人工繁育冬蟲(chóng)夏草與野生冬蟲(chóng)夏草的質(zhì)量對(duì)比研究

★ 陳培武 蘇楊青 李小鳳（華潤(rùn)江中制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司 南昌 330004）

冬蟲(chóng)夏草Cordyceps sinensis（Berk.）Sacc.為麥角菌科真菌寄生在蝙蝠蛾科昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)上的子座和幼蟲(chóng)尸體的干燥復(fù)合體，具有補(bǔ)腎益肺、止血化痰的功效［1］。我國(guó)冬蟲(chóng)夏草主要分布于西藏、青海、四川、云南、甘肅等省區(qū)海拔3 600～5 200 m 的局部高山草甸地帶［2］。研究發(fā)現(xiàn)冬蟲(chóng)夏草的主要成分有蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草素、脂肪、氨基酸、生物堿（腺苷、脲苷）和30 余種微量元素［3-6］。冬蟲(chóng)夏草在國(guó)內(nèi)外被視為珍品，因價(jià)格昂貴，素有“黃金草”之稱(chēng)。但因市場(chǎng)需求量巨大，野生資源匱乏，蟲(chóng)草市場(chǎng)始終呈現(xiàn)供不應(yīng)求的現(xiàn)象，而且過(guò)度的開(kāi)發(fā)也使高原地區(qū)的生態(tài)遭到嚴(yán)重破壞，加劇了野生蟲(chóng)草資源萎縮的危險(xiǎn)。近年來(lái)，在政府的大力扶持下，人工繁育的冬蟲(chóng)夏草品種相繼問(wèn)世，而人工繁育品種與野生品種的質(zhì)量差異也備受關(guān)注。本文結(jié)合《中國(guó)藥典》中規(guī)定的冬蟲(chóng)夏草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從性狀、有效成分含量測(cè)定、重金屬及有害物質(zhì)檢查三個(gè)方面，對(duì)人工繁育的冬蟲(chóng)夏草及來(lái)自青海、四川、西藏加查、西藏江達(dá)4 個(gè)產(chǎn)地的野生蟲(chóng)草的質(zhì)量進(jìn)行對(duì)比研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；A3 原子吸收分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）；Agilent6890N，ECD 檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫公司）。

1.2 試藥 腺苷對(duì)照品（110879-200202）、脲苷（110887-201803）對(duì)照品、重金屬、農(nóng)藥殘留標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定院；乙腈為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純；

1.3 藥材 人工繁育冬蟲(chóng)夏草（西藏）來(lái)源于亳州中信中藥飲片廠(chǎng)，人工繁育冬蟲(chóng)夏草（湖北）1和人工繁育冬蟲(chóng)夏草（湖北）2 來(lái)源于江西樟樹(shù)天齊堂中藥飲片有限公司，青海冬蟲(chóng)夏草購(gòu)于益豐大藥房，四川冬蟲(chóng)夏草購(gòu)于江西省中醫(yī)院藥劑科，西藏加查和西藏江達(dá)冬蟲(chóng)夏草來(lái)源于河北省安國(guó)藥材市場(chǎng)。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀檢查 對(duì)人工繁育及野生冬蟲(chóng)夏草的性狀進(jìn)行檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：人工蟲(chóng)草的直徑約0.4～0.6 cm，表面顏色呈深黃色，與來(lái)自青海的野生蟲(chóng)草相比，除直徑較小、顏色略淺外，其他各項(xiàng)性狀無(wú)明顯差異。人工繁育冬蟲(chóng)夏草與野生品種的性狀均符合藥典規(guī)定。

2.2 腺苷、脲苷含量的測(cè)定

2.2.1 供試品溶液的制備 分別取人工繁育冬蟲(chóng)夏草、野生冬蟲(chóng)夏草粉末各0.2 g，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，精密加入90 %甲醇10 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流30 min，放冷，用90 %甲醇補(bǔ)重，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 稱(chēng)取腺苷對(duì)照品適量，加90%甲醇制成每毫升含腺苷0.4108 mg 的溶液。另稱(chēng)取脲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升含0.4202 mg 的溶液。

2.2.3 色譜條件 C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈—水（4∶96）；柱溫為35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL。

