成人過敏性紫癜腎炎外周血Treg/Th17細(xì)胞軸表達(dá)與中醫(yī)證型的相關(guān)性＊

薛 雪，柳 強(qiáng)，王小琴＊＊，袁 軍，韓四萍

（1. 湖北中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床學(xué)院 武漢 430061；2. 湖北省中醫(yī)院腎病科 武漢 430061）

過敏性紫癜是全身免疫性小血管炎，臨床特點(diǎn)為紫癜樣皮疹，常伴關(guān)節(jié)和消化道癥狀，出現(xiàn)腎臟受累稱為過敏性紫癜腎炎(Henoch-schonlein purpura nephritis,HSPN)，主要表現(xiàn)為血尿和（或）蛋白尿，甚則腎功能損傷[1]。HSPN 是一種常見的繼發(fā)性腎病，所有年齡段均可發(fā)生，好發(fā)于兒童，在兒科疾病中被認(rèn)為是一類典型的自限性疾病，成人發(fā)病則不然，病情較患兒嚴(yán)重，腎臟受累后會尤其明顯[2]。流行病學(xué)資料顯示，成人HSPN 發(fā)病率呈上升趨勢，病情復(fù)雜，易反復(fù)發(fā)作，治療棘手。目前該病發(fā)病機(jī)制仍不明確，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療亦存在爭議，有限的幾項(xiàng)隨機(jī)對照研究結(jié)果顯示皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及支持治療效果并不理想[3-5]。因此進(jìn)一步研究該病的發(fā)病機(jī)制并尋求有效的中西醫(yī)結(jié)合治療手段十分必要。

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell,Treg cell)和輔助性T 細(xì)胞 17(T helper 17 cell,Th17 cell)是 CD4+T 淋巴細(xì)胞來源的亞群，對維持機(jī)體免疫平衡至關(guān)重要[6]。Treg細(xì)胞主要通過細(xì)胞因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)和轉(zhuǎn)化生長因子-β 在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用，既能抑制不恰當(dāng)免疫反應(yīng),又能限定免疫應(yīng)答的范圍、程度及作用時(shí)間,從而維持免疫穩(wěn)態(tài)[7]。叉頭翼狀螺旋核轉(zhuǎn)錄因子3(Forkhead/winged helix nuclear transcription factor 3,Foxp3)高表達(dá)于CD4+CD25+Treg 細(xì)胞，是Treg的特征性標(biāo)志,亦是其特異性轉(zhuǎn)錄因子。而Th17 細(xì)胞主要通過分泌促炎細(xì)胞因子來介導(dǎo)自身免疫的發(fā)生發(fā)展，由于高水平分泌白介素-17(Interleukin-17,IL-17)而被命名為Th17 細(xì)胞，維甲酸受體相關(guān)孤兒受體γt(Retinoic receptor-related orphan receptor γt,RORγt)是其特異性轉(zhuǎn)錄因子[8]?，F(xiàn)已觀察到在多種自身免疫性腎病中都廣泛存在著Treg/Th17細(xì)胞軸平衡失調(diào)[9-13]。隨病情加重，Treg/Th17 細(xì)胞軸失衡也更加明顯。但目前尚不清楚該細(xì)胞軸與成人HSPN 的發(fā)病是否相關(guān)。本研究通過分析成人HSPN患者外周血Treg/Th17細(xì)胞軸的表達(dá)，進(jìn)一步研究該病的發(fā)病機(jī)制，同時(shí)探討該細(xì)胞軸失衡與中醫(yī)證型之間的相關(guān)性，為臨證運(yùn)用中醫(yī)藥辨證論治提供理論基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

研究組43例成人HSPN患者來自湖北省中醫(yī)院腎病科門診（過敏性紫癜性腎炎隊(duì)列研究JDZX2015194），其中男性19 例，女性24 例，年齡20-65 歲，平均年齡（37.33±10.47）歲；平均病程（55.65±37.54）月。對照組為13 名健康受試者，其中男性6 名，女性7 名，年齡26-56歲，平均年齡（32.85±9.45）歲。兩組研究對象性別、年齡的比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究得到湖北省中醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)并取得所有受試者的知情同意（倫理批件號：HBZY2019-C37-01）。

1.1.1 研究組（HSPN受試者）診斷標(biāo)準(zhǔn)

