P16在宮頸癌及癌前病變脫落細(xì)胞中表達(dá)的臨床意義研究 *

李美波 晁 遠(yuǎn) 宋安輝 黃志嫻 葉健威

廣東省惠州市第六人民醫(yī)院 316200

宮頸癌是威脅女性健康的世界性問(wèn)題，90%以上病例由人乳頭瘤病毒(HPV)引起，長(zhǎng)期持續(xù)高危型HPV感染會(huì)導(dǎo)致高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)瘤變(HSIL)，進(jìn)而發(fā)展為宮頸癌[1]。P16是一種腫瘤抑制基因，直接參與腫瘤的形成與進(jìn)展[2]。一過(guò)性的HPV感染不會(huì)影響細(xì)胞周期調(diào)控，但HPV持續(xù)性感染則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的16蛋白地過(guò)表達(dá)，因此16蛋白可以作為宮頸癌前病變的HPV型別獨(dú)立的生物標(biāo)志物[3]。目前16蛋白已廣泛應(yīng)用于宮頸組織病理檢查的鑒別診斷，但在細(xì)胞學(xué)中應(yīng)用價(jià)值還未完全明確。因此，本課題探討16免疫細(xì)胞化學(xué)染色在診斷宮頸癌前病變及宮頸癌的中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2019年5—10月同時(shí)在我科行宮頸脫落細(xì)胞P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色及宮頸活檢的108例患者的病理資料。患者年齡25～65歲，平均年齡(46.53±4.27)歲；已婚受試者81例(75.00%)，未婚受試者27例(25.00%)；已育受試者75例(69.44%)，未育受試者33例(30.56%)；疾病類型：宮頸癌4例，HSIL 38例，LSIL 34例，宮頸炎32例。

1.2 P16蛋白的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)及判讀 P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色由廣州江元醫(yī)療科技有限公司提供的全自動(dòng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色系統(tǒng)完成，染色實(shí)驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按照廠家的試劑、儀器說(shuō)明書執(zhí)行操作。結(jié)果的判讀由2位高年資病理醫(yī)師雙盲復(fù)診閱片，診斷結(jié)果不一致時(shí)需重新閱片分析至最終做出一致的診斷。

1.3 P16蛋白陽(yáng)性切片的判讀標(biāo)準(zhǔn)[4](1)P16陽(yáng)性細(xì)胞判讀：任意強(qiáng)度的胞核或胞核與胞漿染成棕黃色的鱗狀細(xì)胞判讀為陽(yáng)性細(xì)胞；局限性胞漿染色或與背景一致的弱染色判讀為陰性細(xì)胞。(2)細(xì)胞核改變的判讀：0分=P16染色全陰性；1分=P16陽(yáng)性細(xì)胞+不伴有上述核異常改變的；2分= P16 陽(yáng)性細(xì)胞+只伴有1項(xiàng)上述核異常改變的；3分=P16陽(yáng)性細(xì)胞+核質(zhì)比增加(50%)+任意1項(xiàng)上述核異常改變；4分= P16 陽(yáng)性細(xì)胞+所有細(xì)胞核漿比增加+大于等于2項(xiàng)上述核異常改變。P16染色陽(yáng)性的切片判定：核評(píng)分≥2分。

1.4 病理結(jié)果的判讀 以陰道鏡活檢后組織學(xué)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)?；顧z結(jié)果的判斷：采用HE染色，由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師解讀。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS18.0軟件系統(tǒng)處理分析，采用χ2檢驗(yàn)比較不同組間P16免疫表達(dá)差異，分析P16免疫染色在宮頸細(xì)胞學(xué)病變中診斷價(jià)值。通過(guò)McNemar檢驗(yàn)計(jì)算P16免疫染色診斷宮頸高級(jí)別及以上病變的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組不同宮頸病變的P16免疫細(xì)胞化學(xué)表達(dá)的陽(yáng)性率 宮頸癌、HISL、LISL、宮頸炎組患者P16蛋白陽(yáng)性率見表1，總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；宮頸癌及HISL組P16蛋白陽(yáng)性率顯著高于宮頸炎組、LISL，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.01)。提示P16蛋白隨著宮頸病變程度的加重，陽(yáng)性率不斷增加。