2.2.4 測(cè)定結(jié)果 人工繁育冬蟲(chóng)夏草腺苷含量與青海野生冬蟲(chóng)夏草無(wú)明顯差異，略低于來(lái)自四川、西藏加查和西藏江達(dá)的野生蟲(chóng)草，但所檢人工繁育品種和野生蟲(chóng)草均符合藥典規(guī)定的冬蟲(chóng)夏草中腺苷含量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；而蟲(chóng)草中另一種主要的生物堿成分脲苷的含量在人工繁育品種和野生品種間無(wú)明顯差異。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 腺苷、脲苷含量測(cè)定結(jié)果 %

2.3 重金屬檢測(cè)

2.3.1 檢測(cè)方法 根據(jù)《中國(guó)藥典》（2015 年版）四部通則2321 鉛、鎘、砷、汞、銅中B 法進(jìn)行樣品處理及檢測(cè)［7］。

2.3.3 檢測(cè)結(jié)果 如表2 所示，人工繁育冬蟲(chóng)夏草的重金屬砷（As）含量為0.4 mg/kg，符合藥典規(guī)定，而來(lái)自青海、四川、西藏加查和西藏江達(dá)的野生冬蟲(chóng)夏草As 檢測(cè)含量均超出藥典標(biāo)準(zhǔn)2.0 mg/kg；人工繁殖冬蟲(chóng)夏草重金屬Pb、Cu 均低于青海野生冬蟲(chóng)夏草；西藏加查草重金屬Pb、Cu 低于人工繁殖冬蟲(chóng)夏草；人工繁殖冬蟲(chóng)夏草重金屬Hg、Cd 與四個(gè)不同產(chǎn)地的野生蟲(chóng)草無(wú)明顯差異。

表2 冬蟲(chóng)夏草重金屬檢驗(yàn)結(jié)果 mg/kg

2.4 農(nóng)藥殘留檢測(cè)

2.4.1 檢測(cè)方法 根據(jù)《中國(guó)藥典》（2015 年版）四部通則2341 農(nóng)藥殘留量測(cè)定法第一法進(jìn)行9 種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量測(cè)定法樣品處理及檢測(cè)。

2.4.2 檢測(cè)結(jié)果 人工繁育冬蟲(chóng)夏草和來(lái)自青海、四川、西藏加查、西藏江達(dá)的野生蟲(chóng)草中均未檢出六六六、滴滴涕、五氯硝基苯，因此農(nóng)藥殘留項(xiàng)均符合藥典規(guī)定

3 討論

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，人工繁育冬蟲(chóng)夏草與來(lái)自青海、四川、西藏等地的野生冬蟲(chóng)夏草在外觀性狀、有效成分含量及農(nóng)藥殘留檢測(cè)方面并無(wú)明顯差異，均符合藥典規(guī)定；而人工繁育冬蟲(chóng)夏草重金屬Pb 和Cu 的檢測(cè)結(jié)果明顯低于來(lái)自青海的野生蟲(chóng)草，且人工蟲(chóng)草重金屬As 的檢測(cè)結(jié)果更是遠(yuǎn)低于來(lái)自4 個(gè)產(chǎn)地的野生品蟲(chóng)草。查閱文獻(xiàn)也有人工培育冬蟲(chóng)夏草重金屬檢驗(yàn)結(jié)果優(yōu)于野生冬蟲(chóng)夏草的論述［8］。

實(shí)驗(yàn)表明，人工繁育的冬蟲(chóng)夏草與野生冬蟲(chóng)夏草按藥典標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)性狀、有效成分含量和農(nóng)藥殘留無(wú)明顯質(zhì)量差異，同時(shí)人工繁育的冬蟲(chóng)夏草可以更有效的控制重金屬等危害物質(zhì)的含量，提高冬蟲(chóng)夏草使用的安全性。另一方面，目前野生冬蟲(chóng)夏草為珍貴稀缺藥材，人工繁育品的出現(xiàn)可以補(bǔ)足市場(chǎng)空缺，同時(shí)避免過(guò)度采挖蟲(chóng)草而造成高原生態(tài)環(huán)境的破壞。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果為使用人對(duì)冬蟲(chóng)夏草購(gòu)買(mǎi)提供參考、為冬蟲(chóng)夏草有害物質(zhì)控制提供方向，同時(shí)也為進(jìn)一步對(duì)人工繁育蟲(chóng)草的質(zhì)量研究做了鋪墊。由于本次實(shí)驗(yàn)樣品較少，今后還將進(jìn)一步對(duì)人工繁育冬蟲(chóng)夏草進(jìn)行深入研究。