西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)：2011 年中華醫(yī)學(xué)會主編《臨床診療指南-腎臟病學(xué)分冊》（人民衛(wèi)生出版社）HSPN 診斷標(biāo)準(zhǔn)。

中醫(yī)病名及中醫(yī)本證證型診斷標(biāo)準(zhǔn)：參照2019年1 月由中華中醫(yī)藥學(xué)會發(fā)布，湖北省中醫(yī)院牽頭修訂的中醫(yī)臨床診療指南中紫癜腎（過敏性紫癜腎炎）中病名及中醫(yī)本證證型診斷。

1.1.2 研究組（HSPN受試者）納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18-60歲；②符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者；③經(jīng)腎臟病飲食改良(modification of diet in renal disease,MDRD)公式計(jì)算的腎小球?yàn)V過率＞60 mL·（min·1.73m2）-1；④24 h 尿蛋白定量≤3.0 g；⑤提供知情同意并配合完成研究所需要的流程。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠期或哺乳期婦女；②正在參與干預(yù)性臨床實(shí)驗(yàn)的患者；③既往3 個(gè)月內(nèi)或正在因HSPN 接受皮質(zhì)激素及免疫抑制劑治療者；④1 型或2型糖尿病患者；⑤美國紐約心臟病學(xué)會心功能分級Ⅲ級或Ⅳ級心力衰竭患者，即有基礎(chǔ)心臟疾病，體力活動(dòng)明顯受限，小于一般體力活動(dòng)甚至休息狀態(tài)下即可出現(xiàn)疲乏、心悸、氣喘或心絞痛癥狀的患者；⑥病毒性肝炎或肝硬化患者；⑦艾滋病毒感染患者；⑧惡性腫瘤患者；⑨既往接受超過1個(gè)月的透析治療，和（或）器官或骨髓移植患者；⑩既往診斷為多囊腎等遺傳性腎臟疾病患者。

1.1.3 對照組（健康受試者）納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18-60 歲；②血、尿、糞便常規(guī)，肝腎功能，血脂等項(xiàng)目在體檢報(bào)告中屬于正常范圍；③提供知情同意。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有高血壓、糖尿病、冠心病、高尿酸血癥或高脂血癥等慢性病病史者；②既往有遺傳病病史者；③既往有支氣管哮喘、皮肌炎、濕疹、甲狀腺炎、潰瘍性結(jié)腸炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊柱炎、腎小球腎炎等自身免疫、過敏性疾病病史者；④惡性腫瘤患者；⑤合并急性感染者；⑥合并病毒性肝炎、尖銳濕疣等慢性感染性疾病者。

1.2 主要試劑和儀器

PerCP Mouse Anti-Human CD4(SK3)（貨號347324）、FITC Mouse Anti-Human CD25（貨號555431）、PE Mouse anti-Human Foxp3（貨 號 560852）、Human Th1/Th2/Th17 phenotyping Kit（貨號 560751）、破膜劑 FACS Permeabilizing Satution2（貨號340973）、紅細(xì)胞裂解液FACSTM Lysing Solution (10X)（ 貨 號 349202）、BD GolgiStop?Protein Transport Inhibitor（貨號51-2092KZ）均購自美國 BD 公司；TRIzol 液購自 Ambion 公司(貨號15596026)；cDNA 第一鏈合成試劑盒購自 TAKARA 公司(貨號 639505)；SYBR Green PCR 試劑盒購自 KAPA Biosystems 公司(貨號 KM4101)；DNase I 生產(chǎn)廠家為立陶宛Fermentas 公司（貨號AM2295）；聚合酶鏈反應(yīng)引物由武漢天一輝遠(yuǎn)生物科技有限公司合成；IL-17、IL-10 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒購自Bioswamp 公司（IL-17 貨號 HM10198，IL-10 貨號 HM10203）。FACS Calibur 流式細(xì)胞儀購自美國BD 公司；熒光定量聚合酶鏈擴(kuò)增儀(儀器型號CFX-Connect96)購自美國Bio-Rad公司。