表1 P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色的陽(yáng)性分布情況

2.2 P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色的在宮頸癌及HISL病變中表達(dá)情況 以組織病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，P16 蛋白檢測(cè)結(jié)果與組織病理診斷結(jié)果進(jìn)行比較，P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色在宮頸癌及HISL病變中表達(dá)的敏感度為95.24%(40/42)，特異度為80.30%(53/66)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為75.47%(40/53)，陰性預(yù)測(cè)值為96.36%(53/55)。提示P16蛋白細(xì)胞免疫具有對(duì)宮頸癌及HISL有較好的提示作用。如表2所示。

表2 P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色的在宮頸癌及HISL病變中表達(dá)情況(n)

3 討論

大量的研究表明宮頸癌的發(fā)生可通過(guò)對(duì)癌前病變的檢查和處理得以有效控制。西方國(guó)家的經(jīng)驗(yàn)顯示，宮頸癌發(fā)生率在密切篩查的人群中明顯下降。我國(guó)對(duì)于宮頸癌及其癌變的篩查，采用的篩查方法主要是傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)，傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)特異度較高，然而敏感性較低，導(dǎo)致檢出率低，漏診率較高，而另一種篩查方式——HPV檢查因費(fèi)用昂貴而難以在基層醫(yī)院廣泛開展與普及。因此，有必要尋找一種適合我國(guó)國(guó)情的宮頸癌篩查方法，其敏感性和特異性都應(yīng)高于我國(guó)當(dāng)前廣泛開展的宮頸癌主要篩查手段——液基細(xì)胞學(xué)，同時(shí)篩查費(fèi)用低、操作簡(jiǎn)便，易于在各級(jí)醫(yī)院開展，且能最大限度地篩查出宮頸病變。P16基因是一種直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因，多項(xiàng)研究表明，P16蛋白在反應(yīng)性宮頸病變或正常宮頸細(xì)胞中呈陰性或微量表達(dá)，而在宮頸上皮內(nèi)病變中異常表達(dá)[5]。目前，已有大量研究證實(shí)P16免疫組織化學(xué)染色可顯著提高宮頸組織學(xué)樣本中HSIL及宮頸癌診斷的準(zhǔn)確性，并能增加觀察者之間的重復(fù)性，P16蛋白的免疫組織化學(xué)染色已廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐，協(xié)助病理醫(yī)師判斷宮頸病變級(jí)別。然而，P16蛋白的臨床應(yīng)用目前僅限于組織學(xué)，在細(xì)胞涂片中表達(dá)及應(yīng)用價(jià)值還未完全明確。

有部分研究開始應(yīng)用P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色來(lái)進(jìn)行輔助檢查。孫麗艷等[6]研究發(fā)現(xiàn)P16免疫細(xì)胞染色不僅可以作為宮頸腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷的輔助手段，而且有助于區(qū)分HSIL和LSIL。莊粵冰等[7-8]研究認(rèn)為P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)顯著提高了診斷宮頸癌的靈敏度和特異度，同時(shí)降低了假陽(yáng)性率和假陰性率。本研究結(jié)果顯示，在宮頸癌及其癌前病變患者的P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢查中，P16在宮頸癌及HSIL中有較高的陽(yáng)性表達(dá)率，在LSIL及宮頸炎中陽(yáng)性表達(dá)率較低，總體差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明了P16表達(dá)在宮頸癌及其癌前病變中存在一定的差異，且通過(guò)對(duì)宮頸癌、HSIL、 LSIL、宮頸炎等P16表達(dá)的分析來(lái)看，疾病越嚴(yán)重陽(yáng)性表達(dá)率越高。進(jìn)一步分析P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色在宮頸癌及HISL病變中表達(dá)的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值，分別為95.24%、 80.30%、75.47%、96.36%，表明了該檢測(cè)方法對(duì)高級(jí)別及以上有著較高的敏感度和特異性，間接提示了P16可作為理想的診斷宮頸癌的標(biāo)志物。

綜上所述，在宮頸脫落細(xì)胞中，P16在宮頸癌及高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變中存在過(guò)度表達(dá)的現(xiàn)象，采用P16免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)法加強(qiáng)對(duì)P16表達(dá)情況的檢測(cè)，對(duì)宮頸癌的防治有著十分重要的意義。