乳腺癌p53與Ki-67和TopoⅡ的相關(guān)性研究及其預后價值探討

吳韶娜 方亞

（1長治市第二人民醫(yī)院病理科 山西 長治 046000）

（2廈門大學預防醫(yī)學系 福建 廈門 361005）

本研究擬通過p53、Ki-67和DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(TopoⅡ)各指標的蛋白檢測以及與臨床病理特征的關(guān)系和各蛋白之間的相關(guān)性，來探討其對乳腺癌患者的預后價值。

1.資料及方法

1.1 資料來源

廈門市某醫(yī)院2003年2月－2008年5月接受乳腺癌手術(shù)的乳腺癌病例。

1.2 檢測方法

所有標本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，采用二步法（EliVision試劑盒）檢測。采用已知乳腺癌陽性標本作陽性對照；以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

所有切片采用雙盲觀察，p53、Ki-67和TopoⅡ以細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。陽性百分率采用半定量判斷標準，即選5個不同高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，計算出其中陽性細胞的百分率。陽性細胞數(shù)＜10%為（-），10%～25%為（+），26%～50%為（++），＞50%為（+++）。

1.4 隨訪

所有患者均采用電話或者信件隨訪的方式。隨訪觀察的起點為患者手術(shù)日期，隨訪截止日期為2009年5月20日，隨訪觀察終點事件為復發(fā)、轉(zhuǎn)移或死亡。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，各組間率的比較采用χ2檢驗，配對資料采用McNemar檢驗，小概率事件采用Fisher確切概率法，數(shù)據(jù)相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，生存數(shù)據(jù)分析采用Kaplan-Meier法，采用Log-rank和Breslow法進行生存曲線的比較，生存因素分析采用Cox比例風險回歸模型，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

2.1 一般情況

共收集經(jīng)過病理學診斷的乳腺癌病例169例，均為女性，年齡23～90歲，平均48.17歲，平均隨訪時間23.18個月，其中26例復發(fā)，24例轉(zhuǎn)移，13例死亡。

2.2 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白在乳腺癌組織中的表達以及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

p53蛋白陽性率為37.3%（22/59），p53蛋白陽性率在ER陽性組和ER陰性兩組之間差異有統(tǒng)計學意義。Ki-67蛋白陽性率為57.9%（11/19），Ki-67蛋白陽性率在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計學意義，ER陽性組與ER陰性組的Ki-67蛋白陽性率差異有統(tǒng)計學意義。TopoⅡ蛋白陽性率為39.5%（17/43），TopoⅡ蛋白陽性率在ER陽性組和ER陰性兩組之間差異有統(tǒng)計學意義（表）。

表 p53、Ki-67、TopoⅡ蛋白表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

2.3 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表達之間的相關(guān)性分析

spearman相關(guān)分析顯示，Ki-67蛋白表達與ER蛋白表達呈正相關(guān)(rs=0.570，P＜0.05)， ER蛋白表達和PR蛋白表達呈正相關(guān)（rs=0.435，P＜0.05），p53蛋白表達和TopoⅡ蛋白表達呈正相關(guān)（rs=0.629，P＜0.05），即p53蛋白陽性表達率越高，TopoⅡ蛋白陽性表達率也越高。

2.4 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表達與乳腺癌患者預后的關(guān)系

以復發(fā)或轉(zhuǎn)移或死亡為乳腺癌患者預后的觀察終點，采用Kaplan-Meier法分析p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表達與乳腺癌患者預后之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，p53蛋白表達率不同，患者生存期也有明顯的不同（圖1），p53蛋白陽性患者的5年生存率為78%，p53蛋白陰性患者的5年生存率為89%，經(jīng)統(tǒng)計分析，兩者之間的差異有統(tǒng)計學意義（χ2=4.14，P=0.042），說明p53陽性患者的生存期比陰性患者的生存期短。Cox比例風險回歸模型分析，p53陽性患者發(fā)生終點事件的危險度（OR）是陰性患者的2.16倍。而Ki-67、TopoⅡ蛋白對患者預后均無統(tǒng)計學意義。

圖1 p53與患者預后的生存曲線

3.討論

分子標志物在乳腺癌診斷、判斷預后和治療方案中的價值越來越受到人們的重視。本研究對乳腺癌患者p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白聯(lián)合檢測，初步探討其在臨床的應用價值以及與預后的相關(guān)性，有助于評估乳腺癌患者的預后，并對臨床治療有一定指導意義。

本研究結(jié)果表明，PR受體陽性者p53蛋白陽性表達率高于PR陰性者，且ER受體陽性者p53蛋白陽性表達率高于ER陰性者，說明p53蛋白與ER、PR密切相關(guān)，從而可能通過ER、PR的表達來推測p53蛋白的表達情況。

TopoⅡ是存在于細胞核內(nèi)催化DNA拓撲異構(gòu)體相互轉(zhuǎn)換的一種酶，TopoⅡ含量和活性的降低可導致腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥。近年來免疫組化研究顯示，在乳腺癌中TopoⅡ可以作為細胞增殖的可靠指標［1］。TopoⅡ在正常細胞中不易檢測到，而在很多腫瘤中，尤其在低分化腫瘤內(nèi)呈高表達狀態(tài)。本實驗結(jié)果顯示，TopoⅡ蛋白陽性表達率在ER、PR受體分組間差異有統(tǒng)計學意義，說明TopoⅡ蛋白表達與ER、PR受體表達密切相關(guān)。

我們進一步探討了p53蛋白表達與TopoⅡ蛋白表達之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，p53蛋白表達與TopoⅡ蛋白表達呈正相關(guān)，即隨著p53陽性表達率的增高，TopoⅡ陽性表達率也增高，大多乳腺癌患者p53基因突變，導致p53蛋白過表達，可增加TopoⅡ蛋白表達，這可能是p53蛋白高表達的乳腺癌患者對化療藥物不敏感的原因之一，這也可能是p53陽性患者5年生存率低的原因之一，p53突變可能是乳腺癌病情進展惡化的重要因素。本研究結(jié)果還表明，p53陽性表達者發(fā)生終點事件的風險是陰性表達者的2.16倍，如此將p53對乳腺癌患者預后風險評估量化，可對乳腺癌生存預后有一定的參考價值。

Ki-67是在增殖細胞中表達的一種核抗原，也是目前較為肯定的核增殖標志物[2-3]。國內(nèi)外許多研究表明，Ki-67在多種惡性腫瘤中的表達遠高于相應的正常組織，可見Ki-67有可能作為篩檢癌前人群中髙危個體的生物學標志物。本研究顯示，Ki-67蛋白表達與ER受體呈正相關(guān)，說明隨著ER受體陽性表達率的增高，Ki-67蛋白陽性表達率也增高。

Ki-67和P53蛋白是乳腺癌中常用的檢測及預測評估患者治療及預后的免疫組化指標［4-5］。本研究結(jié)果顯示，p53可對乳腺癌患者進行預后風險評估，而TopoⅡ與p53密切相關(guān)，Ki-67與乳腺癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，以上提示，對乳腺癌患者進行上述指標檢測有助于評估腫瘤的臨床與預后，并對治療方案選擇有一定指導意義。