1.3 研究方法

1.3.1 檢測Treg細(xì)胞

采用流式細(xì)胞術(shù)測定CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+百分率。取兩只試管，分別標(biāo)記為樣本檢測管及陰性對照管。分離受試者外周血單個(gè)核細(xì)胞，按照標(biāo)準(zhǔn)操作調(diào)整細(xì)胞懸液濃度。向試管中加入4℃Anti-CD4-PerCP 及Anti-CD25-FITC 單克隆抗體，常溫避光孵育20 min。再加入紅細(xì)胞裂解液2 mL，混勻后室溫避光孵育10 min。固定重懸細(xì)胞后加入破膜劑常溫避光孵育10 min，加入Anti-Foxp3-PE，室溫避光孵育20 min，洗滌重懸處理后上機(jī)檢測。通過Cellquest 軟件進(jìn)行收集分析數(shù)據(jù)。

1.3.2 檢測Thl7細(xì)胞

采用流式細(xì)胞術(shù)測定CD4+IL-17A+細(xì)胞/CD4+細(xì)胞百分率。取兩只試管，分別標(biāo)記為樣本檢測管及陰性對照管。分離受試者外周血單個(gè)核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，按照標(biāo)準(zhǔn)操作濃度加入BD GolgiStop?蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑刺激細(xì)胞之后，混勻放置細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 h。固定破膜處理后向試管中加入4℃Human Th1/Th2/Th17 phenotyping Kit 中 的 CD4-PerCP-Cy5.5 與IL-17A-PE 抗體，室溫避光孵育30 min 后洗滌、重懸上機(jī)檢測。通過Cellquest軟件進(jìn)行收集分析數(shù)據(jù)。

1.3.3 檢測Foxp3 mRNA、RORγt mRNA

采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)方法測定。106個(gè)細(xì)胞的離心管中加入 TRIzol 液 1.0 mL 提取總 RNA，利用 TAKARA 試劑盒進(jìn)行cDNA 第一鏈合成，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。Primer Premier 5.0 軟件參照GenBank cDNA 序列設(shè)計(jì) Foxp3、RORγt 及 βActin 引物，具體序列如下：Foxp3 5’-ACCAAGGCTTCATCTGTG-3’，5’-CTCTGGGAATGTGCTGTT-3’，產(chǎn)物大小 216 bp；RORγt 5’ -TCCACTACGGGGTTATC-3’ ， 5’ -TGTCCCTCTGCTTCTTG-3’，產(chǎn)物大小 171 bp；內(nèi)參βActin 5’ -ACACTGTGCCCATCTACG-3’ ， 5’ -TGTCACGCACGATTTCC-3’，產(chǎn)物大小153 bp。采用SYBR Green PCR 試劑盒進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR 擴(kuò)增上下游引物各 5 μmol，反應(yīng)體系為 20 μL：SYBR Green Mix 10 μL，cDNA 模板 1 μL，ddH2O 8μL。反應(yīng)程序：95℃，3 min；95℃，5 s；56℃，10 s；72℃，25 s；39 個(gè)循環(huán)；65℃，5 s；95℃，50 s。擴(kuò)增結(jié)束后采用儀器自帶軟件qbase plus進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.3.4 檢測IL-17、IL-10

采 用 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 法 (Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定。予 IL-17、IL-10 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒檢測IL-17、IL-10 濃度。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 樣本量計(jì)算

根據(jù)第七版《流行病學(xué)》（王建華，2008，人民衛(wèi)生出版社）兩樣本均數(shù)比較的樣本含量估計(jì)計(jì)算公式。參照兒童紫癜性腎炎相關(guān)文獻(xiàn)[8]，過敏性紫癜腎炎患兒血清Treg 細(xì)胞陽性率為(3.1±1.1)%，正常兒童血清Treg 細(xì)胞陽性率為(4.9±1.4)%。兩組合并標(biāo)準(zhǔn)差為1.25。設(shè)α=0.05（雙側(cè)）、β=0.1；查表得f（0.05，0.1）=10.5。將各數(shù)值帶入公式計(jì)算后得出n=10。考慮研究組涉及與三種中醫(yī)證型的相關(guān)性研究，預(yù)估樣本量不少于30例；對照組樣本量不少于10例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 23.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料用(-)表示，計(jì)數(shù)資料用百分比表示。用科爾莫戈羅夫-斯米爾諾夫檢驗(yàn)（Kolmogorov-Smirnov test）判斷計(jì)量資料是否呈正態(tài)分布。符合正態(tài)分布的兩組計(jì)量資料間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間的比較采用方差分析。P<0.05為有顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 成人HSPN患者外周血Treg及Th17的表達(dá)水平

