大腸埃希氏菌用于食品檢驗培養(yǎng)基質(zhì)量控制的研究

培養(yǎng)基及試劑質(zhì)量控制對于保證食品檢測效果尤為重要，食品藥品監(jiān)督管理局等機構(gòu)均構(gòu)建了較為完善的培養(yǎng)基質(zhì)控體系。依據(jù)《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求》（GB 4789.28-2013）中的相關(guān)要求，在培養(yǎng)基微生物性能指標檢測中運用菌株進行測試，可以從水中或者食品中分離菌株完成測試工作。大腸埃希氏菌是食源性疾病的主要病原菌之一，為了提升培養(yǎng)基的質(zhì)量，本文設(shè)計了實驗進行分析，研究來源于地表水、果仁菠菜的大腸埃希氏菌ATCC 25922，以更好地提升食品檢驗培養(yǎng)基的質(zhì)量。

一、材料與方法

1.試驗菌株。試驗菌株選擇菌種保藏中心的E.coli ATCC 25922、微生物菌種保藏管理中心的CICC 24652、E.coli CICC 24176。

2.培養(yǎng)基。本實驗過程中選擇的培養(yǎng)基有麥康凱瓊脂（macconkey agar，MAC）、結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂（violet red bile agar，VRBA）、營養(yǎng)瓊脂（nutrient agar，NA）、HE瓊脂（hektoen enteric agar，HE）、胰蛋白胨大豆瓊脂（tryptic soy agar，TSA）、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（xylose lysine desoxycholate agar，XLD）、平板計數(shù)瓊脂（plate count agar，PCA）、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液（selenite cystine broth，SC）、李氏增菌肉湯（Listeria enrichment broth base，LB1，LB2），以及Bolton肉湯、7.5%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯、3%氯化鈉堿性蛋白胨水、10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯、胰酪胨大豆多粘菌素肉湯。

本試驗使用的試管為緩沖動力硝酸鹽發(fā)酵管（青島海博生物技術(shù)有限公司）和黏液酸發(fā)酵管（廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

3.實驗方法。（1）懸浮培養(yǎng)基的定量測試。針對測試菌株制備100CFU/mL-1000CFU/mL的工作菌懸液，制備10mL的磷酸緩沖鹽溶液（phosphate buffer saline，PBS），在20℃-25℃的環(huán)境下放置45min，然后對菌落計數(shù)，PBS培養(yǎng)基穩(wěn)定能力的評判標準為±50%的變化幅度。

（2）生長率的定量測試。結(jié)合食品安全培養(yǎng)基GB 4789.28-2013中的相關(guān)規(guī)定，菌株選擇性分離培養(yǎng)基的生長率為1.0-0.1，EMB、VRBA、MAC、VRB-MUG瓊脂于36℃±1℃環(huán)境下培養(yǎng)24h，液體培養(yǎng)基生長率≥0.7，菌株生長能力判斷指標為菌落特征、生長率情況。

（3）鑒定培養(yǎng)基測試。針對對照菌株、測試菌株分別接種TSA培養(yǎng)基、BHI肉湯，在36℃環(huán)境下培養(yǎng)18h。

二、結(jié)果與分析

1.培養(yǎng)基生長率定量測試結(jié)果。結(jié)合GB 4789.28-2013的相關(guān)規(guī)定，大腸埃希氏菌培養(yǎng)基類別有TSA、NA、PCA，培養(yǎng)基質(zhì)量合格的判斷標準為菌株生長率≥0.7，菌株生長率與培養(yǎng)基促生長能力之間為正比關(guān)系。研究測試菌株的實際生長情況發(fā)現(xiàn)，TSA培養(yǎng)基上生長率為1.0、0.9、1.1，NA培養(yǎng)基上生長率為1.1、1.1、0.9，PCA培養(yǎng)基上生長率為1.0、0.9、0.9；測試菌生長能力良好，在培養(yǎng)基定量質(zhì)控方面具有良好的運用價值。測試結(jié)果詳見表1。

