血漿制備時(shí)間和速凍方法對(duì)冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響觀察

河南省商丘市中心血站（476000）陳慧

冷沉淀是指新鮮冰凍血漿在合適溫度下融化分離出來(lái)的白色不溶物，其含有豐富的凝血因子Ⅷ（FⅧ）與纖維蛋白原（Fib），在血友病等凝血功能障礙性疾病治療中具有重要地位[1]。但FⅧ穩(wěn)定性較差，血漿制備時(shí)間、速凍方法等因素均會(huì)影響其活性[2]，為此，此次研究探討了血漿制備時(shí)間和速凍方法對(duì)冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響，以期尋找合適的制備方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2019年1月～2019年12月我站采集的96份血液樣品，每份均為400mL，所有血液均未見(jiàn)凝血，采集時(shí)間≤13 min。使用血液保存液Ⅲ進(jìn)行保持，保存溫度為2℃～6℃。

1.2 研究方法 ①新鮮冰凍血漿制備：以3800轉(zhuǎn)/min，10min，4℃的條件離心血液樣本分離血漿。分別留取2h、4h、6h、8h制備好的新鮮血漿各24份（A、B、O、AB四種血型每種各6份）。將制備后的新鮮血漿分裝為2份，分別標(biāo)記為A組和B組。其中A組血漿使用平板速凍機(jī)-55℃下速凍30min；B組則使用低溫保存箱速凍2h。所有新鮮冰凍血漿均在-20℃條件下保存。②冷沉淀制備：使用虹吸法制備冷沉淀，冷沉淀的容量為（40±5）ml，熱合后立即進(jìn)行速凍，并于-20℃條件下保存。③FⅧ和Fib檢測(cè)：將冷凍保存的冷沉淀于37℃水浴鍋中融化，使用凝固法進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中FⅧ活性和Fib含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本次研究使用SPSS22.0、Excel處理數(shù)據(jù)，F(xiàn)Ⅷ活性和Fib含量等定量資料以±s表示，行t/F檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中FⅧ活性比較 A、B兩組不同制備時(shí)間下FⅧ活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且B組FⅧ活性組內(nèi)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但A組FⅧ活性組內(nèi)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)附表1。

2.2 兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中Fib含量比較 A、B兩組不同制備時(shí)間下Fib含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），且A、B兩組組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見(jiàn)附表2。

3 討論

冷沉淀是臨床用于凝血功能障礙性疾病治療的常用血液制品，其主要成分為凝血因子和蛋白。新鮮冰凍血漿是指新鮮采集的全血經(jīng)低溫離心后取上清冷凍而來(lái)，是冷沉淀的直接來(lái)源[3]。如何有效控制FⅧ活性是制備新鮮冰凍血漿的關(guān)鍵，此次研究對(duì)比了不同血漿制備時(shí)間和速凍方法對(duì)冷沉淀FⅧ活性和Fib含量的影響，此次研究根據(jù)血漿制備時(shí)間和速凍方法不同將96份血液樣品共分為了8組，結(jié)果顯示各組獲得的冷沉淀均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但采用低溫冰箱速凍法冷沉淀的B組在不同制備時(shí)相下的FⅧ活性均低于采用平板速凍法沉淀的A組，且隨著制備時(shí)相延長(zhǎng)，兩組FⅧ活性均有不同程度下降，這表明速凍方法與制備時(shí)間均影響冷沉淀中FⅧ活性，平板速凍法優(yōu)于低溫冰箱速凍法，且隨著制備時(shí)間延長(zhǎng)FⅧ活性會(huì)不斷下降。而對(duì)比兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中Fib含量，組內(nèi)差異和組間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn)ib含量受制備方法和時(shí)間影響較小，這可能與Fib體外穩(wěn)定性較好，半衰期較長(zhǎng)有關(guān)[4][5][6]。綜上所述，在冷沉淀制備過(guò)程中血漿制備時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，且采用平板速凍法沉淀較好，可作為首選制備方法。

附表1 兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中FⅧ活性比較（±s,IU/袋）

附表1 兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中FⅧ活性比較（±s,IU/袋）

組別 例數(shù) 2h 4h 6h 8h F P A組 12 77.96±10.35 74.12±8.06 71.35±7.28 70.68±7.14 0.604 >0.05 B組 12 68.04±8.33 59.14±7.23 52.08±6.31 50.94±5.97 3.562 <0.05 t 2.587 4.793 6.929 7.347 P<0.05 <0.05 <0.05 <0.05

附表2 兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中Fib含量比較（±s,mg/袋）

附表2 兩組不同血漿制備時(shí)間下冷沉淀中Fib含量比較（±s,mg/袋）

組別 例數(shù) 2h 4h 6h 8h F P A組 12 112.41±12.46 117.82±12.57 114.25±12.66 118.96±13.58 0.234 >0.05 B組 12 110.98±13.51 116.01±11.98 115.08±13.19 116.75±12.89 0.175 >0.05 t 0.270 0.361 0.157 0.409 P>0.05 >0.05 >0.05 >0.05