA-124比較

3 討 論

ICH發(fā)病兇險，發(fā)病30 d的病死率高達35%～52%，僅約20%的患者在6個月后能夠恢復(fù)生活自理能力〔2〕。因此，尋求一種快速、有效的診療手段是目前研究的關(guān)鍵。隨著社會的不斷發(fā)展、科學(xué)技術(shù)的不斷更新，近年來基因芯片技術(shù)迅速發(fā)展，因循環(huán)miRNAs是高度穩(wěn)定的，且在樣本(血漿或血清)中有很長的半衰期，利用定量實時聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)技術(shù)，在當(dāng)前具有較高靈敏度和特異性的臨床實驗室中，循環(huán)miRNAs可被快速、有效的定量。逐漸成為疾病早期診斷的新型生物標志物〔7，8〕。而miR-124作為一種腦組織特異性miRNA，其表達水平的改變與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生密切相關(guān)，如缺血性腦卒中、腦腫瘤、創(chuàng)傷性顱腦損傷、阿爾茨海默病等〔9〕。

miRNA-124在ICH患者血漿的表達水平臨床研究較少，Zifeng等〔10〕研究表明，miR-124在大鼠腦出血過程中的表達水平與大鼠血漿和腦組織中的表達水平有顯著同步性升高結(jié)果相符合。楊劍宏〔11〕研究，miRNA-124在腦出血患者中呈高表達，與本研究結(jié)論相符合。有研究表明，miR-124 可通過抑制下游靶基因 RhoGDIA，抑制血管平滑肌和內(nèi)皮細胞增殖、遷移能力，使血管壁修復(fù)能力受損，易導(dǎo)致腦出血發(fā)生〔12〕，同本研究結(jié)果結(jié)合，隨著miRNA-124表達的升高是否存在ICH患者再次出血的可能，有待進一步分析及研究。還有研究闡述，miR-124作為一個重要、多效能的miRNA，廣泛表達于外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，不僅可促進神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育成熟，而且參與神經(jīng)損傷后的修復(fù)〔13〕。

綜上，ICH后miRNA-124標志物的檢測可用于ICH的輔助診斷，也可用來評估ICH出血嚴重程度。但本研究也具有一定的臨床局限性，如miRNA-124在血液中表達的個體差異、入組病例數(shù)較少等，仍需多中心、大樣本加以驗證。