2.選擇性增菌培養(yǎng)基測試結(jié)果。選擇性增菌培養(yǎng)基只允許特定微生物繁殖，對其他微生物生長幾乎都有抑制作用。大腸埃希氏菌對CIN-1培養(yǎng)基的測試結(jié)果為淺粉、粉紅色，邊緣不整齊，出現(xiàn)沉淀環(huán)；沙門氏菌顯色培養(yǎng)基為黃色；O157顯色培養(yǎng)基未生長，阪崎克羅諾桿菌培養(yǎng)基為白色；志賀氏菌顯色培養(yǎng)基為黃色。CICC 24176生長未被抑制，菌株不同，導(dǎo)致出現(xiàn)特異性酶反應(yīng)并出現(xiàn)一定的差異性，出現(xiàn)了菌株顯色差異。2株測試菌株的生長特性有所不同，由此進行培基定性質(zhì)控。詳見表2。

3.選擇性液體計數(shù)培養(yǎng)基測試結(jié)果。結(jié)合GB 4789.28-2013的相關(guān)要求，增菌培養(yǎng)基能夠在特定微生物中繁殖，同時對部分微生物的生長培養(yǎng)具有一定的抑制作用。研究顯示，菌株CICC 24652、ATCC 25922的生長情況均在一定程度上被抑制，CICC 24176的生長活動未被抑制，顯示亞硒酸鹽毒性對菌株CICC 24176不發(fā)生作用，原因是菌株CICC 24176中含有一定成分的特異性酶。菌株培養(yǎng)后菌落數(shù)＜110CFU，詳見表3。

4.懸浮培養(yǎng)基測試結(jié)果。結(jié)合GB 4789.28-2013的相關(guān)規(guī)定，培養(yǎng)基合格的判斷標準為菌落數(shù)變化±50%，測試方式為大腸埃希氏菌在大腸菌群、菌落總數(shù)、金黃色葡萄球菌PBS樣品中放置45min，得出菌株在PBS中的穩(wěn)定情況。測試結(jié)果顯示，PBS菌落中E.coli CICC 24176的變動數(shù)值為9%、E.coli ATCC 25922的變動數(shù)值20%、E.coli CICC 24652的變動數(shù)值為2.2%，說明測試菌株具有較強的穩(wěn)定性。詳見表4。

5.鑒定培養(yǎng)基及試劑測試結(jié)果。研究大腸埃希氏菌對8種鑒定培養(yǎng)基的測試結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在三糖鐵瓊脂中生長良好，A/A，產(chǎn)氣，不產(chǎn)硫化氫；酪蛋白瓊脂的菌落周圍無透明圈，培養(yǎng)基由綠變藍；醋酸鹽陽性，培養(yǎng)基變藍，在培養(yǎng)基鑒定上呈現(xiàn)出典型性特征，培養(yǎng)基實驗結(jié)果表現(xiàn)為陰性。詳見表5。

三、結(jié)論與討論

本實驗研究了食品培養(yǎng)基的生長特性，重點研究了菌株CICC 24652、CICC 24176的生長情況，由此來評判菌株測試在食品測控中的運用價值。實驗結(jié)果顯示，測試菌在培養(yǎng)基鑒定方面呈現(xiàn)出了不同的特征，CICC 24176的生長特性較為明顯，兩者在培養(yǎng)基的微生物指標評價上具有較強的相似性。

通過本文研究可知，大腸埃希氏菌質(zhì)控菌株在食品質(zhì)量安全檢測方面具有較大的運用價值，大腸埃希氏菌中不同類別間的差異也比較明顯。菌株CICC 24176在SC培養(yǎng)基的驗證過程中不受限制，對SC培養(yǎng)液進行深度分析，顯示亞硒酸鹽難以抑制全部的大腸埃希氏菌，部分菌株超氧化物歧化酶的活性較強，能夠提高食品的安全性，減少亞硒酸鹽對食品的不良侵害。菌株CICC 24652的動力特性不顯著，約一半大腸埃希氏菌中含有鞭毛，菌株鞭毛本身長短、個數(shù)等特性在一定程度上影響著大腸埃希氏菌的動力特性。

食物培養(yǎng)基質(zhì)控菌株在選擇層面，應(yīng)當(dāng)保證菌株生長特性的典型性，使其能夠符合相關(guān)的測試需求，并且注重不同菌株間的差異性。本次實驗選擇的菌株符合實驗要求，實驗具有較強的代表性，對食品安全檢測具有較強的參考意義。

作者簡介：王緒龍（1978-），男，漢族，山東莒南人，工程師，大學(xué)本科，研究方向為食品檢測。