全自動HE 染色封片質(zhì)量的影響因素分析

蘇哲彬

（中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九〇〇醫(yī)院 福建 福州 350025）

病理切片指的是應(yīng)用病理組織學(xué)方法將包埋在石蠟塊里的病變組織進(jìn)行染色，然后采用顯微鏡進(jìn)一步檢查病變并作出病理診斷的過程。全自動HE 染色指的是采用蘇木素和伊紅對組織細(xì)胞進(jìn)行染色來區(qū)分細(xì)胞的形態(tài)的過程，能實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞水腫、變性、壞死以及炎性細(xì)胞浸潤等異常病理學(xué)改變的鑒定[1]。然而采用HE 染色方法對病理切片進(jìn)行染色，依然會存在染色質(zhì)量不佳的情況，而病理切片的質(zhì)量會直接影響診斷的準(zhǔn)確性和及時性。目前臨床上關(guān)于影響全自動HE 染色封片質(zhì)量不佳的因素鮮有報道?，F(xiàn)以我院病理科制作的并采用全自動HE 染色封片的病理切片作為研究對象，對病理切片的觀察指標(biāo)進(jìn)行單因素和多因素分析，找出影響全自動染色封片質(zhì)量的因素?，F(xiàn)將研究結(jié)果報道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018 年1 月—2019 年6 月我院病理科制作的并采用全自動HE 染色封片的病理切片410 片作為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理學(xué)確診為腫瘤或正常組織；②能夠獲取足夠的組織標(biāo)本；③是經(jīng)外檢診斷之后剩余的組織樣本。

1.2 方法

1.2.1 全自動HE 染色

全自動HE 染色封片機(jī)對病理切片的染色過程：①采用二甲苯對切片去蠟；②采用酒精對切片脫水清洗；③采用蘇木紫液染色；④采用鹽酸酸洗；⑤在流水上進(jìn)行浸潤清洗，使得細(xì)胞核變成藍(lán)色；⑥采用伊紅液色染色，再使用酒精清洗；⑦采用二甲苯展開透明；⑧蓋片和封片、貼注標(biāo)簽。

1.2.2 切片質(zhì)量評估標(biāo)準(zhǔn)

切片質(zhì)量從切片完整、厚度均勻、裂痕、褶皺、污染物、存在氣泡或外溢膠液、透明度、染色清晰、裱貼、編號、標(biāo)簽這十項(xiàng)的評分來評估，每項(xiàng)滿分為十分，總分一百分，得分越高切片質(zhì)量越好。切片的分級標(biāo)準(zhǔn)為：≥90 分評為甲級片；75 ～89 分評為乙級片；60 ～74 分評為丙級片；≤59 分評為丁級片。將368 片甲級片和乙級片納入對照組，將42 片丙級片和丁級片納入觀察組。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察兩組切片的固定液、染色時間、溫度、酒精分色時間、切片殘余石蠟、脫水試劑、組織厚度、脫水機(jī)處理組織不當(dāng)?shù)取?/p>

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

使用SPSS23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，計數(shù)資料用[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較；采用單因素分析及多因素回歸分析找出全自動HE 染色封片質(zhì)量的影響因素，以P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 全自動HE 染色封片質(zhì)量的單因素分析

單因素結(jié)果表明：兩組的固定液、染色時間、溫度、酒精分色時間、切片殘余石蠟、脫水機(jī)處理組織不當(dāng)相比較，有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）,見表1。

表1 單因素分析[n(%)]

2.2 全自動HE 染色封片質(zhì)量的多因素分析

以單因素分析中具有統(tǒng)計學(xué)意義的影響因素（固定液、染色時間、溫度、酒精分色時間、切片殘余石蠟、脫水機(jī)處理組織不當(dāng)）為自變量，以封片質(zhì)量為因變量。多因素分析結(jié)果顯示：全自動HE 染色封片質(zhì)量不佳的保護(hù)因素是固定液為AAF 液，危險因素是溫度＜25℃或＞30℃、切片殘余石蠟、脫水機(jī)處理組織不當(dāng)（P＜0.05），見表2。

表2 多因素分析

3.討論

全自動HE 染色具有染色質(zhì)量好、效率高、操作簡單等優(yōu)勢，被廣泛應(yīng)用于病理切片染色。

本研究發(fā)現(xiàn)全自動HE 染色封片質(zhì)量不佳的保護(hù)因素是固定液為AAF 液，危險因素是溫度＜25℃或＞30℃、切片殘余石蠟、脫水機(jī)處理組織不當(dāng)。AAF 液的成分包含甲醛、乙醇、冰醋酸等，冰醋酸能夠?qū)崿F(xiàn)快速固定組織的功能，甲醛能夠使得固定均勻，甲醛和乙醇的共同作用能夠有效對組織進(jìn)行脫水，使得切片組織能較好的保持原本的形態(tài)，進(jìn)而使得封片質(zhì)量較好[2]。而丙醇單獨(dú)作為固定液時，能實(shí)現(xiàn)完全沉淀蛋白質(zhì)的作用，但對細(xì)胞核的固定作用較差，使得染色效果較差；乙醇單獨(dú)作為固定液時，能較好的固定切片組織和沉淀蛋白質(zhì)，但沉淀的核蛋白在水中會被溶解，使得切片組織染色質(zhì)量不好。當(dāng)溫度＜25℃或＞30℃時，會導(dǎo)致染液變性、沉淀、凝固，最后導(dǎo)致封片質(zhì)量不佳。所以應(yīng)當(dāng)將病理切片以及染料放入恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)保持在最佳的染色溫度。當(dāng)病理切片上有石蠟殘余時，會出現(xiàn)蘇木素-伊紅染色時不著色、蘇木素染色不理想、伊紅發(fā)生褪色等問題，導(dǎo)致封片質(zhì)量不佳。所以，應(yīng)當(dāng)使用二甲苯對蠟塊組織進(jìn)行多次脫蠟，進(jìn)行染色前檢查病理切片上的石蠟是否已經(jīng)清除干凈[3]。當(dāng)室內(nèi)溫度較低或試劑更換不及時會導(dǎo)致在酒精脫水環(huán)節(jié)和二甲苯脫酒精環(huán)節(jié)出現(xiàn)脫水機(jī)處理組織不當(dāng)?shù)那闆r，從而引起組織的不完全浸蠟，使得組織脫水后仍然存在甲酸、酒精、水分等雜質(zhì)，當(dāng)對切片組織進(jìn)行烤片時，在細(xì)胞表面黏附的石蠟會浸入細(xì)胞內(nèi)并且難以脫出，導(dǎo)致病理切片進(jìn)行染色時，浸入細(xì)胞內(nèi)的石蠟會阻擋水溶性染色液的浸入，使得病理切片部分區(qū)域無法染色，導(dǎo)致封片質(zhì)量較差[4-5]。

綜上所述，全自動HE 染色封片質(zhì)量不佳的保護(hù)因素是固定液為AAF 液，危險因素是溫度＜25℃或＞30℃、切片殘余石蠟、脫水機(jī)處理組織不當(dāng)，應(yīng)選擇AAF 液作為切片組織的固定液，將病理切片以及染料放入恒溫培養(yǎng)箱，進(jìn)行染色前清除干凈病理切片上的石蠟。