流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示研究組及對照組受試者外周血CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+百分率分別為(4.29±1.50)%和(6.44±2.90)%，提示成人HSPN 患者外周血Treg 表達(dá)水平較健康受試者下降(P<0.05（)圖1，表1）。研究組及對照組受試者外周血CD4+IL-17A+/CD4+百分率分別為(4.03±1.67)%和(2.65±1.55)%，提示成人HSPN 患者外周血Th17 表達(dá)水平較健康受試者升高(P<0.05（)圖2，表1）。

2.2 成人 HSPN 患者外周血 Foxp3 及 RORγt mRNA 的表達(dá)水平

實(shí)時(shí)定量PCR 檢測結(jié)果顯示研究組及對照組受試者外周血 Foxp3/βActin 分別為 1.26±0.04 和 1.29±0.05，提示成人HSPN 患者外周血Foxp3 mRNA 表達(dá)水平較健康受試者下降(P<0.05)。研究組及對照組受試者 外 周 血 RORγt/βActin 分 別 為 1.30±0.05 和 1.27±0.03，提示成人 HSPN 患者外周血 RORγt mRNA 表達(dá)水平較健康受試者升高(P<0.05)(表1)。

圖1 健康受試者/HSPN患者外周血Treg表達(dá)

圖2 健康受試者/HSPN患者外周血Th17表達(dá)

表1 成人HSPN外周血Treg與Th17、Foxp3與RORγt mRNA、IL-10與IL-17表達(dá)結(jié)果比較

2.3 成人HSPN患者血清IL-10及IL-17的濃度

ELISA 檢測結(jié)果顯示研究組及對照組受試者血清IL-10 的濃度分別為（106.57±9.47）pg/mL 和（174.21±32.18）pg/mL，提示成人 HSPN 患者血清 IL-10 水平較健康受試者明顯下降(P<0.01)。研究組及對照組受試者血清 IL-17 的濃度分別為（362.13±67.53）pg/mL 和（167.09±24.97）pg/mL。提示成人HSPN 患者血清IL-17水平較健康受試者顯著升高(P<0.01)(表1)。

2.4 成人HSPN患者中醫(yī)證型分布情況

本研究中氣陰兩虛證患者23 例，其中男性11 例，女性 12 例，平均年齡（36.22±12.73）歲，平均病程（49.48±21.81）月；脾腎氣虛證患者12 例，其中男性4例，女性 8 例，平均年齡（38.33±7.33）歲，平均病程（43.00±18.01）月；肝腎陰虛火旺證患者8例，其中男性4 例，女性 4 例，平均年齡（39.00±7.45）歲，平均病程（92.38±67.15）月。各組在年齡、性別、病程方面差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

2.5 不同中醫(yī)證型的成人HSPN 患者外周血相關(guān)免疫指標(biāo)表達(dá)結(jié)果

成人HSPN 氣陰兩虛證患者CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+百分率(3.64±1.25)較脾腎氣虛證患者(5.29±1.47)顯著降低(P<0.01)。氣陰兩虛證患者IL-10 濃度[(103.37±9.40)pg·mL-1]較 脾 腎 氣 虛 證 患 者 [(112.86±8.29)pg·mL-1]顯著降低(P<0.01)。肝腎陰虛火旺證患者 IL-17 濃度[(419.34±61.73)pg·mL-1]較氣陰兩虛證患者[(358.99±70.09)pg·mL-1]升高(P<0.05)。肝腎陰虛火旺證患者IL-17 濃度[(419.34±61.73)pg·mL-1]較脾腎氣虛 證 患 者 [(330.02±40.46)pg·mL-1]顯 著 升 高 (P<0.01)(表 3)。

