不同種源和不同肥料對(duì)前胡有效成分及產(chǎn)量的影響*

陳如兵 樓柯浪 吳曉俊 張春椿

1 浙江省中醫(yī)藥研究院 浙江 杭州 310007

2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053

前胡是傘形科前胡屬多年生草本植物白花前胡Peucedanum praeruptorum Dunn的干燥根，其味苦、辛，微寒，具有降氣化痰，散風(fēng)清熱。隨著臨床藥用逐漸加大，野生資源瀕臨枯竭。本研究旨在探究種源與肥料對(duì)前胡的影響，為探究更適合前胡的種植方式提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器：Alliance e2695高效液相色譜儀（waters公司）；PDA FLR檢測(cè)器（waters公司）；KQ2200DA型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；AR224CN型電子分析天平［奧豪斯儀器（上海）有限公司］。

1.2 試劑：白花前胡甲素、白花前胡乙素（純度均≥98.50%，購(gòu)于曼思特生物科技公司）；甲醇（色譜純）；三氯甲烷、二乙胺等均為分析純，水為去離子。

2 方法

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)：大田試驗(yàn)于2018～2019年間進(jìn)行，試驗(yàn)田位于浙江省杭州市淳安縣臨岐鎮(zhèn)。試驗(yàn)田按兩部分內(nèi)容同時(shí)展開。第一部分：一年生抽薹前胡種子、兩年生抽薹前胡種子、野生前胡種子以及使用前胡殘留根；第二部分：CK（不施肥）、施復(fù)合肥、施有機(jī)肥。播種時(shí)間為2018年三月春播，播種方式為條播，播種時(shí)間為一年，采收時(shí)測(cè)定小區(qū)產(chǎn)量，轉(zhuǎn)換成每公頃產(chǎn)量。

2.2 白花前胡甲素和白花前胡乙素的測(cè)定：分述如下。

2.2.1 色譜條件：C18色譜柱，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm，流動(dòng)相為A（甲醇）及B（水）兩相等度（75：25）洗脫，流速為1.0ml/min，采用PDA FLR檢測(cè)器。理論板數(shù)按白花前胡甲素峰計(jì)算應(yīng)不低于3000[1]。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取白花前胡甲素6mg，置于10ml棕色容量瓶中，加甲醇制成0.6mg/ml白花前胡甲素對(duì)照品的溶液；同上方法制備得到0.6mg/ml的白花前胡乙素對(duì)照品溶液，并都存于4℃冰箱備用。

2.2.3 線性關(guān)系考察：取標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml，5ml，10ml，15ml，20ml分別置于20ml容量瓶中，加甲醇定容搖勻，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)下進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。分別得到白花前胡甲素和白花前胡乙素的回歸方程：白花前胡甲素Y=22381X-233494，R2=0.9999，線性范圍 36～720μg/ml和白花前胡乙素Y=17048X-171386，R2=0.9999，線性范圍36～720μg/ml。

2.2.4 精密度考察：精密取對(duì)照品溶液，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.16%和1.28%，表明儀器的精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性考察：取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12，24h時(shí)按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.52%和0.91%，表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 重復(fù)性考察：精密稱取前胡樣品6份，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素的RSD分別為為0.27%和1.41%，表明該方法重復(fù)性好。

2.2.7 加樣回收考察：精密稱取前胡樣品6份，分別加入不同含量的白花前胡甲素和白花前胡乙素對(duì)照品，制得3份不同濃度的樣品，并且每個(gè)平行3份，按“2.2.1”色譜條件項(xiàng)測(cè)定，結(jié)果白花前胡甲素和白花前胡乙素RSD分別為0.73%和1.46%，表明方法準(zhǔn)確度好。

2.2.8 樣品含量測(cè)定：取干燥的前胡樣品細(xì)粉約0.50g，精密稱定，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷25ml，塞密，稱定重量，超聲處理10min，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液5ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。進(jìn)樣前用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，得供試品溶液。取供試品溶液10μl進(jìn)樣，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品中白花前胡甲素和白花前胡乙素的量。

2.3 數(shù)據(jù)處理：采用Excel2019、SPSS 25.0和Graph‐pad prism 8軟件分析作圖。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同種源與不同肥料對(duì)前胡產(chǎn)量的影響：由圖1可以看出，野生組的產(chǎn)量明顯低于其他組別，其次是兩年生組，而一年生和殘留根無(wú)顯著性差異，可見(jiàn)還是正常一年生的前胡種子產(chǎn)量相對(duì)較大；不施肥的CK組產(chǎn)量明顯低于施肥組，復(fù)合肥產(chǎn)量稍低于有機(jī)肥組，可見(jiàn)施肥有助于提高前胡的產(chǎn)量，有機(jī)肥的產(chǎn)量提高相對(duì)較高。

圖1 不同種源與不同肥料對(duì)前胡產(chǎn)量的影響

3.2 不同種源與不同肥料對(duì)前胡有效成分含量的影響：結(jié)果見(jiàn)圖2。種子年限對(duì)白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量存在著一定的影響，年限增大兩者含量有相應(yīng)的降低，其中對(duì)白花前胡乙素的影響較大。野生組白花前胡甲素的含量大于一年生組，同為一年生種子來(lái)源的殘留根組白花前胡甲素含量與一年生組無(wú)顯著性差異，CK組的白花前胡甲素含量遠(yuǎn)高于施肥的兩組。殘留根組與兩年生組的白花前胡乙含量明顯低于低于其他組別?？梢?jiàn)仿野生栽培能相對(duì)有效的增加前胡有效成分的含量，兩年生的種子與殘留根栽培的方式無(wú)利于前胡有效成分的積累，施肥也會(huì)一定程度降低前胡有效成分的積累。

4 討論

有效成分是評(píng)價(jià)中藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣的中藥指標(biāo)之一[2]，產(chǎn)量是影響中藥材經(jīng)濟(jì)效益的重要因素，因此本文通過(guò)測(cè)量前胡的有效成分與產(chǎn)量探究不同種源以及不同肥料對(duì)前胡的影響，從而尋求一種相對(duì)合適的前胡種植方式。不同的種源以及不同肥料，都會(huì)對(duì)中藥材有效成分的合成產(chǎn)生一定的影響，導(dǎo)致中藥材質(zhì)量產(chǎn)生差異。[3-6]本研究結(jié)果顯示，不同的種源對(duì)白花前胡乙素的影響較大，對(duì)有效成分總含量表現(xiàn)為野生＞一年生＞殘留根＞兩年生，其中一年生組與殘留根組無(wú)顯著性差異，野生組有效成分含量雖高但產(chǎn)量偏低，整體表現(xiàn)常規(guī)一年生種子仍然存在一定優(yōu)勢(shì)，筆者推測(cè)前胡種子年限增加不利于有效成分積累以及產(chǎn)量的提高。本文還考察了不同肥料對(duì)前胡藥材的影響，結(jié)果還表明了，施不施肥對(duì)白花前胡乙素的含量無(wú)顯著性差異，不施肥情況下白花前胡甲素的含量卻又顯著性增高，但不施肥情況下產(chǎn)量卻不盡人意。筆者推測(cè)肥料的施加可能會(huì)影響白花前胡甲素的積累。綜上所述，針對(duì)野生種子組以及不施肥組的有效成分總含量都相對(duì)較高的情況，筆者推測(cè)仿野生栽培模式可能更有利于前胡藥材的質(zhì)量的提升，對(duì)于仿野生栽培的研究需要更深一步的探討。

圖2 不同種源與不同肥料對(duì)前胡有效成分含量的影響