實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)在妊娠晚期孕婦GBS感染診斷中的應(yīng)用觀察

崔明

（濮陽(yáng)市婦幼保健院 河南 濮陽(yáng) 457000）

B 族溶血性鏈球菌（group B streptococcus,GBS）屬于革蘭陽(yáng)性兼性厭氧球菌，在人體中多位于泌尿生殖道及消化道，是新生兒敗血癥、腦膜炎及肺炎等疾病的誘發(fā)因素，具有較高的死亡率［1］。在導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和新生兒感染的致病菌中，GBS 是主要因素，其會(huì)造成妊娠晚期孕婦不良妊娠結(jié)局，危及母嬰生存質(zhì)量［2］。因此，為準(zhǔn)確篩查GBS 感染，幫助孕婦在早期接受規(guī)范治療，尋找一種高效的診斷方法尤為重要。目前細(xì)菌培養(yǎng)法是診斷GBS 感染的常用方法，但其培養(yǎng)周期長(zhǎng)，且容易受到陰道內(nèi)其他細(xì)菌影響而抑制GBS 生長(zhǎng)，導(dǎo)致診斷結(jié)果準(zhǔn)確率不高。實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（real-time polymerase chain reaction,real-time PCR）可用于直接快速檢測(cè)，且具有較高的敏感性。本研究探討妊娠晚期孕婦GBS 感染診斷中應(yīng)用realtime PCR 法的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年8 月至2019 年8 月在濮陽(yáng)市婦幼保健院產(chǎn)檢的380 例妊娠晚期孕婦。其中，GBS患者30 例，非GBS 患者350 例；年齡22～38 歲，平均（30.15±2.54） 歲；孕周35～37 周，平均（36.05±0.19）周。納入標(biāo)準(zhǔn)：①單胎妊娠；②檢查前1 周未使用陰道用藥、抗生素等，且無(wú)性生活；③患者及其家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①黏液膿性宮頸炎、衣原體感染及滴蟲(chóng)性陰道炎等生殖道感染；②精神系統(tǒng)異常，且無(wú)正常認(rèn)知、溝通能力；③不配合檢查或中途退出。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 采集標(biāo)本 擦去產(chǎn)婦外陰分泌物，在陰道下1/3 部位插入2 支拭子，361°旋轉(zhuǎn)1 周，收集陰道分泌物，置于無(wú)菌套管內(nèi)送檢；同時(shí)在肛門(mén)括約肌上2.5 cm 處插入2 根拭子，旋轉(zhuǎn)后采集直腸分泌物，置于無(wú)菌套管內(nèi)送檢。

1.2.2 GBS 培養(yǎng) 在哥倫比亞血瓊脂平板上分別接種陰道和直腸拭子，將孵育箱環(huán)境設(shè)置為5%的二氧化碳CO2、24～48 h 孵育。在血平皿上選取存在β 溶血菌落，實(shí)施CAMP 試驗(yàn)，采用VITEK 2 Compact 微生物鑒定系統(tǒng)（法國(guó)生物梅里埃股份有限公司），在維持約35℃溫度下進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)與鑒定。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR） 檢測(cè) 采用ABI 7500 型qRT-PCR 儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司）提取DNA，采用B 族鏈球菌核酸檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢驗(yàn)。當(dāng)2 種檢測(cè)結(jié)果不一致時(shí)，陰性為培養(yǎng)結(jié)果，陽(yáng)性為real-time PCR 檢測(cè)結(jié)果，可進(jìn)行重新培養(yǎng)確認(rèn)；若陽(yáng)性為培養(yǎng)結(jié)果，陰性為real-time PCR 檢測(cè)結(jié)果，可經(jīng)real-time PCR 法重新檢測(cè)，以證實(shí)PCR 檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3 觀察指標(biāo)

①將real-time PCR 法聯(lián)合細(xì)菌培養(yǎng)法的診斷結(jié)果作為GBS 感染診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，比較2 種診斷方法陽(yáng)性檢出情況。②分析2 種診斷方法的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 23.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 real-time PCR 法與細(xì)菌培養(yǎng)法診斷結(jié)果情況

380 例妊娠晚期孕婦中，經(jīng)real-time PCR 法聯(lián)合細(xì)菌培養(yǎng)法診斷有30 例GBS 感染者，陽(yáng)性率為7.89%；real-time PCR 法診斷有29 例GBS 感染者，陽(yáng)性率為7.63%；細(xì)菌培養(yǎng)法診斷有9 例GBS 感染者，陽(yáng)性率為2.37%。real-time PCR 法陽(yáng)性檢出率高于細(xì)菌培養(yǎng)法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 real-time PCR 法與細(xì)菌培養(yǎng)法的診斷效能

real-time PCR 法檢測(cè)的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性較細(xì)菌培養(yǎng)法高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1 real-time PCR 法與細(xì)菌培養(yǎng)法的診斷效能 （%）