3 討論

在本研究中，研究結(jié)果表明成人HSPN 患者外周血Treg 細(xì)胞百分率與Treg 特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA 及其有效細(xì)胞因子IL-10 的表達(dá)水平明顯下降，低于健康受試者。而Th17 細(xì)胞百分率與Th17 特異性轉(zhuǎn)錄因子RORγt mRNA 及其分泌的細(xì)胞因子IL-17的表達(dá)水平顯著增加，高于健康受試者。從而證實(shí)成人HSPN患者存在Treg/Th17細(xì)胞軸免疫失衡。Treg細(xì)胞抑制炎癥反應(yīng)并維持免疫穩(wěn)態(tài)而Th17 細(xì)胞引起自身免疫和炎癥。其中IL-10發(fā)揮抑制局部炎癥反應(yīng)作用同時(shí)也是Treg 體內(nèi)外主要誘導(dǎo)增殖和促生長的細(xì)胞因子[14]；而前炎性細(xì)胞因子IL-17 則具有強(qiáng)大的促炎作用，能生產(chǎn)多種促炎趨化和細(xì)胞因子誘發(fā)自身免疫和炎癥[15]。CD4T細(xì)胞亞群并非固定不變，當(dāng)受到不同細(xì)胞因子刺激時(shí)，它們可以轉(zhuǎn)化為其他亞型。HSPN 在一系列免疫炎癥反應(yīng)中發(fā)生，促炎環(huán)境又進(jìn)一步導(dǎo)致Th17 細(xì)胞分化過多，惡性循環(huán)導(dǎo)致疾病不斷發(fā)展，病情反復(fù)。以上結(jié)論與既往紫癜性腎炎患兒的相關(guān)研究結(jié)果相符[16-17]。所以機(jī)體維持Treg/Th17 細(xì)胞軸的平衡至關(guān)重要，在很大程度上將會避免自身免疫和炎癥反應(yīng)發(fā)生。因此糾正HSPN 患者Treg/Th17 細(xì)胞軸失衡可以作為治療該病的策略及研究方向。

表2 成人HSPN患者中醫(yī)證型分布情況比較

表3 不同中醫(yī)證型的成人HSPN患者外周血相關(guān)免疫指標(biāo)表達(dá)結(jié)果比較

古代中醫(yī)典籍中并無“過敏性紫癜腎炎”的病名，近代中醫(yī)多將其歸屬于“葡萄疫”“紫斑”“尿血”等范疇。2010 年國家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)?？苾?yōu)勢病種腎病協(xié)作組根據(jù)該病血尿、蛋白尿、皮疹、紫癜等臨床表現(xiàn)，將其命名為“紫癜腎”[18]。結(jié)合臨床急性發(fā)作與遷延反復(fù)的特點(diǎn)，常把該病分為急性期與慢性（遷延）期兩個(gè)階段來辨證論治?；颊呒毙云诙嘁蝻L(fēng)熱、毒邪致病，熱毒入血，燔熾營血，擾動(dòng)腎絡(luò)，迫血妄行，血液不循常道溢于脈外肆虐發(fā)為紫斑、血尿。急性期過后實(shí)邪入里進(jìn)入遷延期，火熱熏灼，熱毒耗傷陰血，虛火內(nèi)生，迫血妄行；壯火極易食氣，氣虛不能攝血，血溢脈外；離經(jīng)之血留積腎絡(luò)，蓄結(jié)為瘀。該病總體病理性質(zhì)當(dāng)屬氣血陰陽失調(diào)，虛實(shí)夾雜。虛證乃氣虛與陰虛共存；實(shí)證乃瘀血與熱毒互結(jié)，共同構(gòu)成該病發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)。目前，多種免疫性疾病Treg/Th17細(xì)胞軸失衡與中醫(yī)病證之間的相關(guān)性研究是近年來的研究熱點(diǎn)之一，但關(guān)于HSPN 的研究報(bào)道甚少。在慢性免疫性血小板減少癥的研究中發(fā)現(xiàn)，在本虛方面，Treg計(jì)數(shù)在氣虛患者中最低，其次為陰虛患者[19]。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者不同中醫(yī)證型外周血Th17/Treg 細(xì)胞表達(dá)特點(diǎn)的研究中發(fā)現(xiàn)該病以痰、濕為基本病理因素，臨證有寒化、熱化、兼瘀等證候變化，其中，兼熱、兼瘀的患者其Th17 細(xì)胞均為高表達(dá)[20]。此外，在乙肝相關(guān)性慢加急性肝衰竭的研究中，瘀熱患者多處于疾病的初期及中期，此時(shí)機(jī)體處于免疫炎癥反應(yīng)亢進(jìn)狀態(tài)，Th17 細(xì)胞及相關(guān)因子IL-17A 升高明顯，隨著病程進(jìn)展至末期，正氣虧虛明顯，Treg 細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 mRNA 表達(dá)逐漸下降[21]。結(jié)合“紫癜腎”該病發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)及Treg/Th17 細(xì)胞軸失衡的研究結(jié)論，考慮成人HSPN 患者Treg 細(xì)胞軸表達(dá)下降可能與機(jī)體氣虛及陰虛密切相關(guān)，而Th17細(xì)胞軸表達(dá)上升可能與體內(nèi)瘀熱偏亢相關(guān)。與上述既往研究中免疫炎癥性疾病不同病理因素與相應(yīng)免疫指標(biāo)的變化趨勢相似[19-21]。

