基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑的玫瑰花配方顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

胡飛鳳 吳美蘭 孟祥穎

1 浙江省藥品檢查中心 浙江 杭州 310013

2 浙江景岳堂藥業(yè)有限公司 浙江 紹興 312025

玫瑰花是薔薇科植物玫瑰Rose rugosa Thunb.的干燥花蕾，可用于肝胃氣痛，食少嘔惡，月經(jīng)不調(diào)，跌撲傷痛等[1]。玫瑰花中有多種化學(xué)成分，主要活性成分有揮發(fā)油、黃酮、多糖等[2]。玫瑰花配方顆粒是由玫瑰花經(jīng)提取、濃縮、干燥、制粒而成，在質(zhì)量控制上缺少飲片性狀等重要指標(biāo)，因此建立玫瑰花配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)很有必要性[3]。中藥指紋圖譜技術(shù)已經(jīng)成為國內(nèi)外公認(rèn)的控制中藥材質(zhì)量最有效的方法[4]，逐漸成為中藥配方顆粒質(zhì)量控制發(fā)展趨勢(shì)。通過出膏率、含量、薄層鑒別、特征圖譜等指標(biāo)建立了基于標(biāo)準(zhǔn)湯劑的玫瑰花質(zhì)量評(píng)價(jià)方法[5]，可為玫瑰花配方顆粒質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器：1260HPLC（安捷倫）；LGJ-10C冷凍干燥機(jī)（北京四環(huán)科儀）；煎藥壺30B2（康雅順電器有限公司）；GOODLOOK-1000全自動(dòng)薄層色譜成像系統(tǒng)（上海科哲）。

1.2 藥品及試劑：沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-201605，純度：90.8%）、玫瑰花對(duì)照藥材（批號(hào)：121508-201403），中國食品藥品檢定研究院。試劑乙腈、甲醇為色譜純；其他試劑均為分析純。

1.3 藥材：16批玫瑰花飲片（S1～S16）來源：山東濟(jì)南市平陰縣（S1～S4）、山東東營市墾利縣（S5～S8）、山東日照市莒縣（S9～S12）、湖州長興（S13～S14）、臨沂市平邑縣（S15～S16），均為薔薇科植物玫瑰Rosa rugosa Thunb.的干燥花蕾。由本實(shí)驗(yàn)室根據(jù)《中藥配方顆粒質(zhì)量控制與標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)要求》制備玫瑰花的標(biāo)準(zhǔn)湯劑。另取（S14～S16）分別制備3批配方顆粒樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 玫瑰花標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉和配方顆粒的制備：標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉：稱取玫瑰花100g，各加水10倍浸泡、煎煮2次，每次30min，濾過合并，濃縮至約100g，冷凍干燥，即得。配方顆粒：取玫瑰花飲片10kg，同法煎煮2次。減壓濃縮至相對(duì)密度為1.05～1.10的浸膏，噴霧干燥，得干膏粉；加入麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒，即得。

2.2 TLC法鑒別玫瑰花湯劑和配方顆粒中的指標(biāo)成分：具體如下。

2.2.1 供試品與對(duì)照藥材溶液制備：取玫瑰花標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉S1、配方顆粒S14～S16及對(duì)照藥材各1g，加甲醇20ml，超聲過濾，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液及對(duì)照藥材溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備：取沒食子酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3 TLC鑒別：吸取上述4種溶液各4μl，分別點(diǎn)于GF254薄層板上；以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5：4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視。相應(yīng)位置顯相同的沒食子酸暗色斑點(diǎn)，見下圖1。

圖1 玫瑰花配方顆粒薄層色譜圖

2.3 含量測(cè)定：具體如下。

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取沒食子酸對(duì)照品適量，加甲醇溶解并定容，制成濃度為29.40μg/ml的對(duì)照品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備：取玫瑰花標(biāo)準(zhǔn)湯劑或配方顆粒適量，精密稱取0.1g，精密加入甲醇50ml，超聲處理30min，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 色譜條件：Ultimate AQ C18（4.6mm×250.0mm，5μm）色譜柱；流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸（2：98）；檢測(cè)波長：274nm；流速：1ml/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量10μl。理論板數(shù)以沒食子酸計(jì)不得少于5000[6]。

2.3.4 線性關(guān)系：取沒食子酸對(duì)照品溶液的不同濃度(2.940μg/ml、14.70μg/ml、29.40μg/ml、44.10μg/ml、58.80μg/ml)。分別進(jìn)樣 10μl，得線性方程為 Y=36028X-8155.4，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。在2.940μg/ml～58.80μg/ml之間線性關(guān)系良好。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)：精密取0.1g6份，同法處理，計(jì)算沒食子酸的含量RSD為0.09%，該方法重復(fù)性良好。

2.3.6 加樣回收試驗(yàn)：精密稱取配方顆粒（S14)樣品0.05g，平行6份，各加入沒食子酸對(duì)照品1.176mg，各10μl注入HPLC，計(jì)算回收率99.6%，RSD2.35%，該方法回收率良好。

2.3.7 含量測(cè)定：分別對(duì)藥材、湯劑、配方顆粒樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率范圍12.60%～23.41%，沒食子酸含量范圍21.10mg/g～39.19mg/g，沒食子酸轉(zhuǎn)移率范圍26.46%～49.14%。三批顆粒出膏率、沒食子酸含量和轉(zhuǎn)移率均在該范圍內(nèi)。說明配方顆粒與湯劑相當(dāng)。

表1 16批標(biāo)準(zhǔn)湯劑和3批顆粒含量測(cè)定結(jié)果

2.4 特征圖譜的建立：具體如下。

2.4.1 對(duì)照品溶液制備：取沒食子酸對(duì)照品加50%甲醇溶解制成每1ml含30μg的溶液，即得。

2.4.2 供試品溶液制備：取玫瑰花標(biāo)準(zhǔn)湯劑凍干粉和配方顆粒樣品各約0.1g，精密加50%甲醇50ml，超聲30分鐘，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 色譜條件：采用WondasilTM C18柱（4.6mm×250mm，5μm）。以乙腈為流動(dòng)相A，以0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相B；檢測(cè)波長為274nm；柱溫為30℃。理論塔板數(shù)按沒食子酸峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。見表2。

表2 色譜條件表

2.4.4 方法學(xué)考察：通過對(duì)供試品穩(wěn)定性、精密度、重復(fù)性、中間精密度試驗(yàn)RSD＜2%；對(duì)不同柱子耐用性試驗(yàn)各主要色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間無明顯變化（RSD＜2%），表明該方法耐用性良好。

2.4.5 指紋圖譜：采用國家藥典委員會(huì)頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，以16批不同批次玫瑰花飲片制備的標(biāo)準(zhǔn)湯劑的HPLC圖譜色譜峰進(jìn)行自動(dòng)匹配，建立對(duì)照指紋圖譜，結(jié)果見圖2。

3 討論

圖2 16玫瑰花湯劑疊加圖譜（S1-S16）和對(duì)照?qǐng)D譜(R)

《中華人民共和國藥典》2015版中玫瑰花標(biāo)準(zhǔn)無薄層鑒別、含量及特征圖譜，無法對(duì)藥材有效質(zhì)量控制；玫瑰花配方顆粒傳統(tǒng)湯劑均是水提，為有效控制質(zhì)量，建立了以出膏率、含量和含量轉(zhuǎn)移率以及薄層鑒別和特征圖譜為指標(biāo)的玫瑰花配方顆粒質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，可為玫瑰花飲片和相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供一定的科學(xué)參考。