3 討論

GBS 作為一種條件致病菌，多存在于女性生殖道內(nèi)，帶菌率可達(dá)30%，孕婦、新生兒等特殊人群是其感染的高危人群。因妊娠期孕婦免疫功能較低，陰道酸堿值改變，體內(nèi)糖原含量增加，且具有較高的孕激素和雌激素水平，容易造成陰道菌群失調(diào)，促使GBS 繁殖。孕婦感染GBS 后，容易造成產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎、敗血癥、宮內(nèi)感染、絨膜羊膜炎、流產(chǎn)及胎膜早破等；同時(shí)會(huì)經(jīng)產(chǎn)道垂直傳播或胎兒呼吸道傳播，導(dǎo)致新生兒感染，危及母嬰生命安全［3］。

目前，GBS 感染診斷方法包括細(xì)菌培養(yǎng)、PCR及核酸探測(cè)檢測(cè)等，其中檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)菌培養(yǎng)法，但其檢測(cè)難度高，且檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)達(dá)24～48 h、耗時(shí)長(zhǎng)，不適用于未行正規(guī)產(chǎn)檢、早產(chǎn)及胎膜早破的孕婦，容易因長(zhǎng)時(shí)間檢測(cè)而錯(cuò)過(guò)最佳的用藥時(shí)機(jī)，導(dǎo)致新生兒感染風(fēng)險(xiǎn)增加；同時(shí)該檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性容易受到多種因素的影響，直腸或陰道內(nèi)其他微生物的存在會(huì)抑制GBS 生長(zhǎng)，且采樣后標(biāo)本儲(chǔ)存的溫度、條件等也會(huì)導(dǎo)致結(jié)果誤差［4-5］。研究發(fā)現(xiàn)，在孕產(chǎn)婦分娩前4 h 給予抗生素治療，可較好地保護(hù)新生兒免受GBS 感染，因此為幫助妊娠晚期孕婦快速確診GBS 感染，選擇的檢測(cè)方法需具備結(jié)果直觀、操作便捷及培養(yǎng)時(shí)間短等特點(diǎn)，以提高母嬰的生存質(zhì)量［5］。

本研究結(jié)果顯示，real-time PCR 法陽(yáng)性檢出率較細(xì)菌培養(yǎng)法高，其檢測(cè)的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性均較細(xì)菌培養(yǎng)法高，表明在妊娠晚期孕婦GBS 感染診斷中應(yīng)用real-time PCR 法具有較高的價(jià)值，診斷的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性高，可為病情診斷、預(yù)后評(píng)估提供可靠依據(jù)。real-time PCR技術(shù)是一種高效、快速檢驗(yàn)的方法，可定量檢出GBS，且檢測(cè)時(shí)間較短，檢測(cè)結(jié)果可在提取標(biāo)本后2～4 h 獲取，易于批量操作；同時(shí)對(duì)于死亡的GBS也可檢測(cè)出，便于GBS 感染者早期接受治療，篩查方法可滿足產(chǎn)前和產(chǎn)時(shí)的要求［6-7］。而細(xì)菌培養(yǎng)法在診斷部分GBS 感染孕婦時(shí)，因β 溶血環(huán)的缺乏而出現(xiàn)陰性誤判，需采用qRT-PCR 定性。因此，相較于細(xì)菌培養(yǎng)法，real-time PCR 法更具優(yōu)勢(shì)，檢測(cè)結(jié)果可靠性、準(zhǔn)確性較高，且快速簡(jiǎn)便，可為GBS 感染早期確診治療提供參考依據(jù)，具有較高的臨床應(yīng)用前景和價(jià)值［8］。而在臨床實(shí)際檢測(cè)中，需嚴(yán)格規(guī)范檢驗(yàn)操作流程，加強(qiáng)質(zhì)量控制，在采集、保存及運(yùn)輸?shù)拳h(huán)節(jié)嚴(yán)格把控，以減少其他因素干擾而影響檢測(cè)結(jié)果，降低診斷的誤診率及漏診率。此外，針對(duì)感染GBS 的孕婦，通過(guò)及時(shí)有效的治療手段，可較好地提高新生兒生存質(zhì)量，降低因GBS 感染而導(dǎo)致的死亡，臨床需加強(qiáng)對(duì)攜帶GBS 孕婦的重視程度，避免不良妊娠結(jié)局。

綜上所述，在妊娠晚期孕婦GBS 感染診斷中應(yīng)用real-time PCR 法的診斷效能高，可為臨床診療提供可靠依據(jù)。