本研究發(fā)現(xiàn)，在成人HSPN 慢性（遷延）期中醫(yī)本證證型中以氣陰兩虛證最為多見，其次為脾腎氣虛證及肝腎陰虛火旺證。肺氣虛衛(wèi)外功能下降易感受外邪發(fā)病，脾氣虛不能統(tǒng)攝，血溢脈外，腎氣虛不能封藏，精微下注，發(fā)為血尿、蛋白尿；陰虛火旺迫血妄行，外滲于肌膚見紫斑，內(nèi)走臟腑脈絡(luò)見血尿。氣陰兩虛證患者臨床常表現(xiàn)為皮膚紫癜反復(fù)，易感冒，血尿，蛋白尿，腰酸乏力，口干咽干等癥狀，與肺、脾、腎三臟虛損有很大關(guān)系。脾腎氣虛證患者以蛋白尿血尿并見，倦怠乏力，氣短懶言，口淡不渴，食少腹脹，下肢輕度水腫為常見癥狀，主要累及脾、腎兩臟。肝腎陰虛火旺證患者以頭暈耳鳴，目干澀痛，手足心熱，盜汗，大便干燥，腰膝酸軟為主要表現(xiàn)，累及肝、腎兩臟。隨病情進(jìn)展終致陰陽俱虛，脾陽虧虛水濕不得運(yùn)化，中焦升降失調(diào)，腎陽虛衰化氣行水失功，下焦開闔無權(quán)，水濕停聚外滲肌膚，臨證出現(xiàn)面浮肢腫、尿少，脾腎衰敗后濕濁毒邪內(nèi)聚彌漫三焦，小便不通與納差嘔惡并見，發(fā)為“慢性腎衰竭”“關(guān)格”重癥。本研究納入的HSPN患者腎小球?yàn)V過率均大于60 mL·(min·1.73m2)-1，隨著腎功能進(jìn)一步下降，陰損及陽，陰陽俱虛，當(dāng)屬“慢性腎衰病”的范疇，本研究暫不討論。

此外，研究結(jié)果提示HSPN 氣陰兩虛證型患者外周血Treg及IL-10的表達(dá)水平較其他中醫(yī)證型下降明顯。結(jié)合Treg和IL-10能夠抑制不恰當(dāng)免疫反應(yīng)的特點(diǎn)，不防推測臨床運(yùn)用益氣養(yǎng)陰方藥能夠升高HSPN患者外周血Treg 和IL-10 的表達(dá)水平,恢復(fù)自身免疫調(diào)節(jié)能力，抑制不恰當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)發(fā)生。而HSPN 肝腎陰虛火旺證型患者外周血IL-17濃度升高較其他證型明顯。由于IL-17 是強(qiáng)效促炎細(xì)胞因子，陰虛火旺日久內(nèi)熱與瘀血互結(jié)，故而運(yùn)用滋陰降火、清熱涼血方藥則能夠降低IL-17 的表達(dá)水平，在一定程度上抑制免疫炎癥的發(fā)生發(fā)展。在整個(gè)過程中，機(jī)體Treg/Th17 細(xì)胞軸失衡與氣血陰陽失調(diào)變化密切相關(guān)。因此，在調(diào)節(jié)氣血陰陽治則的指導(dǎo)下，靈活應(yīng)用益氣養(yǎng)陰、清熱涼血等具體治法調(diào)節(jié)免疫，糾正Treg/Th17 細(xì)胞軸失衡不失為一條治療HSPN 的新思路，為下一步研究中醫(yī)藥治療該病提供理論基礎(chǔ)。